深圳市某院病毒性腹泻患儿病原分布及季节流行特征

梁翠琼，汤美玲，谢治华

（深圳市龙华区中心医院儿科，广东 深圳 518110）

急性肠道感染是儿童常见的感染性疾病，50%～70%的儿童急性肠道感染是由病毒引起的[1]，儿童病毒性腹泻患病率存在显著地域和季节差异[2-4]。本研究调查深圳市龙华区中心医院病毒性腹泻患儿轮状病毒、诺如病毒、腺病毒和星状病毒感染流行情况，以期为本地区儿童急性肠道感染的防治提供依据。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选取2015年2月1日—2017年3月31日深圳市龙华区中心医院（深圳市病毒性腹泻监测哨点医院）1 050例急性腹泻患儿，其中男726例、女324例，年龄1个月～5岁，临床症状包括粪便量多而稀薄、发热、呕吐和脱水等。儿童病毒性腹泻的诊断标准参照《中国腹泻病诊断治疗方案》，包括由胃肠炎症状引起的疾病急性发作、发病周期短，家庭接触或儿童集体发病、季节性流行，且实验室检查结果显示粪便中无细菌抗原、分子诊断检测出肠道病毒核酸[5]。

1.2 样本采集

收集患儿入院当日（不迟于疾病开始的第3天）粪便样本，置于含冷冻保护剂和防腐剂等运输介质的单个塑料容器中，-20 ℃冷冻保存待检。为确保可重复分析，研究剩余样本储存于-70 ℃液氮中。每位入选患儿的父母均签署知情同意书。

1.3 方法

1.3.1 病毒抗原检测 取0.1 g粪便放入1.5 mL Eppendorf管中，加入900 μL样本稀释液。混匀后离心，取上清液用于病毒抗原检测。采用酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测轮状病毒、诺如病毒、腺病毒和星状病毒抗原，试剂购自上海酶联生物科技有限公司

1.3.2 病毒核酸检测 采用多重聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）检测轮状病毒、诺如病毒、腺病毒和星状病毒核酸。采用Invitrogen MagMAX和Thermo Scientific KingFisher纯化系统自动化核酸（磁珠法）抽提仪（北京博尔迈生物技术有限公司）提取核酸，提取的核酸置-20 ℃保存备用。采用随机引物及SuperScriptⅡ反转录酶（北京博尔迈生物技术有限公司）将提取的RNA转为互补DNA。

1.3.3 细菌分离和培养 将粪便样本分别接种于SS琼脂、麦康凯琼脂培养基，35 ℃培养24 h，挑取可疑菌落涂片染色，进行氧化酶试验、触酶试验、O-F试验。参照《全国临床检验操作规程》（第4版）要求进行菌种的鉴定。

1.4 统计学方法

采用SPSS 13.0软件进行统计分析。计数资料以率表示，组间比较采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 4种病毒检出情况

1 050例患儿中，有483例（46.00%）病毒抗原阳性，有595例（56.67%）病毒核酸阳性。2种检测方法的阳性符合率为75.86%，阴性符合率为74.70%。见表1。

表1 ELISA与多重PCR对4种病毒的检出情况 例

2.2 患儿病原分布

以多重PCR检测到病毒核酸阳性为标准，有595例样本检出病毒，以轮状病毒最多（23.24%，244例），以下依次为诺如病毒（17.05%，179例）、腺病毒（9.62%，101例）、星状病毒（6.76%，71例）；有84例样本检出细菌，其中53例（5.05%）检出沙门菌、31例（2.95%）检出志贺菌。有急性腹泻临床表现的情况下，371例（35.33 %）样本采用ELISA未能确定病原体。

2.3 患儿单一感染及混合感染情况

在大多数病例中，473例（45.05%）患儿以单一感染形式发病，122例（11.62%）患儿为混合感染；轮状病毒单一感染率为30.42%，显著高于诺如病毒（24.87%）、腺病毒（13.78%）和星状病毒（10.42%）（P＜0.05）。见表2。

2.4 不同性别、年龄患儿病毒检出情况

726例男性患儿中，4种病毒核酸检测阳性388例（56.20%）；324例女性患儿中，4种病毒核酸检测阳性187例（57.72%）；不同性别患儿阳性检出率比较，差异无统计学意义（χ2=0.210，P=0.647）。1 050例患儿中，＜3岁患儿688例，4种病毒核酸检测阳性442例（64.25%），分别有186、145、67、44例检出轮状病毒、诺如病毒、腺病毒、星状病毒；3～5岁患儿362例，4种病毒核酸检测阳性153例（42.27%），分别有58、34、34、27例检出轮状病毒、诺如病毒、腺病毒、星状病毒，不同年龄患儿阳性检出率比较，差异有统计学意义（χ2=46.663，P=0.001）。

