帕金森综合征患者CD14mRNA与TLR4mRNA的表达及意义

刘静静 李素萍 王 青

焦作市第二人民医院，河南 焦作 454002

帕金森综合征(Parkinson syndrome，PS)是一种中老年人常见的低病死率、高致残率的神经系统变性疾病，近年来，其发病率呈现增高趋势。PS病人临床表现为感觉障碍、嗅觉减退、睡眠障碍等非运动症状与及静止性震颤、肌强直、运动迟缓、姿势步态异常等运动症状，数据显示约50%的患者伴有抑郁症，若诊治不当极有可能加重残疾，引起严重并发症，降低病人生活质量，加剧病人、家庭、社会负担。目前临床治疗以改善症状、提高生活质量为原则，而焦虑、抑郁不良心理状态、运动与非运动症状严重程度均会不同程度影响病人生活质量的提高。PS是一种神经系统渐进性疾病，随着病程的发展，患者的认知及行为将受到显著影响，严重降低了患者及其家属的生活质量[1]。临床研究发现帕金森引起的一系列并发症与患者的神经元细胞受损密切相关，且神经元细胞损伤可能与机体固有因子的异常表达显著相关[2-3]。单核细胞是机体血液中最大的白细胞，是机体防御系统最重要的组成部分，是CD14mRNA、TLR4mRNA表达的主要场所。临床研究发现CD14mRNA、TLR4mRNA的异常表达会导致集体固有免疫因子的免疫抑制，严重时会导致神经元细胞的变性，导致帕金森症状加重[4-5]。临床研究证实机体固有免疫系统与帕金森的发生、发展具有显著相关性，为了深入探讨CD14mRNA、TLR4mRNA的表达与帕金森综合征的相关性，本研究以2018-02—11收治的80例帕金森综合征患者以及80例健康志愿者为对象，探讨CD14mRNA、TLR4mRNA 在帕金森综合征患者中的表达及意义。

1 资料与方法

1．1一般资料以焦作市人民医院2018-02—11收治的80例帕金森综合征患者以及80例健康志愿者为研究对象，其中80例帕金森综合征患者为实验组，80例健康志愿者为对照组。诊断标准：中华医学会帕金森病学组制定的帕金森综合征临床诊断标准。纳入标准：(1)经临床确诊的帕金森病患者；(2)患者精神状态正常，具有完全自主行为能力；(3)入组患者不合并其他器质性疾病；(4)患者及患者家属对试验内容知情，并自愿签署知情同意书。排除标准：(1)合并其他器质性疾病的患者；(2)合并精神系疾病，且不具有完全自主行为能力的患者；(3)合并其他免疫缺陷性疾病或者癌症患者；(4)近期有服药免疫抑制剂或增强剂病史患者。2组一般资料差异无统计学意义(P>0.05)，本试验经我院伦理委员会批准。2组患者一般资料见表1。

1．2方法根据CD14mRNA、TLR4mRNA的表达水平统计学分析2组性别、年龄、H-Y分期、病程、运动并发症、服药激素或L-DOPA类药物。CD14mRNA、TLR4mRNA的表达水平测定根据2组受试者血液样品检测结果，采集2组受试者晨起空腹静脉血，10 000 rpm离心5 min收集受试者血细胞，血细胞样品加入TRIZOL裂解血细胞，按1：5的比例在裂解血细胞样品加入氯仿剧烈振摇，室温放置3 min后12 000 g，4 ℃，离心15 min，收集RNA样品。按等体积比例在RNA样品中加入异丙醇，-20 ℃静置30 min，弃上清后样品中加入75%乙醇1 mL，震荡混匀后加入20 μL焦碳酸二乙酯，室温下将样品放置5 min待其完全溶解。在上述样品中加入5 μL逆转录酶，先室温孵育20 min，后置于37 ℃水浴箱孵育半小时。在孵育好样品中加入5 μmol/L上游、下游引物，再加入逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)混合液5 μL，最后利用脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)稀释至20 μL，反应条件：95 ℃ 3 min、95 ℃ 15 s、90 ℃ 5 s，共40个循环，碱基长度扩增为134 bp。

表1 2组患者一般资料对比

1．3观察指标观察2组受试者CD14mRNA、TLR4mRNA的表达水平，CD14mRNA、TLR4mRNA的表达水平与患者性别、年龄、H-Y分期、病程、运动并发症、服药激素或L-DOPA类药物的关系作为观察指标。

2 结果

2．12组CD14mRNA、TLR4mRNA的表达水平对比实验组基因CD14mRNA、TLR4mRNA的表达水平均显著高于对照组(P<0.05)，CD14mRNA、TLR4mRNA的表达水平见表2。

