急性心肌梗死患者PCI手术前后血浆miR-23b及miR-126的变化*

龚 岚，刘肖肖，陆红兵△

江苏省无锡市第二人民医院：1.检验科；2.心内科，江苏无锡 214000

急性心肌梗死(AMI)致死率高，且大多发生在早期。临床上，心肌细胞损伤标志物心肌肌钙蛋白 I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)是诊断AMI可靠的指标[1]，但是窗口期不一，单独凭借其结果并不能明确地诊断为心肌梗死。因此，探索新型心肌梗死标志物在临床工作中有重要的意义。微小RNA(miRNA)是一类由21～23个核苷酸组成的非编码小RNA。研究发现，miR-1[2]、miR-133a[2]、miR-208[3]和miR-499-5P[4]是心肌细胞损伤重要的标志物；动物实验表明，miR-23b[5]及miR-126[6]是心肌梗死的重要标志物，但临床上血浆miR-23b及miR-126是否可以作为心肌标志物检测AMI鲜见报道。因此，本课题组拟采用荧光定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测miR-23b及miR-126在患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术前术后的表达情况，旨在为AMI早期诊断提供新方向及提供治疗新靶点。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择无锡市第二人民医院心内科2018年6月至2019年6月AMI患者105例作为AMI组，选择年龄、性别相匹配的健康者82例作为对照组。AMI组中男89例、女16例，平均年龄(64.61±13.59)岁；对照组中男69例、女13例，平均年龄(61.18±9.3)岁。两组年龄及性别差异无统计学意义(P>0.05)。纳入标准：AMI患者符合第3版全球心肌梗死诊断指南中的诊断标准；对照组人群无胸闷、胸痛，心肌酶谱、心电图、血常规、生化等检查无异常。所有受试者均签署知情同意书。

1.2方法

1.2.1血液标本采集 采集AMI组患者入院时以及患者施行PCI术后7 d的静脉血5 mL，采集对照组静脉血5 mL。

1.2.2血浆miR-23b、miR-126水平测定 外周血分离血浆，采用miRNA提取试剂盒(购自美国Qiagen公司)合成cDNA，运用TaqMan microRNA assay(购自Applied Biosystems公司)扩增miR-23b和miR-126，以U6作为内参，miR-23b和miR-126表达水平以2-ΔΔCt表示。

1.2.3血清学指标水平测定 取外周静脉血5 mL，离心分离血清，采用电化学发光法测定血清心肌肌钙蛋白T(cTnT)，量子点荧光免疫层析法测定血清cTnI，免疫紫外分光光度法检测CK-MB。

2 结 果

2.1两组血清学指标检测结果比较 AMI组患者入院时检测CK-MB、cTnI、cTnT、血糖(GLU)、B型脑钠肽前体(PRO-BNP)结果显示均明显高于对照组(P<0.05)。见表1。

表1 两组血清学指标检测结果比较

2.2两组血浆中miR-23b及miR-126表达水平 AMI组患者发病初期，血浆miR-23b、miR-126表达水平明显高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)；术后第7天血浆miR-23b、miR-126表达水平下降，与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 两组miR-23b及 miR-126表达水平比较

2.3AMI患者血浆miR-23b及miR-126水平与心肌损伤标志物相关性分析 检测AMI患者术前cTnI、CK-MB值，并将其与 miR-23b、miR-126的表达水平进行相关性分析。结果显示，miR-23b表达水平与CK-MB呈正相关(r=0.832，P<0.001)，见图1；miR-23b表达水平与cTnI呈正相关(r=0.245，P<0.001)，见图2；miR-126表达水平与 cTnI呈正相关(r=0.316，P<0.001)，见图3。

图1 miR-23b与CK-MB水平的相关性分析

图2 miR-23b与cTnI水平的相关性分析

图3 miR-126与cTnI水平的相关性分析

3 讨 论

miRNA主要参与调控转录后水平的基因表达，在疾病的发生、发展过程中起重要作用。miRNA可通过影响细胞的分裂、增殖、凋亡和再生等参与肿瘤、自身免疫性疾病、心血管疾病等病理生理过程[7]。miRNA表达具有组织细胞特异性，在不同的疾病中有不同的表达谱，可以作为疾病诊断的特异性标志物。高通量测序表明miR-126在坏死的心肌细胞中高表达[8]。也有研究表明，miR-23b参与肿瘤和其他很多疾病的病理生理过程[9]。临床上，cTnT、cTnI及CK-MB是诊断AMI可靠的指标，但是窗口期不一，也是其他很多疾病的标志物[10]，单独凭借其结果并不能明确地诊断为心肌梗死。

本研究收集AMI患者术前术后以及对照组的外周静脉血，通过qRT-PCR 检测出miR-23b及miR-126 在不同组间的表达，了解miRNA在AMI中的临床价值。本研究发现AMI患者入院时血浆中miR-23b及miR-126的表达明显增高，在术后7 d，AMI组患者血浆中miR-23b及miR-126的表达明显降低，与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)，提示miR-23b及miR-126可以作为AMI潜在的生物标志物，也可能参与AMI发生的病理生理过程。LI等[11]试验表明AMI患者miR-23a的表达较正常组下调，此外，还证实miR-23a的表达可能通过靶向PTEN在患者体内和体外调节AMI，PTEN/miR-23a可能成为AMI临床治疗的潜在靶点。但是miR-23b表达上调具体的潜在的调节机制还未知。此外，本研究发现AMI组人群中miR-23b及miR-126的表达水平与血浆中CK-MB和cTnI呈正相关，说明血浆中miR-23b及miR-126 的表达水平在一定程度上能反映AMI患者心肌细胞的损伤程度，该结果预示血浆中miRNA水平可能与AMI患者心肌细胞受损程度有关。研究猜想其机制可能是在AMI早期发病过程中心肌细胞缺血、缺氧而导致心肌细胞的坏死，而坏死的心肌细胞释放出某些miRNA 进入血液，应该是多种miRNA组成的表达谱，但遗憾的是本试验仅研究了miR-23b及miR-126在AMI发病前后的表达。根据最新数据库检测AMI发病前后多个miRNA的表达水平十分必要，这为探索AMI的发病机制、诊断及其治疗提供了新的方向。

综上所述，AMI患者血浆中miR-23b及miR-126水平升高有助于AMI诊断、治疗及其疗效评估，miR-23b及miR-126可能参与AMI过程中的心肌细胞损伤、重构等病理生理过程。同时本研究存在以下不足：(1)虽然检测出miR-23b及miR-126在AMI前后的变化，但是AMI是个动态的过程，研究中应该多个时间点采集血浆，动态检测miRNA在心肌梗死过程中表达水平的变化；(2)本研究检测的miRNA种类过少，心肌梗死释放了不同种类的miRNA，应该根据最新数据库动态检测多个miRNA，联合多个miRNA进行检测作为AMI的诊断标志物；(3)本研究中对照组应纳入涉及心肌细胞改变的其他类型冠心病。本研究证明了血浆miR-23b和miR-126 在AMI患者手术前后的变化，提示其可能成为新型的AMI诊断生物标志物，且与血浆cTnI及CK-MB相关性较好，为以后深入研究AMI早期诊断标志物以及患者的早期救治打下了坚实的基础，具有良好的临床应用前景。