去氢骆驼蓬碱及其衍生物DH-004的急性毒性研究

李红玲， 赵 军， 高惠静， 陈 蓓， 王建华

(新疆医科大学第一附属医院药学部， 乌鲁木齐 830054)

去氢骆驼蓬碱为蒺藜科(Zygophyllaceae)骆驼蓬属植物的骆驼蓬(PeganunharmalaL.)中分离提纯的生物碱，具有抗炎止痒[1]、抗银屑病[2]、抗包虫[3]、抗肿瘤[4-6]等作用。研究表明[7-8]，去氢骆驼蓬碱具有神经毒性作用，由于β-咔啉类生物碱的结构与1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP，强黑质毒素，可诱发帕金森病)相似，此类化合物也具有类似内源性神经毒素的毒性作用。通过对去氢骆驼蓬碱的β-咔啉类生物碱母核进行结构修饰，经衍生化反应合成去氢骆驼蓬碱衍生物，达到减毒增效的目的[9]。有研究报道对去氢骆驼蓬碱进行结构改造，以在确保其生物活性的同时，有效降低其毒性，结构修饰后的衍生物在体外有较好的抗肿瘤[10-11]、抗寄生虫病[12]等作用。本研究采用Bliss法探究去氢骆驼蓬碱及其衍生物DH-004的急性毒性，现报道如下。

1 材料

1.1 实验动物6～8周龄昆明种小鼠，雌雄各半，体质量(20±2)g，购于新疆医科大学实验动物中心，许可证号：SYXK(新)2011-0004，实验动物的使用获得新疆医科大学第一附属医院伦理委员会的批准，批准文号：IACUC-20130425011。

1.2 仪器电子天平(德国sartorius公司)。

1.3 试药去氢骆驼蓬碱(新疆华世丹药业有限公司，纯度达到99%以上)；去氢骆驼蓬碱衍生物DH-004(新疆华世丹药业有限公司，纯度达到99%以上)；吐温-80(Tween-80，湖南尔康制药有限公司，批号20121201)；羧甲基纤维素钠(CMC-Na，天津市福晨化学试剂厂，批号20021113)。

2 方法与结果

2.1 溶液的配置称取去氢骆驼蓬碱原料药50 mg，溶于10 mL生理盐水中，配置成浓度为5 mg/mL的母液；称取去氢骆驼蓬碱衍生物DH-004原料药50 mg，放入研钵中，加入适量Tween-80润湿，加入10 mL的0.5%CMC-Na，配制成浓度为5 mg/mL的混悬液，备用。

2.2 去氢骆驼蓬碱给药剂量的考察取昆明种小鼠20只，雌雄各半，禁食6～8 h，按给药剂量(31、62、125、250、500 mg/kg体质量去氢骆驼蓬碱)随机分为5组，每组4只，采用腹腔注射，给药后观察14 d，记录每组小鼠死亡数量。根据小鼠死亡情况进行适当调整给药剂量，得出最大剂量Dn(0%死亡率)值和全部动物死亡的最小剂量Dm(100%死亡率)值。结果去氢骆驼蓬碱的给药剂量为31～125 mg/kg体质量，依据公式，计算得出组间距r值为1.3，见表1。

2.3 去氢骆驼蓬碱衍生物DH-004给药剂量的考察取昆明种小鼠12只，雌雄各半，禁食6～8 h，按给药剂量(125、250、500 mg/kg体质量DH-004)随机分为3组，每组4只，采用腹腔注射，给药后观察14 d，记录每组小鼠的死亡数量。根据小鼠死亡情况进行适当调整给药剂量，得出最大剂量Dn(0%死亡率)值和全部动物死亡的最小剂量Dm(100%死亡率)值。结果去氢骆驼蓬碱衍生物DH-004的给药范围为125～500 mg/kg体质量，依据公式，计算得出组间距r值为1.3，见表2。

表1 去氢骆驼蓬碱给药剂量的考察

表2 去氢骆驼蓬碱衍生物DH-004给药剂量的考察

2.4 去氢骆驼蓬碱半数致死量(LD50)的测定取昆明种小鼠60只，雌雄各半，禁食6～8 h，按给药剂量(31.0、40.3、52.4、68.1、88.5、115.1 mg/kg体质量去氢骆驼蓬碱)随机分为6组，每组10只，采用腹腔注射，给药后观察14 d，记录各组小鼠的死亡率，根据Bliss法计算小鼠对去氢骆驼蓬碱中毒的LD50及95%的置信区间。结果去氢骆驼蓬碱的LD50为49.40 mg/kg体质量，95%置信区间为41.44～57.62 mg/kg体质量，见表3。

表3 去氢骆驼蓬碱的LD50测定结果

2.5 去氢骆驼蓬碱衍生物DH-004半数致死量(LD50)的测定取昆明种小鼠60只，雌雄各半，禁食6～8 h，按给药剂量(125.0、162.5、211.2、274.6、357.0、464.1 mg/kg体质量DH-004)随机分为6组，每组10只，采用腹腔注射，给药后观察14 d，记录各组小鼠的死亡率，根据Bliss法计算出小鼠对去氢骆驼蓬碱衍生物DH-004中毒的LD50及95%的置信区间。结果去氢骆驼蓬碱衍生物DH-004的LD50为252.66 mg/kg体质量，95%置信区间为220.60～289.72 mg/kg体质量，见表4。

表4 衍生物DH-004的LD50测定结果

2.6 各组小鼠中毒症状去氢骆驼蓬碱各剂量组小鼠在腹腔注射给药5 min后即出现中毒症状，主要表现为如震颤、躁动不安、抽搐等情况，且剂量越高，症状也愈加严重，在30 min内，中毒症状严重的小鼠即出现死亡，中毒症状轻微的小鼠开始缓解。第2天，存活小鼠的中毒症状基本已恢复。去氢骆驼蓬碱衍生物DH-004各剂量小鼠腹腔注射给药30 min后即出现中毒症状，主要如震颤、心跳加快、躁动不安、抽搐等情况，且剂量越高，症状也愈加严重，在2 h内，中毒症状严重的小鼠即出现死亡，中毒症状轻微的小鼠开始缓解。第2天，存活小鼠的中毒症状基本已恢复。两种药物小鼠表现出的中毒症状相似，中毒症状时间稍有不同，衍生物DH-004较去氢骆驼蓬碱出现中毒症状时间较晚。

3 讨论

半数致死量(LD50)在药理学、毒理学、微生物学等领域早已广泛应用，目前测定LD50的方法较多，主要有累计法、序贯法、寇氏法、Bliss法等。Bliss法具有精确度高和可靠性强的特点，常多作为新药LD50的测定评价方法[13]。本研究采用Bliss法测定去氢骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱衍生物DH-004的LD50，小鼠经腹腔注射给药后，去氢骆驼蓬碱的毒性大于去氢骆驼蓬碱衍生物DH-004的毒性，表明结构修饰后达到了减毒的效果。注射去氢骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱衍生物DH-004的小鼠中毒症状相似，表现为震颤、心跳加快、躁动不安、抽搐等。本研究为去氢骆驼蓬碱衍生物的后续研究提供了毒理学理论基础。