在医疗船上开展精准病理诊断技术

【摘 要】：目的 在医疗船上开展快速石蜡切片和免疫组织化学染色技术，为快速和精准病理诊断打下基础。方法 开展病理组织快速制片过程，病理组织经过95%、100%梯度酒精脱水和二甲苯透明、浸蜡和石蜡切片过程，以及开展手工免疫组织化学染色技术，包括抗原修复、抗原和抗体孵育、显色等步骤实现快速和精准病理诊断。结果 经过快速石蜡流程的病理切片在镜下组织结构清晰，手工免疫组化结果阳性定位清晰、不扩散，阴性结果不着色、背景清晰、无非特异性着色。整个手工免疫组化过程由人工控制，在处理抗原修复和抗体孵育时间、阳性着色过深、过淡和非特异着色方面可进行人工干预，免疫组化结果更利于病理医生判读。在医疗船上实现快速和精准病理诊断只需配备简易的实验设备和培训病理医生即可实现。结论 为了在医疗船上实现快速和精准病理诊断，可以尝试在医疗船上开展病理快速石蜡切片和免疫组化技术，实现病理快速和精准诊断，要加速配备医疗船上的病理实验设施和培养病理医生的综合素质，更好的服务我们海军官兵和更多群体。

【关键词】：快速病理制片;免疫组织化学;精准病理诊断;医疗船

Abstract：Objective Rapid paraffin sections and immunohistochemical staining were carried out on medical ships to lay the foundation for rapid and accurate pathological diagnosis. Methods rapid histopathological production was carried out. pathological tissues were subjected to 95%，100% gradient alcohol dehydration and xylene transparent， wax and paraffin sections， and manual immunohistochemical staining techniques， including antigen repair， antigen and antibody incubation， color development and other steps to achieve rapid and accurate pathological diagnosis. Results The pathological sections of the rapid paraffin process were clearly organized under the microscope， the positive localization was clear and non-diffusion was observed. The whole process of manual immunohistochemistry was controlled by artificial intervention in the treatment of antigen repair and antibody incubation time， too deep positive coloring， too light and non-specific coloring. The results of immunohistochemistry were more favorable for pathologists to interpret. Rapid and accurate pathological diagnosis on a medical ship can be achieved only with simple experimental equipment and training of pathologists. Conclusion In order to achieve rapid and accurate pathological diagnosis on medical ship， we can try to carry out pathological rapid paraffin section and immunohistochemistry technology on medical ship to realize pathological rapid and accurate diagnosis. It is necessary to speed up the installation of pathological experimental facilities on medical ship and cultivate the comprehensive quality of pathologists， and better serve our navy officers and soldiers and more groups.

keywords： Rapid Pathology; immunohistochemistry;;Accurate Pathological Diagnosis;medical boat

【中圖分类号】R733.1【文献标识码】A【文章编号】1672-3783（2020）08-24--02

引言：

随着我国海军建设的不断发展，作为服务和保障我国海军力量的海军军医大学医务人员的素质培养就显得尤为重要。为了保障海军的每次出海和远洋任务，确保医疗船上设施的齐全和医务人员的素质至关重要。分析近端时期出海保障任务的实际情况，觉得有必要进一步加强医疗船上的医疗设施配备和医务人员素质的进一步提高。

现有医疗船上的医疗保障体系总体是较为完备的，日常的官兵医疗检查包括：听诊、测血压、抽血检验、X光摄片、B超、心电图检查、注射输液等一整套服务保障较为全面。即便官兵罹患肿瘤等疾病也可以开展手术及病理冰冻切片，由病理医生为其作出诊断。由于冰冻切片只能提供初步诊断，有时会耽误病情，要想得到精准的病理诊断需要进行石蜡HE切片。开展石蜡HE切片需要大型的病理组织脱水机和病理组织包埋机才能实现，现在介绍一种病理组织快速制片过程，病理组织经过95%、100%梯度酒精脱水和二甲苯透明、浸蜡和石蜡切片过程即可完成。同时进一步开展手工免疫组织化学染色技术，包括抗原修复、抗原和抗体孵育、显色等步骤即可实现快速和精准病理诊断。

1 材料和方法：

开展组织快速脱水流程，需要的设备包括95%酒精1瓶500ml、100%酒精1瓶500ml、二甲苯1瓶500ml、病理专用石蜡数块、恒温箱一台、四个不锈钢小罐子、石蜡切片机、摊片机、病理载玻片、苏木素和伊红染液，在30分钟内即可制成病理组织蜡块，然后通过石蜡切片制作成HE病理切片。同时开展手工免疫组织化学染色技术，材料包括：家用电磁炉一台、家用不锈钢锅子一个（3000ml）、孵育盒、免疫组化试剂、免疫组化防脱片、蒸馏水等即可。通过抗原修复、抗原和抗体孵育、显色即可完成免疫组化染色操作步骤，实现HE病理切片和免疫组化染色技术在医疗船上的应用。

1.1 病理组织蜡块制作方法：把手術或者穿刺小标本用小块纱布包裹放入恒温箱内浸入95%的酒精5分钟后，再进入100%酒精5分钟，然后进入二甲苯5分钟后用石蜡包埋即完成病理组织块的制作。然后由病理医生通过石蜡切片在1-2分钟内制作成完成，通过烤片、手工染色，一般在20分钟之内即可完成一张HE病理切片，非常节约时间、成本极低。

