胸水ADA、TB-DNA 及BACTEC MGIT 960 快速联合检测在结核性胸膜炎中的诊断价值

马志强，王 霖，王晓燕，瞿春燕，高 茜，许世涛，刘子龙

（昆明市第三人民医院检验科，云南昆明 650301）

结核病是由结核分枝杆菌感染人体后引起一种具有传染性的慢性疾病[1]，该病有流行性强、危害程度高以及造成死亡人数较多的特点。在2018年全球结核病报告显示中，我国约有89 万人新感染结核，对国人的健康和生活质量有较严重的影响[2-3]。结核分枝杆菌感染者就诊时往往因“漏诊”“误诊”而错失最佳诊断和治疗时机[4]，一般认为结核病实验室诊断的“金标准”是细菌学痰培养检测，但由于痰结核菌培养有要求较高、培养周期长等缺陷，并不利于结核菌感染者的早期快速诊断[5]。临床常用检测方法有痰涂片抗酸杆菌法、聚合酶链式反应法（PCR）、以及影像学和病理学等检测方法，但这些方法敏感性较低，阳性率不高，不能完全满足临床的需要[6-8]，在实验室检测中：ADA、TB-DNA 及BACTEC MGIT 960 等检测方法，在灵敏度和特异性上都有各自的优缺点[9-11]，但是上述方法在联合检测上有何价值还未明确。据此，本研究分析ADA、TB-DNA 及BACTEC MGIT 960 快速联合检测在疑似结核感染诊断中检测数据，明确快速联合检测在结核病诊断中的应用价值，为结核病的临床诊断提供实验室依据。

1 材料与方法

1.1 材料来源

收集昆明市第三人民医院2017 年10 月至2019 年10 月收治的100 例疑似结核性胸膜炎患者的胸水标本进行研究。其中男58 例，女42 例，年龄7～79 岁，平均（36.7±5.4） 岁。本研究通过了昆明市第三人民医院伦理委员会审批，所有诊断均按照《肺结核诊断标准》（WS288-2017）[12]。

1.2 主要仪器及试剂

主要仪器：美国贝克曼全自动生化分析仪AU680，美国伯乐荧光定量PCR 仪CFX96，美国全自动结核菌培养鉴定及药敏分析仪BD960。主要试剂：ADA 腺苷脱氧酶检测试剂盒（美康生物科技有限公司H014T1），结核分枝杆菌核酸检测试剂盒（中山大学达安基因股份有限公司0A-052），结核分枝杆菌培养管（美国BD 公司L000041JAA）。

1.3 操作方法

将收集到的疑似结核性胸膜炎患者胸水标本，在2～8℃环境下及时送到昆明市第三人民医院检验科进行以下检测：

1.3.1 ADA 检测 取3～5 mL 胸水标本后及时分离，样本稀释后在室温下4 000 r/min 离心10 min，使用宁波美康试剂盒于奥林巴斯AU680 进行上机检测并读取结果。

1.3.2 TB-DNA 检测 取1 mL 胸水置1.5 mL 离心管中，离心机12 000 r/min 离心5 min，弃上清；沉淀加无菌生理盐水1 mL 打匀，12 000 r/min 离心5 min；重复2 次。金属浴10 min（误差不超过1 min）。12 000 r/min 离心5 min 后上机并报告结果。

1.3.3 BACTEC MGIT 960 检测（金标准法）取5～10 mL 胸水于刻度离心管，4 600 r/min 离心15 min，弃上清，加灭菌PBS 缓冲液2～3 mL 混匀，4 600 r/min 离心10 min，弃上清，再加灭菌PBS 缓冲液2 mL，充分混匀。最后向培养管中加入0.8 mL 营养添加剂/杂菌抑制剂混合物，用移液器取0.5 mL 处理后的标本液加入MGIT 培养管内，仪器自动培养并报告结果。

1.4 统计学处理

采用SPSS 分析数据，计数资料用率（%） 表示，组间比较进行χ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 联合检测与金标准法及其它检测结果差异比较

BACTEC MGIT 960 检测法由于灵敏度和特异高而作为检测金标准，其结果阳性率为20%。ADA、TB-DNA 及BACTEC MGIT 960 快速联合检测结果阳性率为77%，其它检测结果的阳性率ADA+TB-DNA 为57%，ADA+BACTEC MGIT 960为52%；联合检测结果阳性率显著高于金标准法及其它检测（P＜0.05），见表1、图1。

表1 联合检测与金标准法及其它检测结果比较Tab.1 Comparison of the results in combined test with the gold standard method and other tests

