骨康胶囊及其组分酢浆草及芭蕉根对大鼠软组织损伤的治疗作用*

李靖， 杨健， 刘亭， 李勇军， 沈艳珍， 杨畅， 何彬， 王爱民**

(1.贵州医科大学 贵州省药物制剂重点实验室 & 省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室， 贵州 贵阳 550004； 2.贵州医科大学 药学院， 贵州 贵阳 550025； 3.贵州医科大学 民族药与中药开发应用教育部工程研究中心， 贵州 贵阳 550004； 4.贵州维康子帆药业股份有限公司， 贵州 修文 550200)

软组织损伤包括急性软组织损伤和慢性软组织损伤，急性软组织损伤指人体运动系统、皮肤以下、骨骼之外的组织受到不同致伤因素的作用，造成组织生理功能的暂时紊乱和组织急性破坏而产生损伤，但无骨折、脱位等[1-2]，其主要临床表现为局部疼痛肿胀、局部青紫瘀斑、功能障碍等[3-4]。目前西医常采用包扎、封闭或理疗等方法进行治疗，而中医则采用外敷、内服中药、针灸和推拿等方法治疗，且中医药治疗软组织损伤疗效显著[5-6]。骨康胶囊是贵州传统苗药复方制剂，主要由补骨脂、三七、续断、芭蕉根和酢浆草组成，具有滋补肝肾、强筋壮骨、通络止痛等功效[7-8]。临床上广泛用于骨性关节炎、骨折、骨质疏松症等病症，疗效显著[9-11]。本课题组前期对骨康胶囊的药效及炮制进行了系统性研究[12-14]，目前尚未见骨康胶囊促软组织损伤修复的报道，本研究将骨康胶囊及其芭蕉根和酢浆草成分用于大鼠急性软组织损伤模型，通过检测大鼠组胺含量变化及观察大鼠肌肉组织病理切片，探讨骨康胶囊及其芭蕉根和酢浆草成分的软组织损伤治疗作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1实验动物 SD大鼠体质量(220±20)g，饲养湿度40%～70%、温度20～25 ℃的环境中，实验前适应性饲养7 d。

1.1.2药品与试剂 骨康胶囊、芭蕉根药材、酢浆草药材均由贵州维康子帆药业股份有限公司提供，接骨七厘片购于湖南金沙药业有限责任公司，0.9%氯化钠注射液购于广西裕源药业有限公司，75%医用消毒酒精购于贵州鑫源卫生制品有限公司，大鼠组胺酶联免疫检测试剂盒购于南京建成生物工程研究所。

1.1.3仪器 超纯水机(四川沃特尔科技发展有限公司)、EL204电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)、DH6000BII型电热恒温培养箱(天津泰斯特仪器有限公司)、Varioskan LUX多功能酶标仪(美国，Thermo公司)、Thermo fresco 17低温高速离心机(美国，Thermo公司)、Leica成像显微镜(德国，徕卡公司)。

1.2 方法

1.2.1建立大鼠急性软组织损伤模型 造模前1 d 用剃毛刀去除大鼠臀部及大腿毛，用生理盐水擦拭干净，在大腿腘窝上2 cm处用记号笔标记。造模前，将SD大鼠用10 %水合氯醛(0.35 mL/100 g)腹腔注射进行麻醉，将大鼠左下肢拉直平放，固定在硬木板上，将1根20 cm长，直径与砝码相当的空心塑料管垂直放置在左下肢标记处(尽可能靠近标记点)，然后用重200 g的砝码，连续8次从空心管顶端沿空心管自由落体击中大鼠左下肢标记处[15]，造成大鼠左下肢局部急性软组织损伤(瘀血、肿胀)。除空白组外，其余各组均采用软组织损伤打击器(自制)，制造大鼠软组织损伤模型。肉眼观察验证造模成功与否：造模区打击后出现肿胀、皮下瘀血，但皮肤完整、无破损，触摸左下肢无骨折脱位征象，左下肢明显跛行，但无其他异常情况者确定造模成功。

1.2.2分组与给药 将80只大鼠随机分为8组，每组10只，即空白组(蒸馏水1 mL/100 g)、模型组(蒸馏水1 mL/100 g)、接骨七厘片组(阳性药，0.320 g/kg，为成人等效剂量1.2倍)、骨康胶囊[低(0.432 g/kg)、中(0.864 g/kg)、高(1.296 g/kg)]剂量组(分别为成人等效剂量1、2、3倍)、酢浆草组(0.432 g生药/kg，为骨康胶囊中酢浆草的含量)、芭蕉根组(0.648 g生药/kg，为骨康胶囊中芭蕉根的含量)。药物均以蒸馏水配制成混悬液，灌胃容积为1 mL/100 g，连续给药7 d，1次/d。

1.2.3测定大鼠血清组胺 末次给药后，予大鼠水合氯醛腹腔注射麻醉，腹主动脉采血，血液室温静置5 min，2 500 r/min 离心5 min，收集上清，保存、备用。按试剂盒操作说明测定大鼠血清组胺含量。