2．2CD14mRNA、TLR4mRNA的表达水平与PD患者临床分期的关系H-Y>2，CD14mRNA、TLR4mRNA表达水平均较低，且与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。H-Y=2.5，实验组CD14mRNA、TLR4mRNA表达水平与H-Y=2时相比显著升高(P<0.05)，且随着患者H-Y分期的加重，CD14mRNA、TLR4mRNA表达水平逐渐升高，且各病理分期患者CD14mRNA、TLR4mRNA表达水平与随着病情的增加而显著增加(P<0.05)。CD14mRNA、TLR4mRNA的表达水平与PD患者临床分期的关系见表3。

表2 2组CD14mRNA、TLR4mRNA的表达水平对比Table 2 Comparison of the expression levels of CD14mRNAand TLR4mRNA in the two

表3 CD14mRNA、TLR4mRNA的表达水平与PD患者临床分期的关系

2．3CD14mRNA、TLR4mRNA的表达水平与PD患者临床资料回顾性分析对患者CD14mRNA、TLR4mRNA的表达水平与患者一般资料相关性回顾性分析显示，CD14mRNA、TLR4mRNA的表达水平与患者性别、年龄、病程、运动并发症有无、是否服用受体激动剂或L-DOPA类药物差异无统计学意义(P>0.05)。CD14mRNA、TLR4mRNA的表达水平与PD患者临床资料回顾性分析见表4。

3 讨论

PD是一种中老年人常见的神经系统退化性疾病，临床症状表现为震颤、肌强直以及运动减少、记忆力减退以及认知障碍等，严重降低了患者的生活质量[6-11]。临床研究发现机体固有免疫系统与PD患者的病情发生、发展具有显著相关性[12-15]。目前临床针对PD的研究大多数仅与中枢神经系统免疫机制相关，很少参与外周相关固有免疫机制[16-20]。临床研究发现，随着PD患者病情的加重，患者外周单核巨噬细胞前体细胞逐渐增多，且显著高于健康受试者。结果表明PD的发生、发展与患者免疫机制有很大的相关性[21-23]。

表4 CD14mRNA、TLR4mRNA的表达水平与PD患者临床资料的关系

3．1CD14mRNA、TLR4mRNA在PD患者体内表达水平CD14即内毒素受体抗体，是一种脂质体受体，主要在单核巨噬细胞表达。TLR4即Toll样受体，是固有免疫的病原体相关分子模式受体，主要表达于髓源性细胞。固有免疫异常是PD患者病情恶化的主要危险因素之一，其中临床研究表明CD14mRNA、TLR4mRNA表达产物是影响PD患者病情的主要因素[24-26]。CD14/TLR4表达产物分别为CD14mRNA、TLR4mRNA的表达产物，两种表达产物具有协同作用，能够特异性识别革兰阴性杆菌脂多糖，并且通过参与基因下游信号通路的激活参与PD患者的固有免疫应答[27-29]。相关研究通过构建动物模型对机体固有免疫机制对PD病情的影响进行了研究，结果显示PD模型组动物体内CD14mRNA、TLR4mRNA的表达水平显著高于正常模型组[30-34]。

3．2CD14mRNA、TLR4mRNA表达水平与PD患者H-Y分级相关性分析PD患者CD14mRNA、TLR4mRNA表达水平显著高于健康受试者(P<0.05)，且PD患者随着H-Y病理等级的加重，CD14mRNA、TLR4mRNA表达水平逐渐升高。H-Y>2 时CD14mRNA、TLR4mRNA表达水平均较低，且与健康受试者无显著差异(P>0.05)。H-Y=2.5时，实验组CD14mRNA、TLR4mRNA表达水平与H-Y=2时相比显著升高，差异显著(P<0.05)。随着患者H-Y分期的加重，CD14mRNA、TLR4mRNA表达水平逐渐升高，且各病理分期患者CD14mRNA、TLR4mRNA表达水平与随着病情的增加而显著增加(P<0.05)。

3．3CD14mRNA、TLR4mRNA表达与患者性别、年龄等一般资料相关性分析对患者CD14mRNA、TLR4mRNA的表达水平与患者一般资料相关性回顾性分析结果显示，CD14mRNA、TLR4mRNA的表达水平与患者性别、年龄、病程、运动并发症有无、是否服用受体激动剂或L-DOPA类药物差异无统计学意义(P>0.05)。

CD14mRNA、TLR4mRNA在帕金森综合征患者体内表达水平随着患者病情的加重逐渐增加，因此通过检测CD14mRNA、TLR4mRNA在帕金森综合征患者体内表达水平的差异可有效检测患者病情的发生、发展，同时为临床治疗提供参考依据。