胸腔积液结核感染T细胞斑点试验对结核性胸膜炎的诊断分析

陈传伟，杨兰增，赵会芬

(永城市疾病预防控制中心 检验科，河南 商丘 476600)

结核性胸膜炎是结核病中仅次于肺结核的常见疾病，在胸腔积液的病因中占55%左右，主要是由于胸腔内有结核杆菌或其代谢产物进入后，引起胸膜炎症反应[1]。结核性胸膜炎发病早期并无特异性症状，需结合症状、体征、影像学检查等进行诊断，传统实验室检测方法无法准确进行诊断，而胸膜活检因创伤性较大，并未被广泛应用，因此对该病的诊断较困难[2]。结核感染T细胞斑点试验(T-cell spot of tuberculosis test，T-SPOT.TB)是新型细胞学检测技术，可通过检测患者全血或胸腔积液中的特异性致敏T细胞，对该病进行诊断。鉴于此，本研究探讨胸腔积液T-SPOT.TB对结核性胸膜炎的诊断价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料回顾性分析2018年1月至2020年1月永城市疾病预防控制中心72例结核性胸膜炎患者的临床资料，将其纳入观察组，将同期53例非结核性胸膜炎患者纳入对照组。观察组男43例，女29例，年龄18～72岁，平均(49.68±5.73)岁，病程1～8周，平均(3.72±2.49)周，其中单纯性结核性胸膜炎58例，合并陈旧性肺结核8例，合并免疫系统疾病6例。对照组男32例，女21例，年龄19～73岁，平均(49.73±5.78)岁，病程1.5～8周，平均(3.75±2.54)周，其中心源性胸腔积液17例，恶性胸腔积液12例，炎性胸膜炎18例，风湿性疾病3例，其他3例。两组一般资料比较，差异无统计学意义(均P>0.05)，有可比性。

1.2 入选标准(1)纳入标准：①观察组患者符合结核性胸膜炎诊断标准[3]，且经临床症状、体征、经皮胸膜穿刺活检、诊断性治疗确诊；②对照组患者存在胸腔积液，并随访1～3个月排除结核病；③人类免疫缺陷病毒阴性。(2)排除标准：①接受过抗结核治疗；②严重心肾功能异常；③意识障碍或精神疾病；④存在穿刺禁忌证。

1.3 检测方法(1)采用全自动生化仪(普朗，规格：PUZS-600A/B，京械注准20182220295)检测胸腔积液腺苷脱氨酶(adenosine deaminase，ADA)。(2)采用荧光染色法检测胸腔积液结核杆菌DNA(tuberculosis DNA，TB-DNA)，按试剂盒(成都博奥晶芯生物科技有限公司，国械注准20173401339)说明书进行检测。(3)胸腔积液T-SPOT.TB。将30 mL胸腔积液经培养液处理后，将淋巴细胞用人淋巴细胞分离液进行分离，加入0.5 mL AIM-V培养液稀释至每毫升含2.5×106个淋巴细胞，每份标本4个孔分别为AIM-V培养基、A抗原(早期分泌靶抗原6)、B抗原(培养滤液蛋白)及植物血凝素，将100 μL细胞终溶液加入每个孔，培养箱(体积分数为5%的二氧化碳，37 ℃)孵育16～18 h，次日洗板并加入50 μL酶标抗体工作液，孵育1 h(2～7 ℃)，再加入50 μL底物工作液，使用显色剂及酶标二抗显色6～7 min(室温)，冲洗干燥后，使用显微镜(南京江南永新光学有限公司，苏械注准20172221144)对斑点数进行计数。

1.4 判定标准依照说明书进行判定。(1)ADA阳性：胸腔积液ADA≥45 U·L-1。(2)TB-DNA阳性：3张TB-DNA涂片中任2张找到抗酸杆菌。(3)T-SPOT.TB阳性：第4孔斑点数在25个以上则试验有效，第2孔、第3孔之和在6个以上判定为阳性[4]。

1.5 统计学方法采用SPSS 25.0统计软件处理数据。计数资料以百分数和例数表示，组间比较采用χ2检验。计算胸腔积液ADA、TB-DNA、T-SPOT.TB诊断结核性胸膜炎的效能，采用一致性Kappa检验，以K值评价不同检测结果的一致性，K值≥0.74即一致性高，0.40～<0.74即一致性一般，<0.40即一致性差。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 诊断结果及性能胸腔积液ADA诊断符合率为69.60%(87/125)，TB-DNA诊断符合率为68.80%(86/125)，T-SPOT.TB诊断符合率为85.60%(107/125)。T-SPOT.TB检测的一致性最高(Kappa=0.742，P<0.05)。见表1。

表1 3种检查方法阳性检出率比较[n(%)]

2.2 诊断效能3种检测方法组间比较，差异有统计学意义(P<0.05)，胸腔积液T-SPOT.TB检测灵敏度、特异度、准确度高于ADA、TB-DNA(P<0.05)。见表2。

表2 3种检测方法的诊断效能比较(%)

3 讨论

我国结核杆菌感染率在全球仅次于印度，居于第2位，而结核杆菌引起的结核性胸膜炎较常见，但起病隐匿，易造成漏诊、误诊[5]。临床上诊断结核性胸膜炎常采用胸膜穿刺活检进行结核菌培养试验或病理检查。由于细菌培养需要消耗较长时间，不利于早期诊断该病；病理检查阴性率较高，存在一定的局限性。近年来，通过TB实验室检查诊断结核性胸膜炎越来越受到关注，其中ADA、TB-DNA较常见。ADA为特异性核酸代谢酶，可影响机体免疫活性，而结核性胸膜炎患者胸腔积液中的免疫细胞受刺激后，大量促进淋巴细胞释放，而辅助性T细胞增多可使ADA水平升高[6]。虽然ADA检测灵敏度、特异度均较高，但研究发现，胸腔积液为细菌感染性或风湿性时，ADA检测水平也较高[7]。胸腔积液TB-DNA是通过对结核杆菌DNA的数量进行聚合酶链式反应技术检测，判定是否存在结核杆菌感染，特异性极高，但其敏感性较差，考虑主要是由于胸腔积液中TB数量少所致[8]。

本研究结果显示，T-SPOT.TB检测的一致性最高，胸腔积液T-SPOT.TB检测的灵敏度、特异度、准确度高于ADA、TB-DNA，说明T-SPOT.TB检测胸腔积液对结核性胸膜炎灵敏度、准确度及一致性较高，具有重要的诊断价值。结核性胸膜炎感染后，记忆性T细胞可长期存在于胸腔积液中，当该病的特异性抗原与记忆性T细胞再次相遇时，可使其迅速增殖活化，释放γ-干扰素。T-SPOT.TB是通过检测IFN-γ分泌情况，分析TB特异性抗原是否对单核细胞产生刺激，以判断是否存在结核杆菌感染[9]。A抗原、B抗原可使胸腔积液中效应T细胞受到刺激后释放，使斑点数增加。该检测技术具有快速、高效的优势，检测全程1～2 d即可完成；刺激源选择致病性TB抗原，具有较高特异性，并且能够对1/100万的细胞因子进行检测，具有高灵敏度[10-11]。结核性胸膜炎患者接受治疗后，TB被消灭，胸腔积液中的T淋巴细胞消失，因此该检测方式还能够对患者体内TB是否被消灭进行评估，从而评估治疗效果[12]。

综上所述，胸腔积液T-SPOT.TB检测对结核性胸膜炎具有较高的灵敏度、准确度，具有重要的临床诊断价值。