表2 患儿单一感染和混合感染频率

2.5 4种病毒季节流行特点

4种病毒不同季节检出率明显不同：冬-春季（1—5月）为轮状病毒感染高峰期；春-夏季（4—8月）为诺如病毒感染高峰期；秋-冬季（9—次年2月）腺病毒感染增幅最大，且在腺病毒感染患儿中同时检测出星状病毒，值得注意的是，二者的发病率均在10—12月有所上升。对所有研究月份的频率进行比较分析，发现轮状病毒频率的波动率为0.50%～22.95%，诺如病毒为2.2 2%～2 2.4 5%，腺病毒为0.76%～23.48%，星状病毒为1.24%～27.25%。轮状病毒1月检出率增多，3—4月达到最大值，6—10月检出率最低。尽管轮状病毒感染主要发生在寒冷季节，但夏天也可出现零星病例。诺如病毒感染全年均可检出，但以夏季最多。腺病毒和星状病毒感染均在9—次年2月呈上升态势，9月星状病毒检出率为1.50%，10和11月快速升高，12月达到高峰，占全年的26.72%。不同季节病毒病原体检出频率见图1。

图1 病毒性腹泻患儿病原感染时间分布

在冬季，最常见的感染性病原体是星状病毒（49.14%），其次为腺病毒（45.62%）、轮状病毒（29.51%）和诺如病毒（14.13%）；春季为轮状病毒（59.36%）流行高峰季节，以下分别是诺如病毒（15.93%）、星状病毒（13.85%）和腺病毒（7.50%）；夏季儿童病毒性腹泻病例较少，但诺如病毒感染（51.66%）在此期间较常出现。在秋季，腺病毒（42.82%）是主要的感染性病原体。病毒性腹泻是儿童腹泻的重要原因之一，常见于单一感染，具有季节性流行特征，且主要在寒冷季节暴发。见图2。

图2 4种病毒性季节分布

3 讨论

病毒性腹泻的治疗策略与细菌性急性肠道感染的治疗策略有很大不同。抗菌疗法对病毒性急性肠道感染没有积极的治疗效果，相反可能阻碍疾病临床症状的消退，使患儿病情恶化，并诱发其他临床症状[6]。临床实践已经证明，病毒性腹泻的持续时间及治疗效果取决于早期诊断和对症治疗。本研究调查了深圳市龙华区中心医院5岁以下腹泻患儿轮状病毒、诺如病毒、腺病毒、星状病毒的分布及季节流行特征，结果表明，患儿以单一病毒感染形式发病多见（45.0%），混合感染仅占11.67%。有研究发现，40%以上的婴儿胃肠炎是肠道病毒感染所致[7]，与本研究结果一致。本研究中，不同性别患儿病毒阳性检出率无差异，但＜3岁患儿病毒阳性检出率高于3～5岁患儿，与洪展桐等[8]的研究结果一致，可能是因为＜3岁婴幼儿自身免疫系统发育不成熟，易受到病毒的侵袭，而3～5岁儿童自身免疫力逐渐增强，故感染率较低。

轮状病毒主要感染6岁以下儿童，被认为是儿童肠胃炎的主要病原体[9]。本研究轮状病毒阳性检出率为23.24%，低于LASURE等[10]粪便样本中轮状病毒阳性检出率为31%～67%的研究结果，可能是因为近年来深圳市婴幼儿服用轮状病毒糖丸进行疾病预防起到了较好效果。但本研究结果显示，轮状病毒阳性检出率仍高于其他3种病毒，提示还需进一步加强对轮状病毒的防控。

诺如病毒是儿童胃肠炎的第二常见病原[11]，在中、重度胃肠炎患儿中的检出率为8%～15%[12-13]。印度的一项研究发现，粪便样本中诺如病毒的检出率为20%～55%[14]。LOPEZ等[15]通过粪便检测与血清学检测，发现乌拉圭＜5岁儿童中诺如病毒的阳性检出率达55%，与轮状病毒的阳性检出率相似。本研究发现，诺如病毒在全年均可检出，以夏季更常见，4—8月为诺如病毒感染高峰期，可能与春夏季的食物和水源供应有关。

世界范围内星状病毒和腺病毒的阳性检出率为5%～18%，本研究腺病毒和星状病毒的阳性检出率分别为9.62%和6.76%，2种病毒季节性流行特征相似，均在9—次年2月呈上升态势，与裴林夕等[16]的研究结果——深圳市2010—2012年腺病毒和星状病毒主要分布在秋冬季，10月达到高峰一致。

综上所述，轮状病毒和诺如病毒是深圳市龙华区中心医院5岁以下腹泻患儿的主要致病因素，单一病毒性感染比混合感染更常发生。儿童病毒性腹泻发病以季节性流行为特征，4月为轮状病毒感染高峰期，7月为诺如病毒感染高峰期，腺病毒和星状病毒感染在11、12月寒冷季节高发。医疗机构应采取有效措施，预防本地区儿童急性肠道感染的发生。