孕晚期妇女B族链球菌带菌情况分析*

王秋红，鲍欣欣，王昭蓉，张占虎，邵雪峰*

(南通大学附属妇幼保健院1 检验科，2 遗传与生殖医学研究所，南通 226018)

B族链球菌(group B Streptococcus,GBS)，也称为无乳链球菌，正常寄居于阴道和直肠。GBS是兼性厌氧的革兰阳性链球菌，是一种条件致病菌。正常健康妇女人群也有感染GBS的风险，可达30%左右，正常妇女感染GBS后一般是不会致病的。据统计，15%～25%孕妇会感染GBS，引发产褥感染，且40%～70%孕妇在分娩过程中通过产道传染给新生儿[1-2]，引起新生儿败血症、脑膜炎、肺炎等，1%～3%新生儿将出现早期侵入性感染，死亡率极高，是目前引发新生儿感染最主要的致病菌之一。多因素分析发现GBS感染与产妇年龄、阴道炎和流产史有关[3]。因此，在临床上对孕妇GBS感染进行筛查非常重要，可有效降低母婴感染。现对孕妇生殖道分泌物行GBS细菌培养法检测和实时荧光聚合酶链反应(real time fluorescent polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测，以便早发现、早治疗，对GBS感染母婴进行干预。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018年1月—2019年6月在南通大学附属妇幼保健院产科门诊进行产前检查，妊娠34～38周的孕妇2 210例为研究对象。选取标准[4]：单胎；近2周内无性生活；无阴道用药及操作史。排除标准：合并其他疾病、发热者；近1周使用过抗生素者；生殖道畸形者。本研究均知情同意并经南通大学附属妇幼保健院伦理委员会批准。

1.2 检测方法 参照美国疾病控制中心(Centers for Disease Control,CDC)推荐的取材方法。产科医师采集孕妇标本时，若会阴部分泌物过多，应预先拭去过多的分泌物，用3根消毒棉签从阴道下段1/3处旋转一周采集少许分泌物，进行RT-PCR检测、细菌培养及白带分析。标本采集完成后，应在1 h内送实验室，24 h内进行检测。

1.2.1 细菌培养和药敏试验 无菌样本直接划线接种于GBS显色平板(安图生物)上，置35～37 ℃温箱中，培养18～24 h观察结果，个别菌株需培养24 h以上。药敏试验采用纸片扩散法进行检测，将含有定量抗菌药物的浓度呈对数减少，纸片周围浓度也会逐渐减低。菌株在纸片周围的抑菌浓度范围内不能生长，在抑菌范围外生长，形成透明抑菌圈。药物在琼脂中扩散速度的不同也可能影响抑菌圈的直径。抑菌圈的大小可反映菌株对药物的敏感程度。参照的美国临床实验室标准化委员会(National Committee for Clinical Laboratory,NCCLS)标准或临床实验室标准化协会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)标准分析不同菌株和不同的药敏纸片。

1.2.2 RT-PCR检测 RT-PCR试剂盒购自泰普生物有限公司，实时荧光定量核酸扩增仪(ABI7500型)购自美国ABI公司。所有检测过程及结果判读均按照操作说明。该方法是通过提取DNA，针对GBS特定基因特异且无高频单核苷酸多态性位点的序列区域环磷酸腺苷因子，设计特异引物和探针，来检测标本中的GBS DNA。通过加入内参，排除RT-PCR过程中可能的假阴性结果；也通过加入尿嘧啶糖苷酶(uracil N-glycosylase,UNG)避免可能的扩增污染物造成的假阳性结果。RT-PCR扩增程序：37 ℃，2 min；94 ℃，2 min；94 ℃，20 s，55 ℃，45 s；40个循环。

1.2.3 阳性标本判断 (1)细菌培养：平板出现淡红色到深红色，判断初步鉴定是GBS。(2)GBS阳性判断标准：羧基荧光素(carboxyfluorescein,FAM)荧光信号有较好的对数增长曲线，CT值＜23，Texas Red(内参)CT值＜40，GBS阴性(低于检测下限)：FAM CT值=30或“No CT”。且本批实验阳参、阴参的检测结果与预期相符。

1.3 统计学方法 采用SPSS 21.0统计软件进行数据分析。计量资料以表示，采用t检验；计数资料组间比较采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 GBS感染检测结果 RT-PCR法检出阳性标本225例(10.18%)，细菌培养法检出阳性标本183例(8.28%)，RT-PCR法检出阳性率高于细菌培养法(χ2=4.76,P=0.029)。

2.2 GBS感染组与无GBS感染组临床资料比较与无GBS感染组相比，GBS感染组的孕妇年龄较大，剖宫产率较高，异常孕产史(包括自然流产、异位妊娠、因胎儿畸形行引产术、死胎)较多(均P＜0.05)，而胎龄、新生儿出生体质量及产前发热情况差异均无统计学意义(均P＞0.05)，见表1。

