TREM-1在炎症性肠病患者血清中的表达及其与疾病活动度的关系

王利民 沈利洪 马闪珊 张丽英 吴俊琪

炎症性肠病（inflammatory bowel disease，IBD）是一种病因尚不明确的慢性非特异性免疫性肠道疾病，多数观点认为是由遗传易感个体对肠道微生物的异常黏膜免疫应答引起的疾病，包括溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）、克罗恩病（Crohn′s disease，CD）[1]，还有 10%分类不确定的IBD[2]。IBD症状表现多样，腹痛、腹泻、黏液脓血便为其主要临床特点[3]，还有很多肠外表现：外周关节炎和杵状指等。流行病学数据显示，全球范围内IBD的发病率均呈逐年上升趋势，且发病年龄逐渐减小[4-5]。内镜联合病变部位病理学检查是反应IBD疾病活动度的金标准[6]，但该方法有一定的禁忌证与局限性，且耗时长、患者痛苦大，不能反复进行监测。而血WBC、ESR、CRP等实验室指标受各种影响因素较多，因此临床亟需一种创伤小、可靠的生物标志物来监测IBD的活动度以指导临床诊治。髓系细胞触发性受体1（triggering receptor on myeloid cells-1，TREM-1）是近年来发现的用于诊断早期炎症反应的新指标，是免疫球蛋白超家族活化受体，选择性地表达于血液中性粒细胞和单核细胞/巨噬细胞。TREM-1在感染性疾病中发挥重要作用，通过其和DNAX激活蛋白12（DNAX-activating protein of 12 kDa,DAP12）结合，活化下游信号通路，促进多种炎症介质分泌，具有预激和诱导炎症反应的作用。研究显示，TREM-1不仅在感染性组织中表达上调，在非感染性炎症、结缔组织和肿瘤组织中也表达上调[7-8]。另有研究表明IBD患者肠黏膜中TREM-1表达与病情严重程度呈正相关[9]。那么血清中TREM-1水平是否也存在同样关系？基于此，本研究旨在探讨TREM-1在IBD患者血清中的表达水平及其与疾病活动度的关系，现报道如下。

1 对象和方法

1.1 对象 选取2018年6月至2020年2月金华市中心医院收治的IBD患者169例，其中UC患者78例，CD患者91例。另择同期收治的普通腹泻患者40例，健康体检者40例。各研究对象均接受结肠镜和组织病理学检查。IBD患者符合中华医学会消化病学分会炎症性肠病组《炎症性肠病诊断与治疗的共识意见》[10]中对IBD的诊断标准；依据结肠镜、病理学检查结果和临床表现综合评分分为疾病活动期（UC＞3分，CD＞5分）和缓解期（UC≤2分，CD≤4分），依赖激素维持治疗符合缓解标准的也纳入缓解期。普通腹泻患者纳入标准：大便次数增多，伴有大便不成形，持续时间达4周以上，经结肠镜检查不符合IBD的诊断。健康体检者为同期来院体检人员，大便次数正常，无严重并发症，并排除使用非甾类抗炎药和乙醇成瘾者。IBD患者、普通腹泻患者、健康体检者性别、年龄比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。本研究经医院医学伦理委员会批准。

表1 IBD患者、普通腹泻患者、健康体检者性别、年龄比较

1.2 方法

1.2.1 仪器和试剂 酶标分析仪RT-6100购自深圳Rayto公司；电热恒温水浴箱600购自上海跃进公司；洗板机BIOTEK ELX50购自美国博腾公司；全自动血沉仪IVD购自意大利SIRE ANALYTICAL SYSTEMS S.r.l公司；荧光免疫定量分析仪Getein1600购自南京基蛋生物公司；血细胞分析仪XE2100购自日本Sysmex公司。人TREM-1试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司（试剂批号：E20190308-11345B）。人钙卫蛋白（Calprotectin，CALP）试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司（试剂批号：E20190304-10597B）。WBC配套试剂盒购自日本 Sysmex公司（试剂批号：R9531、A9010、G0009），ESR检测无需配套试剂，CRP配套试剂盒购自南京基蛋生物公司（试剂批号：0551210518）