对于疑难的病理诊断还可以开展手工免疫组织化学检查项目，免疫组织化学检查一般都在后方医院进行，需要全自动免疫组化仪才能开展，一般时间较长，需要一至两天的工作流程。而手工免疫组织化学检查方法只需要2-3小时，运用经典的手工抗原修复方法、抗原抗体结合、显色即可完成。

1.2 免疫组化技术具体方法：

1.2.1 修复抗原

把插入染色架的切片放入二甲苯中进行脱蜡约20分钟，切片依次经过二甲苯、梯度酒精至水洗。取40mlEDTA原液（PH8.0）倒入不锈钢锅中再倒入2000ml蒸馏水，将修复液彻底浸没所有切片，加热至沸腾然后计时20分钟，保持小火力沸腾，然后关闭电磁炉，室温下自然冷却至室温后流水冲洗，PBS洗3次，每次2分钟。

1.2.2 过氧化氢封闭阻断

把冲洗好的切片放置于湿盒中，在所有的切片上滴加0.3%过氧化氢放置2分钟，用于阻断内源性过氧化物酶活性，减少背景着色。

1.2.3 滴加一抗

把切片平铺在湿盒中，然后加载（一抗）100ul，室温下放置1小时整，然后把所有切片用PBS缓冲液洗3次，每次2分钟。

1.2.4 滴加二抗

把所有的切片平铺在湿盒中，加载二抗（羊抗鼠/兔IgG聚合物），室温下孵育20分钟然后PBS洗3次，每次2分钟。

1.2.5 显色、苏木素衬染细胞核

选用DAB显色试剂盒配制显色液，用等量的缓冲液、底物、色原然后进行20倍稀释配成显色剂待用。在所有的切片上各滴加100ul的DAB显色液显色5分钟，根据显色程度最长10分钟，然后用水冲洗终止显色。把所有显色好的切片分成几架放置于苏木素染液中衬染细胞核1-2分钟后水洗，用0.5-1%盐酸酒精分化后再浸入流水冲洗，然后置于37摄氏度温水中蓝化。

1.2.6 切片脱水、透明

把所有的切片经过梯度酒精脱水、二甲苯透明再用树胶进行封片。

1.2.7 镜下分析观察染色结果

这种手工方法与全自动免疫组化仪器比起来，效果绝不逊色而且结果和满意度可能超越全自动机器。因为人工方法干预性强，在抗原修复和抗原抗体结合的时间上可以灵活机动、改变时差。我科在全国和上海市历年病理石蜡切片、冰冻切片和免疫组织化学技术竞赛中运用手工方法多次超越全自动机器获奖。

2 结果：

经过快速石蜡流程的病理切片在镜下显示组织结构清楚，细胞核轮廓及核染色质清晰，细胞质着色鲜艳，核质对比好，相比较冰冻切片，细胞核和染色质不清晰，细胞质着色不鲜艳，镜下组织结构模糊等方面染色效果有极大的提高。有了这样高品质的快速石蜡病理切片，病理医生即使遇上不典型的病例也能迅速做出快速精准的诊断。遇上疑难的病例，手工免疫组化结果可以在几个小时内迅速提示患者肿瘤的良恶性及原发灶和转移等信息、恶性肿瘤来源以及鉴别诊断。手工免疫组化结果在镜下显示：组化阳性为棕色，背景清晰，细胞核、细胞浆、细胞膜阳性定位清晰不扩散、阳性着色适中，着色既不淡也不过于深。组化阴性结果为不着色，背景无非特异性着色。整个手工免疫组化过程由人工控制，在处理抗原修复和抗体孵育时间长短、阳性定位着色过深、过淡和非特异着色方面可以进行人工干预，使得组化结果更利于病理医生判读。

3 结论：

为了在医疗船上实现快速和精准病理诊断，可以在船上开展病理快速石蜡切片和免疫组化技术，实现病理快速和精准诊断。由于病理医生在冰冻切片技术的支持下只能做出初步的病理诊断结果，在遇到不典型和疑难的病例中则无法做出精准的病理诊断，开展病理快速石蜡切片和免疫组化技术可以弥补冰冻切片技术的不足，可以让病理医生遇到不典型和疑难病例的时候做出快速和精准的病理诊断。

由于各单位病理医生常年忙于医院繁重的常规医疗任务，对于病理技术方面尤其是快速石蜡切片技术和免疫组织化学手工技术可能经验不足。因为在后方医院常规工作中，病理石蜡、冰冻切片、免疫组织化学技术是医技人员的工作职责，医生一般无需过于深入掌握，这就需要我们根据当前形势把快速石蜡切片和免疫组化手工技术运用到医疗船上，加速配备医疗船上的病理实验设施和培养病理医生的综合素质，让海军官兵和更多群体在执行长时间远洋任务的时候能随时知道自己的精准病情。这就需要我们通过学习和培训来掌握更多的病理技术知识，更好的服务我们海军官兵和更多群体，其意义非常深远。

参考文献

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