表1 GBS感染组与无GBS感染组临床资料比较(,n,%)

表1 GBS感染组与无GBS感染组临床资料比较(,n,%)

2.3 GBS感染组与无GBS感染组白带分析 两组的清洁度、pH、过氧化氢阴性、白细胞酯酶阳性和唾液酸苷酶阳性比较差异均有统计学意义(均P＜0.05)，而β 葡萄糖醛酸酶阳性和乙酰氨基葡萄糖苷酶阳性差异均无统计学意义(均P＞0.05)，见表2。

2.4 GBS阳性标本耐药分析 225例GBS阳性标本均行药敏试验。GBS对四环素的耐药率较高(83.11%)，其次是克林霉素(29.33%)，左氧氟沙星(22.22%)，环丙沙星(20.44%)和红霉素(12.44%)，对氨苄西林、利奈唑胺、青霉素G、奎奴普丁/达福普汀和万古霉素的耐药率均为0。GBS对氨苄西林、利奈唑胺、青霉素G、奎奴普丁/达福普汀和万古霉素的敏感率高(均100.00%)，其次是红霉素(87.56%)、左氧氟沙星(77.78%)、环丙沙星(73.33%)和克林霉素(70.67%)，对四环素的敏感性较低(16.89%)。

表2 GBS感染组与无GBS感染组白带结果分析(n,%,)

表2 GBS感染组与无GBS感染组白带结果分析(n,%,)

2.5 产后随访 GBS感染组中胎儿早产、胎膜早破、新生儿疾病及孕妇感染的发生率均高于无GBS感染组(均P<0.05)，见表3。

表3 GBS感染组与无GBS感染组产后随访情况分析(n,%)

3 讨论

GBS通常寄居于人体的直肠或女性的阴道内部，围生期GBS的感染率为10.1%～32.4%，是导致围生期感染的重要致病菌之一，可导致新生儿脑病、肺炎等严重并发症发生[5-7]。此外，GBS还可导致孕产妇感染、产妇败血症，是胎膜早破、早产的主要致病菌之一[5]。

本研究发现GBS感染组与无GBS感染组的母亲年龄及异常孕产史存在明显差异，而产前发热发病率、胎龄及出生体质量未见明显差异。健康女性生殖道内也会存在GBS，一般不致病。但机体免疫力下降，可能会导致疾病，尤其对于妊娠期妇女情况就比较严重，因此对孕34～38周孕妇进行GBS检测很有必要。通过收集阴道分泌物进行细菌培养，能在一定程度上有效检测出GBS，但随着医学的发展，发现细菌培养极易出现假阴性等情况，检出率低[7-8]。且常规细菌培养法消耗的时间较长，阳性鉴定至少需48 h。此外，该检测方式的免疫学敏感性往往和菌量检测存在紧密联系，检测的菌量较少时极易发生漏诊、误诊等[9]。GBS的携带存在较明显的间歇性及短暂性特征，对孕产妇实施GBS检测过程中选择合适的时机非常重要。本研究2 210例门诊孕妇中，通过细菌检测阳性183例，而RT-PCR法检测阳性225例。RTPCR的阳性检出率明显高于细菌培养。在此期间收集孕妇白带标本，分析发现GBS感染的孕妇和无感染的孕妇，白带的pH、白细胞酯酶、过氧化氢和唾液酸苷酶差异有统计学意义。PH值异常提示酸性环境破坏，而过氧化氢对维持阴道微环境有一定的作用。唾液酸苷酶含量增加，可能是由于大量条件致病菌的入侵[10]。白细胞酯酶水平的升高，说明阴道内存在炎症。提示GBS感染组与无GBS感染组阴道内炎症存在差异。

本研究自2018年5月开始收集孕妇的信息，跟踪随访，对临床数据进行分析。GBS感染组与无GBS感染组胎膜早破、早产、新生儿疾病及孕妇疾病比较差异有统计学意义。GBS对绒毛膜有较强的吸附能力和穿透能力，感染2 h内即可吸附于母体组织，继而侵入绒毛膜，通过炎症细胞的吞噬作用及细菌产生的蛋白水解酶的直接侵袭，使胎膜局部张力减低，从而导致胎膜早破。分娩传播是新生儿感染GBS的主要途径。因此，抗生素预防能有效减低GBS垂直传播引发的新生儿早期感染。本研究对225例GBS阳性标本进行药敏试验发现，GBS对氨苄西林、利奈唑胺、青霉素G、奎奴普丁/达福普汀、替加环素、万古霉素的敏感率最高，均为100.0%。青霉素类为首选抗生素，和美国CDC围生期GBS预防指南相一致。

综上所述，妊娠晚期感染GBS与妊娠结局和新生儿疾病密切相关。通过分析GBS感染孕妇的白带分析及耐药性，能早期诊断，有利于提高治疗效果，可有效预防妊娠不良结局的发生。