图1 联合检测与金标准法及其它检测阳性结果差异比较Fig.1 Comparison of positive results in combined test with the gold standard method and other tests

2.2 联合检测与金标准法及其它检测诊断效能对比

ADA、TB-DNA 及BACTEC MGIT 960 快速联合检测结果敏感度为88.9%、特异度为92.8%，AUC 为0.95；BACTEC MGIT 960 金标准法检测结果敏感度为90.9%，特异度为97.6%，AUC 为0.83；其它检测结果敏感度和特异度分别为ADA+TB-DNA 87.9%、90.4%，ADA+BACTEC MGIT 960 88.7%、93.0%；AUC 分别为0.82 和0.87，联合检测诊断效能均高于金标准法和其它检测，见表2、图2。

表2 联合检测与金标准法及其它检测诊断效能对比Tab.2 Comparison of diagnostic efficacy of combined detection with gold standard method and other tests

图2 各检测法诊断效能对比Fig.2 Comparison of diagnostic efficiency of various detection methods

3 讨论

结核病是人体感染结核分枝杆菌后，由于感染者抵抗力降低而导致的一种慢性传染病，可累及肺、肾、肠和胸膜等器官。菌阳患者为最主要的传染源[13-14]。该病有感染率高、耐药性强、疫情难以递减的特点，因此给患者及家庭带来严重的生活负担。据统计[15]，全球大约有1/3 的人感染过结核分枝杆菌，感染后可因患者抵抗力和结核杆菌数量的改变可发展为活动性肺结核，进而成为新的传染源[16-17]。结核病的实验室快速诊断是结核防控的重点措施之一。结核病诊断的金标准目前普遍认为是样本中检出结核杆菌。但由于培养有周期长、阳性检出率低的缺点。因此，寻找结核病的快速诊断检测方法对结核病的临床诊治至关重要。

腺苷脱氨酶（adenosine deaminase，ADA） 广泛存在于人体组织及各种细胞中。近年来，作为一种临床常用的监测指标，胸水ADA 的实验室检测在诊断结核性胸膜炎中发挥着重要的作用，同时在其他患者如类风湿关节炎和脓胸患者中，ADA 的水平也可上升[18]。此外，由于年龄段的不同，胸水ADA 检测的阳性阈值也有明显的差别[19]。在笔者实验室一般以ADA＞35 U/L 为判定的临界值。但在不同年龄段的疑似肺结核患者中，胸水ADA的阳性判定值也不同，并且其检测值升高也可发生在非结核的患者中[20]。因此，本研究结果表明，若用胸水ADA 对疑似结核病患者进行单一检测，则结果阳性率较低，应用联合检测可显著提高检测阳性率。同时，联合检测与单一ADA 金标准法检测相比其对疑似结核病诊断效能有显著的提高。

随着分子生物学技术的快速发展，TB-DNA 检测的技术作为诊断结核病常用的方法之一也得到了快速的发展。目前，笔者对疑似患者胸水标本进行TB-DNA 检测，检测结果阳性率与ADA 结果无显著差异。在本研究中ADA 阳性组仍有少数患者TB-DNA 结果为阴性，可能与患者免疫功能不全或使用免疫抑制剂，以及使用抗结核药物等因素有关[21]。

BACTEC MIGT 960 是一种集结核杆菌培养、鉴定和药敏于一体的荧光检测系统。与MIGT 快速液体培养管搭配使用，即可实现结核杆菌的鉴定。BACTEC MGIT 960 可对结核分枝杆菌培养的结果进行准确、快速的检测，但是单纯用一种检测方法的阳性率并不能达到理想的状态[22]。在本研究中，笔者通过 BACTEC MGIT 960 与 ADA、TB-DNA 及BACTEC MGIT 960 快速联合检测结果进行对比分析，虽然BACTE CMGIT 960 检测结果其阳性率和诊断效能不及联合检测，但不可否认的是BACTEC MGIT 960 作为较先进的自动化结核杆菌药敏检测系统，其可以检出微量的结核分支杆菌，为结核病的耐药方面提供临床价值。

综上所述，本研究运用了三种联合方法对疑似结核性胸膜炎患者胸水进行检测，结果表明在疑似结核性胸膜炎的实验室诊断中，ADA、TB-DNA 及BACTEC MGIT 960 快速联合检测的结果阳性率和诊断效能均显著高于金标准法和其它检测，检测结果准确、可靠，临床诊断价值最高，值得在临床多加推广与应用。