三子养亲汤对哮喘模型大鼠幼鼠血清中IL-2 及IL-17 的影响

何飞雪，刘克新，龚本新，黎胜年，郑英，雷华凤

（1.中国科学院大学深圳医院（光明）妇幼保健部，广东 深圳 518107；2.中国科学院大学深圳医院（光明）东院区 儿科，广东 深圳 518107）

0 引言

哮喘（Asthma）发病率逐年增高，病因多样，影响因素众多，这种异质性疾病通常以慢性气道炎症为特征[1]，是影响所有年龄组的全球健康问题[2-5]，严重喘息发作在6～7 岁儿童中发作的比例高达20%[6]。中医药学认为“痰”在哮病的转归中处于枢纽的位置。三子养亲汤针对“痰”“气”“积”三大病理因素施治，其止咳平喘作用已得到广泛的认可。

本研究采用卵蛋白致敏配合吸入法建立大鼠幼鼠模型，应用三子养亲汤进行干预，观察其血清中IL-2 及IL-17 的变化。

1 实验材料

1.1 实验动物

雌雄各半实验级大鼠60 只，4 周龄，体重（100±20）g。一般状态良好，无脱毛，无断尾。

1.2 药物与试剂

三子养亲汤：实验所需的生药饮片莱菔子、紫苏子、白芥子均购于哈药集团世一堂中药饮片有限责任公司，加12 倍水煎煮2 次，1.5 h/次，浓缩成所需浓度，置-4 ℃冰箱内冷藏备用。

氢氧化铝干粉购自天津市巴斯夫化工有限公司；卵清蛋白购自哈尔滨百杰斯生物公司；大鼠血清IL-2、大鼠血清IL-17 酶联免疫试剂盒由南京建成生物研究所生产。

1.3 主要仪器

402AI 型超声雾化器、JY5002 型电子天平（0.01～500 g）；BS223S 型分析天平（0.001～220 g）；全自动酶标仪、微量移液器；TGL-16G 型台式离心机。

2 实验方法

2.1 模型的制备、分组及给药

将60 只大鼠随机分为三组，即空白对照组、哮喘模型组、中药灌胃组，每组20 只。空白对照组自由饲养，给药组注射卵清蛋白和氢氧化铝致敏，及雾化吸入OVA 造模。空白对照组予生理盐水进行腹腔注射及雾化吸入。中药灌胃组幼鼠从第1 次哮喘激发开始（造模第15 天）至处死前每天给予中药汤剂10.5 mL/kg，灌胃1 次，中药灌胃组连续给药7 d 后，取10 只处死，剩余继续给药7 d 后处死，采集标本。

2.2 中药制备

将浸泡30 min 后的中药饮片，煎煮1 次，倒出煎汁，再煎，2 次煎汁合在一起，煎煮成含量为1.5 g生药/mL 的混悬液，混匀后装瓶备用，放入冰箱于4 ℃保存。

2.3 血清IL-2、IL-17 含量测定

给药结束后，以ELISA 方法检测各组大鼠血清中IL-2 及IL-17 的含量。

2.4 统计学分析

用SPSS 13.0 处理数据，计量资料用均数±标准差（±s）表示，采用t检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

3 结果

血清IL-2、IL-17 的测定，详见表1。

表1 各组大鼠血清IL-17、IL-2 含量比较（±s,OD 值）

表1 各组大鼠血清IL-17、IL-2 含量比较（±s,OD 值）

注：△与空白对照组比较P＜0.05；※与哮喘模型组比较P＜0.05。

4 讨论

哮喘（Asthma）是儿童反复发作的常见疾病，以慢性气道炎症为特征，由多种细胞参与。与Th1/Th2 和Th17/Treg 细胞比例失衡有关[7-10]。白介素2是旁分泌生长因子及淋巴细胞生长因子，能加强B细胞的生长和分化、产生抗体，并能调节免疫系统，增强免疫力[11]，Th17 细胞分泌IL-17 效应因子，具有强大的招募中性粒细胞的作用[12-14]，促进多种细胞释放炎症因子，促进粘液腺分泌大量粘液，增加气道的高反应性，因而在哮喘中表现出促炎作用[15]。

三子养亲汤针对“痰”“气”“积”三大病理因素施治，紫苏子降气化痰，止咳平喘，使气降则痰不逆而喘平；白芥子温肺利气，化痰散结，使痰化气顺而喘平；莱菔子消食除胀，降气化痰，使气降则痰消，食消则满除。三者合用，可使气顺痰消，食积得化，咳喘得平，“寓运于消”，祛邪而不伤正，适合应用于儿童哮喘的防治。本研究表明与空白对照组比较，哮喘模型组IL-17 含量增加，其差异具有显著性（P＜0.05）；与哮喘模型组比较，三子养亲汤中药灌胃组可明显降低支气管哮喘大鼠血清IL-17 含量，具有显著性差异（P＜0.05）。与空白对照组比较，哮喘模型组大鼠血清IL-2 含量增加，其差异具有显著性（P＜0.05）；而三子养亲汤中药灌胃组与哮喘模型组比较无显著性差异（P＞0.05），其机制仍需进一步研究及探讨。