沙门氏菌乳胶凝集方法与常规方法的比较分析

孙春玲

（1. 锡林郭勒职业学院，内蒙古 锡林浩特 026000；2. 锡林郭勒食品药品检验检测和风险评估中心，内蒙古锡林浩特 026000）

沙门氏菌（Salmonella） 是常见的食源性致病微生物，因其会导致人体出现伤寒伤寒、急性肠胃炎、菌血症和败血症等症状，还可能会引发肠穿孔、败血症，最终导致死亡，因此是食品微生物检测中常检项[1-4]。传统的沙门氏菌检测方法不但需要4～7 d才能完成，而且对检测人员能力要求较高，尤其是从选择性平皿上挑选典型特征菌落，所以选出一个简便、快捷并准确的方法是十分必要的。

乳胶凝集试剂盒是利用人工大分子乳胶颗粒标记的抗体可以与待测的目标微生物的抗原发生肉眼可见的凝集反应原理制成的试剂盒[5]。乳胶凝集试剂盒能在短时间内对可疑菌落进行判定，不需要任何仪器设备，方便快捷。研究了沙门氏菌乳胶凝集试剂盒在沙门氏菌检测中的作用，并对其效果进行评价，旨在探求一种适合于食品中沙门氏菌检测要求的快速准确方法，为提高今后沙门氏菌检测效率提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验菌株

沙门氏菌、大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌，实验室保藏菌株，编号分别为CMCC50071，ATCC25922 和CMCC26003。

1.1.2 试剂和仪器

（1） 试剂。缓冲蛋白胨水（BPW）、亚硫酸铋琼脂（BS）、亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）、四硫磺酸钠煌绿增菌液基础（TTB）、HE 琼脂、木糖赖氨酸脱氧酸盐琼脂（XLD）、沙门氏菌干制生化鉴定试剂盒、沙门氏菌显色培养基、0.1%煌绿溶液、碘液等，北京陆桥技术股份有限公司提供；沙门氏菌属诊断血清，宁波天润生物药业有限公司提供；沙门氏菌乳胶凝集试剂盒，广东环凯微生物科技有限公司提供。

（2） 仪器。BagMixer 400CC 型均质器，法国Interscience 产品；BSC-1360ⅡA2 型生物安全柜，北京东联哈尔产品；IGS400 型微生物培养箱，美国赛默飞产品；MLS-3751L-PC 型压力蒸汽灭菌器，松下健康医疗器械株式会社产品。

1.2 检测步骤

1.2.1 待测菌株的复苏

将实验室保藏的沙门氏菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌接种于25mL BHI 中，于36 ℃下培养24 h 备用。将上述BHI 培养物作为待测样品。

1.2.2 检测

取待测样品加入到BPW 增菌液中培养，移取1 mL 培养液转种于10 mL TTB 和SC 增菌，分别取增菌液1 环，划线接种于选择性培养基，自选择性培养基上选取菌落分别做沙门氏菌乳胶凝集试验、生理生化鉴定及血清学鉴定。

2 结果与分析

2.1 常规方法试验结果

不同种类菌种在沙门氏菌显色培养基上菌落形态见表1。

表1 不同种类菌种在沙门氏菌显色培养基上菌落形

沙门氏菌显色培养基说明书上沙门氏菌典型菌落为紫红色，铜绿假单胞菌也呈紫红色，其他菌落为蓝绿色、无色或不生长。由表1 可知，沙门氏菌在沙门氏菌显色培养基上呈紫色，而大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌均为蓝色菌落，试验结果与说明书相符。

按照GB 4789.4—2016[6]，选取沙门氏菌选择培养基上的紫红色菌落接种三糖铁琼脂、赖氨酸脱羧酶试验培养基、蛋白胨水、尿素琼脂、氰化钾培养基和营养琼脂平板。

不同种类菌种在沙门氏菌显色培养基上菌落形态见表2。

表2 不同种类菌种在沙门氏菌显色培养基上菌落形

由表2 可知，赖氨酸脱羧酶试验中对照管为黄色、试验管为紫色，赖氨酸脱羧酶判断为阳性；靛基质和尿素酶试验均为黄色，判断均为阴性；氰化钾试验中试验管不生长、对照管生长，氰化钾试验判断为阴性；结合三糖铁琼脂试验结果符合GB 4789.4—2016 中反应序号A1，生理生化试验鉴定为沙门氏菌。挑取营养琼脂平板的培养物做血清学鉴定，血清凝集，结果与生理生化试验鉴定一致，整个检测过程一共5 d。

2.2 乳胶凝集试验结果

不同种类菌种乳胶凝集试验结果见表3。

表3 不同种类菌种乳胶凝集试验结果

由表3 可知，在沙门氏菌乳胶凝集试验中，沙门氏菌和金黄色葡萄球菌能观察到凝集现象，而大肠埃希氏菌没有出现凝集现象，试验结果与说明书相符。虽然沙门氏菌和金黄色葡萄球菌能观察到凝集现象，但结合选择性平板上的典型特征，可以区分沙门氏菌和金黄色葡萄球菌。整个检测过程一共3 d。

3 结论

沙门氏菌是肠杆菌科的重要菌属，在检测沙门氏菌的过程中常常受到肠杆菌科菌的干扰[7]。沙门氏菌显色培养基因其能更方便有效地将目标菌和杂菌区分开，常常作为沙门氏菌检测的首选培养基。沙门氏菌、大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌在沙门氏菌显色培养基上呈现不同的颜色，能清晰区分开。

沙门氏菌乳胶凝集试剂是乳胶颗粒表面包被与沙门氏菌特异性抗原具有特异性的复合多价抗血清。有文献记载，乳胶凝集试剂可直接用于选择性增菌液筛选，但在乳胶凝集试验中，沙门氏菌和金黄色葡萄球菌都会出现凝集现象。因此，不能直接用选择性增菌液做乳胶凝集试验，而是先通过选择性平板分离可疑菌落，再做乳胶凝集试验。

因沙门氏菌显色培养基上有沙门氏菌典型形态，通过生理生化试验初步鉴定就判断为沙门氏菌，检测一共用时5 d，如果在沙门氏菌显色培养基上没有典型形态菌落，而在BS 培养基上有典型形态，并且需要补做甘露醇、山梨醇和ONPG 试验的需要7 d，操作步骤繁琐、耗时长、工作量大。而从选择性平板上挑取疑似菌落进行沙门氏菌乳胶凝集试验，通过有无凝集现象判断是否为沙门氏菌，检测过程需要3～4 d，与常规方法相比缩短了检测时间。根据HKM沙门氏菌乳胶凝集试剂盒说明书，试剂盒可检测99%以上有动力的沙门氏菌和特定的无动力沙门氏菌，对于有些沙门氏菌无法检测出，因此只能作为沙门氏菌检测的辅助方法。