1.2.4组织形态学观察 末次给药后30 min颈椎脱臼处死大鼠，肉眼观察损伤局部皮下瘀血和肌肉肿胀程度。取损伤中心部位肌肉组织置10%福尔马林固定，石蜡包埋，HE染色，光镜下观察。参照文献[5,16-17]的评分标准进行评分。(1)充血、出血：血管大片充血或灶性出血(3分)，血管较多充血(2分)，血管少量充血(1分)，无充血、出血(0分)。(2)变性坏死：组织大片坏死(3分)，组织广泛变性(2分)，局部组织变性(1分)，无变性坏死(0分)。(3)炎症：大量炎性细胞弥漫浸润(3分)，较多炎性细胞片状浸润(2分)，少量炎性细胞散在浸润(1分)，无炎性细胞浸润(0分)。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 大鼠血清组胺水平

大鼠造模给药7 d后，模型组血清组胺含量高于空白组(P<0.05)，而与模型组比较，接骨七厘片组、骨康胶囊(中、高)剂量组血清组胺含量降低(P<0.05)，骨康胶囊低剂量组、酢浆草组、芭蕉根组血清组胺含量无明显变化(P>0.05)。见表1。

表1 各组大鼠血清组胺的变化Tab.1 Changes of serum histamine in

2.2 组织形态学观察

空白组可见正常组织结构肌肉，无肿胀及变性坏死，无组织水肿、出血及炎性细胞浸润，肌纤维条理清晰；模型组可见大量炎性细胞弥漫浸润，出血及肌纤维变性；接骨七厘片组、骨康胶囊(中、高)剂量组可见少量炎性细胞浸润，纤维排列较整齐；酢浆草组、芭蕉根组可见较多炎性细胞浸润、出血及肌纤维变性。组织形态学评分上，与空白组比较，模型组评分增加(P<0.01)；与模型组比较，接骨七厘片组、骨康胶囊(中、高)剂量组评分降低(P<0.05或P<0.01)，且骨康胶囊组呈剂量依赖性降低，而酢浆草组、芭蕉根组评分变化不明显，差异无统计学意义(P>0.05)。见表2和图1。

表2 各组大鼠组织切片形态学评分Tab.2 Morphological score of rat tissue sections

注：A为对照组，B为模型组，C为接骨七厘片组，D为骨康胶囊低剂量组，E为骨康胶囊中剂量组，F为骨康胶囊高剂量组，G为酢浆草组，H为芭蕉根组。图1 各组大鼠软组织损伤部位HE染色结果(400×)Fig.1 Observation of soft tissue injury site of rats in each group under light microscope (400×)

3 讨论

急性软组织损伤的病理过程主要是损伤组织发生无菌性炎症反应，导致炎症介质和促炎细胞因子释放[18-19]。组胺是常见的一种炎症介质，当组织受到损伤时便会释放组胺，其可通过H1受体起作用，使细动脉扩张，细静脉通透性增加，从而加速炎症反应[20-21]。当组胺含量降低时，炎症反应减轻，有利于软组织损伤修复。形态学是软组织损伤最基本的观察指标，也是直接反应软组织损伤恢复情况的指标，对软组织进行HE染色可观察到血管、组织结构及炎性浸润等恢复情况[22]。制造急性软组织损伤的方法较多，因砝码法具有造模时间短、成功率高、方法简单、成本小以及重复性高等优点，故本研究采用此方法造模进行实验[23]，并通过观察组胺含量和软组织形态，来考察骨康胶囊对软组织损伤的治疗作用。

实验结果表明，接骨七厘片组、骨康胶囊(中、高)剂量组大鼠血清中的组胺含量及组织形态学评分均降低，且骨康胶囊的下调作用呈剂量依赖性。骨康胶囊主要由补骨脂、三七、续断、芭蕉根及酢浆草组成[6-7]。据报道，酢浆草和芭蕉根具有清热解毒、消肿止痛、利尿等功效，含黄酮、香豆素等成分，具有较好的抗炎、抑菌和抗病毒作用[24-26]，但骨康胶囊中酢浆草、芭蕉根组分作用尚未明确。为了阐明骨康胶囊药效物质基础，进一步扩展其应用，本文对酢浆草和芭蕉根的软组织损伤修复作用进行了研究。实验结果表明，酢浆草组、芭蕉根组大鼠血清中的组胺含量及组织形态学评分均无明显变化。说明芭蕉根、酢浆草虽然具有较好的抗炎作用，但没有降低组胺，促进软组织损伤修复的作用，不是骨康胶囊促进软组织损伤修复的主药，其在组方中的作用还有待进一步研究。综上所述，骨康胶囊可促进大鼠软组织损伤修复，其作用机制可能是降低受伤局部组胺含量达到镇痛、消肿的作用。