获得性免疫缺陷综合征患者合并机会性感染的淋巴细胞亚群和HIV-1病毒载量的特点分析

曹汴川， 黄 喆， 肖 科， 税雪姣， 邹永胜， 黄富礼， 黄永茂， 钟 利

获得性免疫缺陷综合征（AIDS）是由人类免疫缺陷病毒（HIV）感染所导致的以免疫功能缺陷为特征的慢性致死性传染病。四川地区AIDS疫情严峻，已成为最重大的公共卫生挑战之一。HIV感染导致患者CD4+T淋巴细胞数量进行性减少[1]，CD4+/CD8+T淋巴细胞比例倒置，相关细胞因子水平紊乱，进而引起机体免疫功能缺陷，极易发生各种机会性感染[2]。而AIDS合并机会性感染是导致患者出现各种临床症状，甚至死亡的重要因素[3-4]。有研究发现，CD4+T淋巴细胞和HIV-1病毒载量已成为判定AIDS患者病情、预测疾病进展和评价抗反转录病毒治疗（ART）疗效的重要指标[5-7]。因此，评估包括CD4+T淋巴细胞在内的淋巴细胞亚群和HIV-1病毒载量可全面反映AIDS患者的免疫功能以及ART疗效，进而预测发生感染的概率。对AIDS患者合并机会性感染的淋巴细胞亚群和HIV-1病毒载量进行分析，以期提高临床诊治水平，进而为降低本地区此病的发病率和病死率提供依 据。

1 材料与方法

1.1 病例来源

所有病例均来源于西南医科大学附属医院感染病科2019年1－12月住院治疗的AIDS合并机会性感染患者，共100例。病例纳入排除条件：①AIDS患者合并机会性感染；②性别不限；③排除血液系统疾病、糖尿病、慢性阻塞性肺疾病、肝硬化、慢性肾脏疾病和严重精神疾病；④剔除临床资料不完整的病例。

1.2 实验室检测

由本院实验室对血液标本采用化学发光法联合胶体金法和胶体硒法进行HIV抗体筛查。筛查试验为阳性者，采用免疫印迹法或条带免疫法进行抗体补充试验，按《全国艾滋病检测技术规范（2015年修订版）》中的标准操作[8]。

采用BD公司生产的FACS Canto Ⅱ流式细胞仪检测外周血淋巴细胞亚群绝对计数，包括CD4+T淋巴细胞（CD3+CD4+）、CD8+T淋巴细胞（CD3+CD8+）、NK细胞（CD16+CD56+）和B淋巴细胞（CD3-CD19+）。

采用罗氏公司生产的COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan病毒载量检测系统检测血浆HIV-1病毒载量，HIV核酸＜20拷贝/mL定为检测下 限。

1.3 诊断标准判定

HIV感染诊断，依据《中国艾滋病诊疗指南（2018版）》为标准[9]。符合如下标准即可诊断HIV感染：HIV抗体筛查试验阳性和HIV补充试验阳性（抗体补充试验阳性或HIV核酸＞5 000 拷贝 / mL）。机会性感染的诊断以患者出院诊断为准，所有机会性感染的诊断均依据相应临床表现及相关辅助检查[9]。

1.4 资料采集

采集所有患者的资料，包括性别、年龄、职业、婚姻状况、HIV感染途径、机会性感染的种类、CD4+T淋巴细胞计数、CD8+T淋巴细胞计数、NK细胞计数、B淋巴细胞计数和HIV-1病毒载量。

1.5 统计学分析

采用SPSS 24.0软件进行统计学分析，计数资料采用构成比表示，组间比较采用Fisher精确检验；计量资料采用均数±标准差表示，组间比较采用方差分析或Kruskal-Wallis秩和检验；采用Spearman进行相关分析。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 患者基本信息

100例患者中，男86例，占86.0%，女14例，占14.0%。本地区AIDS患者合并机会性感染以41～65岁已婚男性农民或农民工居多，HIV-1传播途径以异性性行为为主。见表1。

表1 100例患者基本信息Table 1 Demographic data of 100 patients

2.2 机会性感染的种类

100例患者中，共发生机会性感染195例次，以细菌性肺炎位居首位（25.6%，50/195），其他常见的机会性感染还包括了EB病毒感染、肺结核、肺孢子菌肺炎、巨细胞病毒感染等。见表 2。

表2 195例次机会性感染的种类Table 2 Types of 195 opportunistic infections

2.3 机会性感染与CD4+T淋巴细胞的关系

1 0 0例患者中，根据C D 4+T淋巴细胞计数水平分为4组（＜100/μL、100～200/μL、201～350/ μL、＞350/μL），随着CD4+T淋巴细胞计数水平降低，机会性感染的发生明显增加。见表3。

2.4 CD8+T淋巴细胞、NK细胞和B淋巴细胞与CD4+T淋巴细胞的关系

100例患者中，随着CD4+T淋巴细胞计数水平降低，CD8+T淋巴细胞和B淋巴细胞计数水平也随之降低。在CD4+T淋巴细胞计数＜100/μL时，CD8+T淋巴细胞和B淋巴细胞计数水平明显低于其他三组，且差异具有统计学意义（P＜0.05）。NK细胞计数水平也随着CD4+T淋巴细胞计数水平降低而出现降低，但各组间差异无统计学意义（P=0.182）。见表4。