1.2.2 样本采集 抽取研究对象清晨空腹外周静脉血2管，其中1管用EDTA抗凝用于检测WBC、ESR及CRP，另1管含有促凝剂，在室温放置1 h，3 500 r/min离心10 min，取上清液至干燥EP管中，保存至-70℃备用，避免反复冻融。

1.2.3 参数测定 WBC水平检测采用血细胞分析仪XE2100的流式细胞计数法，ESR水平检测采用全自动血沉仪IVD的光学扫描法，CRP水平检测采用荧光免疫定量分析仪的免疫荧光干式定量法。血清TREM-1和CALP水平测定：采用ELISA法；试剂盒从冷藏环境中取出后在室温平衡，取出所需板条；设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50 μl；样本孔中加入待测样本50 μl，空白孔不加；除空白孔外，标准品孔和样本孔每孔加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体100 μl，用封板膜封住反应孔，37℃水浴60 min；弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350 μl），静置1 min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次；每孔加入底物 A、B 各 50 μl，37 ℃避光孵育 15 min；每孔加入终止液50 μl，15 min内，在450 nm波长处测定各孔的A值；以所测标准品的A值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的A值代入方程，计算出样品的浓度。

1.3 观察指标 （1）比较IBD患者、普通腹泻患者、健康体检者血清TREM-1水平；（2）分析IBD患者血清TREM-1水平与血 CALP、WBC、ESR、CRP 水平的相关性；（3）比较 TREM-1、CALP、WBC、CRP 、ESR 对 UC 活动期和CD活动期的诊断效能。

1.4 统计学处理 采用SPSS 20.0统计软件。计量资料以表示，多组比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验，两组比较采用两独立样本t检验。计数资料组间比较采用χ2检验。相关性分析采用Pearson相关。以疾病活动期为变量，采用ROC曲线分析比较TREM-1、CALP、WBC、ESR、CRP 判断疾病活动度的诊断效能。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 IBD患者、普通腹泻患者、健康体检者血清TREM-1水平比较 见表2。

由表2可见，UC患者血清TREM-1水平高于普通腹泻患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。CD患者血清TREM-1水平与普通腹泻患者比较差异无统计学意义（P＞0.05）。UC、CD患者血清TREM-1水平高于健康体检者（均P＜0.05）。UC活动期患者血清TREM-1水平远高于普通腹泻患者和健康体检者（均P＜0.05）。CD活动期患者血清TREM-1水平高于普通腹泻患者和健康体检者（均P＜0.05）。UC缓解期、CD缓解期患者血清TREM-1水平与普通腹泻患者、健康体检者比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。UC活动期患者与UC缓解期患者、CD活动期患者与CD缓解期患者血清TREM-1水平比较差异均有统计学意义(均P＜0.05)，活动期高于缓解期。

表2 UC、CD组与其他组之间的TREM-1水平比较

2.2 IBD患者血清 TREM-1水平与血CALP、WBC、ESR、CRP水平的相关性分析 见表3。

表3 血清TREM-1水平与血CALP、WBC、ESR、CRP水平的相关性分析

由表3可见，UC患者血清TREM-1水平与CALP、WBC、ESR、CRP水平均呈正相关（均 P＜0．05）。CD 患者血清TREM-1水平与CALP、WBC水平均呈正相关（均P＜0．05），与 CRP、ESR 水平无关（P ＞0.05）。

2.3 TREM-1、CALP、WBC、CRP 、ESR 对 UC 活动期的诊断效能比较 见图1（插页）、表4。

图1 TREM-1、CALP、WBC、CRP、ESR 诊断 UC 活动期的 ROC曲线（TREM-1为髓系细胞触发性受体1；CALP为钙卫蛋白；UC为溃疡性结肠炎）