2.5 HIV-1病毒载量与CD4+T淋巴细胞的关系

100例患者中，随着CD4+T淋巴细胞计数水平降低，HIV-1病毒载量水平出现升高。在CD4+T淋巴细胞计数＜100/μL时，HIV-1病毒载量明显高于CD4+T淋巴细胞计数＞350/μL时，且差异具有统计学意义（P=0.026）。将HIV-1病毒载量与CD4+T淋巴细胞计数作相关性分析，两者呈负相关（r=-0.297，P=0.014），即当HIV-1病毒载量较高时，CD4+T淋巴细胞计数较低；而当HIV-1病毒载量较低时，CD4+T淋巴细胞计数较高。见表 5。

3 讨论

截至2018年底，我国报告现有HIV感染者、AIDS患者共86.1万例，2018年当年新发HIV感染者、AIDS患者为14.9万例，死亡3.8万例。HIV主要破坏人体免疫系统，导致人体出现免疫功能缺陷，引起各种机会性感染[10]。研究发现，HIV可导致CD4+T淋巴细胞出现凋亡或焦亡，HIV复制还可直接或间接对CD4+T淋巴细胞产生杀伤作用以及感染HIV后导致机体胸腺组织萎缩和胸腺细胞死亡等，上述过程共同导致了CD4+T淋巴细胞数量的进行性减少[9]。HIV感染还可引起CD8+T淋巴细胞、NK细胞和B淋巴细胞等其他免疫细胞出现异常免疫活化和功能障碍[9,11-12]。

表3 机会性感染与CD4+T淋巴细胞的关系Table 3 Correlation between opportunistic infections and CD4+T lymphocytes count

表4 CD8+T淋巴细胞、NK细胞和B淋巴细胞与CD4+T淋巴细胞的关系Table 4 Correlation between CD8+T lymphocytes， NK cells， B lymphocytes and CD4+T lymphocytes

表5 HIV-1病毒载量与CD4+T淋巴细胞的关系Table 5 Correlation between HIV-1 viral load and CD4+T lymphocytes count

大部分HIV感染者在初始感染HIV以后，一般经过6～8年的无症状期，最终发展为AIDS。在HIV感染的最终阶段，患者CD4+T淋巴细胞计数 ＜200 /µL，且HIV-1病毒载量明显升高，此时，患者容易出现各种机会性感染。有研究表明，AIDS患者合并机会性感染具有感染多样性、复杂性的特点，且病死率高[13-15]。另一研究发现，AIDS患者合并机会性感染主要由细菌、真菌和病毒引起[16-17]。本研究中，细菌性肺炎居首位（25.6%），其他常见的机会性感染还包括了EB病毒感染、肺结核、肺孢子菌肺炎和巨细胞病毒感染。

本研究发现，随着CD4+T淋巴细胞计数水平降低，AIDS患者合并机会性感染的发生例数随之增加。CD4+T淋巴细胞水平会影响机会性感染的发生，这与文献报道的结果一致[18]。因而，CD4+T淋巴细胞计数是预测AIDS患者合并机会性感染发生的重要指标。

本研究发现，随着CD4+T淋巴细胞计数水平降低，CD8+T淋巴细胞和B淋巴细胞计数水平也随之降低。在CD4+T淋巴细胞计数＜100 /μL时，CD8+T淋巴细胞和B淋巴细胞计数水平明显低于CD4+T淋巴细胞≥100 μL的其他三组，且差异具有统计学意义（P＜0.05）。NK细胞计数水平也随着CD4+T淋巴细胞计数水平降低而出现降低，但差异无统计学意义（P=0.182），这可能是由于纳入研究的病例数较少的原因。由于 HIV感染不仅能引起CD4+T淋巴细胞的数量减少，同时，还可引起CD8+T淋巴细胞、NK细胞和B淋巴细胞等出现异常免疫激活，从而引起这些细胞死亡，导致残存免疫细胞的减少。CD4+T淋巴细胞计数的降低预示病情出现了进展恶化，因而，CD8+T淋巴细胞、NK细胞和B淋巴细胞计数也会出现降低，上述免疫细胞的减少增加了机会性感染的发生概率。

本研究发现，当HIV-1病毒载量较高时，CD4+T淋巴细胞计数较低；而当HIV-1病毒载量较低时，CD4+T淋巴细胞计数较高，两者呈负相关。当CD4+T淋巴细胞计数＜100 /μL时，HIV-1病毒载量明显高于CD4+T淋巴细胞计数＞350 /μL时，且差异具有统计学意义（P=0.026）。这是由于HIV-1病毒载量的高低代表了体内病毒复制的数量，HIV-1病毒载量越高，CD4+T淋巴细胞在病毒直接或间接的作用下导致其破坏越多，进而导致CD4+T淋巴细胞数量的减少[19]，从而更容易合并机会性感染的发生。目前，预防机会性感染的最有效方法仍是ART[9，20]。ART能够明显抑制HIV复制，促进免疫功能恢复，进而降低AIDS患者机会性感染的发生率。

综上，本地区AIDS患者合并机会性感染的表现复杂多样，CD4+T淋巴细胞计数水平越低，免疫功能缺陷越明显，机会性感染的发生率越高。随着HIV-1病毒载量上升，CD4+T淋巴细胞呈现下降的趋势。因而，定期监测淋巴细胞亚群和HIV-1病毒载量，可以很好地预测疾病进展，评估抗病毒治疗疗效，预防机会性感染的发生。