表4 TREM-1、CALP、WBC、CRP 、ESR对UC活动期的诊断效能比较

由图1、表4可见，TREM-1取83.091 pg/ml时，AUC为0.878，诊断UC活动期的灵敏度为0.738，特异度为 0.972；CALP 取 76.283 μg/ml时，AUC 为 0.903，诊断UC活动期的灵敏度为0.762，特异度为0.944；ESR取9.5 mm/h时，AUC为0.626，诊断UC活动期的灵敏度为0.810，特异度为0.444；CRP取5.05 mg/L时，AUC为0.650，诊断UC活动期的灵敏度为0.619，特异度为0.639；WBC 取 8.235×109/L 时，AUC 为 0.686，诊断 UC活动期的灵敏度为0.500，特异度为0.833。TREM-1对诊断UC活动期有较高的灵敏度和特异度。

2.4 TREM-1、CALP、WBC、CRP 、ESR 对 CD 活动期的诊断效能比较 见图2（插页）、表5。

图2 TREM-1、CALP、WBC、CRP、ESR 诊断 CD 活动期的 ROC曲线（TREM-1为髓系细胞触发性受体1；CALP为钙卫蛋白；CD为克罗恩病）

表5 TREM-1、CALP、WBC、CRP 、ESR对CD活动期的诊断效能比较

由图2、表5可见，TREM-1取73.470 pg/ml时，AUC为0.865，对CD活动期诊断的灵敏度为0.588，特异度为 1.000；CALP 取 42.442 μg/ml时，AUC 为 0.888，对CD活动期诊断的灵敏度为0.882，特异度为0.767；ESR取14.5 mm/h时，AUC为0.678，对CD活动期诊断的灵敏度为0.882，特异度为0.433；CRP取5.35 mg/L时，AUC为0.808，对CD活动期诊断的灵敏度为0.706，特异度为 0.600；WBC 取 5.35×109/L 时，AUC 为 0.767，对CD活动期诊断的灵敏度为0.882，特异度为0.567。TREM-1对诊断CD活动期有较高的灵敏度和特异度。

3 讨论

目前临床诊断IBD的主要方法包括结肠镜和内镜下活组织病理学检查、临床疾病活动性指数、ESR、CRP和粪便CALP。CALP是中性粒细胞和反应性的巨噬细胞胞质中重要的蛋白质，可作为急性炎性细胞活化的标志物[11]，由于粪便CALP具有抗细菌降解作用，在肠道中不容易被细菌分解，粪便CALP在常温下能够保持稳定长达7d，其浓度是血浆中浓度的6倍[12]。然而临床上粪便采集保存比较困难，并且即使是同一天采集的粪便检测结果相差比较大[13]。而血清标志物水平测定具有取样方便、可短期内重复检测、易于被接受等特点。

IBD是遗传易感性个体对肠道微生物的异常黏膜免疫应答引起的伴有严重并发症的持续性肠道炎症。正常人的肠道黏膜巨噬细胞很少表达TREM-l，Schenk等[14]发现在健康人的肠黏膜单核细胞上TREM-l的表达水平显著低于淋巴结和扁桃体，在炎症性肠病大鼠模型中肠黏膜TREM-l表达上调。也有学者发现IBD患者中的血清TREM-l显著高于健康人[15]。本研究表明血清TREM-1在IBD血清中特异度高，特别是在疾病活动期异常升高明显，IBD活动期患者的血清TREM-1水平明显高于健康体检者，这与之前的研究结果相符[9,15]。本研究发现UC患者血清TREM-1水平与WBC、CPR、ESR的水平呈正相关，而CD患者血清TREM-1水平只与WBC呈正相关，与Park等[15]的研究结果不相符。另外本研究还发现血清TREM-1水平与临床上普遍认可的判断IBD活动度的CALP水平有很好的相关性。CD活动期、UC活动期患者血清TREM-1水平显著高于缓解期和普通腹泻患者、健康体检者，与疾病活动程度明显相关。以疾病活动度为变量，ROC曲线显示，血清TREM-1水平对IBD疾病活动度具有较高的诊断效能，判断UC活动期和CD活动期的最佳临界点为83.091 pg/ml和 51.241 pg/ml。。

综上所述，检测血清TREM-1水平可助于判断IBD的疾病活动度，具有取样方便、灵敏度高、特异度高、可短期内重复检测、易于被接受等优点。血清TREM-1或可为临床诊断IBD尤其是UC活动期、病情及疗效观察提供依据。