胍基乙酸中药制剂对小鼠的急性毒性试验研究

张 泰， 李抒柏， 高 畅， 金英海*， 杨立彬

(1.延边大学农学院，吉林 延吉 133000；2.北京君德同创农牧科技股份有限公司,北京 100089)

胍基乙酸是合成肌酸的前体物[1-2]，主要存在于肌细胞中，为机体提供能量，但很多外源性肌酸价格昂贵且不稳定。胍基乙酸中含有的高能磷酸基团是肌肉组织中的主要供能物质。中药源于自然界，具有抗应激功能、提高机体免疫机能等特点[3]，作为饲料添加剂具有资源丰富、毒副作用小、无耐药性、多靶点、多功效等独特优势[4]。

近年来，抗生素的大量使用导致畜产品中的残留问题，而中草药低毒无残留的优点，成为饲料添加剂研究的又一方向。为研究胍基乙酸中药制剂的安全性，该试验通过对小鼠灌胃不同剂量的胍基乙酸中药制剂，观察小鼠精神状况，对脏器指数和血清生化指标进行分析，为胍基乙酸中药制剂的后续开发应用提供参数。

1 材料与方法

1.1 材料

1)受试物制备 将胍基乙酸(≥96.0%，占整添加剂的12%，由固安均德同创生物工程有限公司提供)、蛋氨酸(≥99%，占添加剂的4%，由赢创蛋氨酸有限公司提供)、红枣、山楂、陈皮、白术(均亳州市众益堂中药材销售有限公司提供)，粉碎过40目筛，按一定比例配制成胍基乙酸中药制剂。

2)试验动物 选用体质量在(20±2)g, 体况良好、健康的昆明小鼠，60只(雌雄各半)，购自延边大学动物实验中心。

1.2 方法

小鼠在试验环境中适应1 d后，按体重将小鼠随机分为对照组和不同剂量的试验组(500、1 000、2 000、4 000和8 000 mg/kg)，每组10只(雌雄各半)，给药开始前禁食不禁水12 h，1次灌服给药，4 h后正常饲喂。对照组给等量生理盐水，给药后连续观察4 h，其余时间每天观察3次，小鼠精神状况，连续观察7 d。对小鼠进食状况、饮水情况、有无出现异常活动、有无异常肌肉运动、对外界刺激的反应等毒性反应情况和死亡情况进行详细记录，观察结束后，处死动物并解剖，观察小鼠的脏器。

1.3 测定指标

1)观察指标 对小鼠进食状况、饮水情况、有无出现异常活动、有无异常肌肉运动、对外界刺激的反应等毒性反应进行观察。

2)脏器比 小鼠脱颈椎处死称重，解剖取脾脏、肾脏、肝脏等脏器称重，记录并计算各脏器的脏器指数。

脏器指数/% =脏器质量/体重×100%。

3)血清生化指标 采用眼球取血的方法，将血液静止30 min后3 000 r/min离心10 min，用移液将血清上清液枪分离，在-20 ℃保存备用。谷草转氨酶(AST)采用天冬氨酸底物法、谷丙转氨酶(ALT)采用丙氨酸底物法测定、碱性磷酸酶(ALP)采用NPP底物-AMP缓冲液法测定、总抗氧化能力(T-AOC)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)采用比色法测定、过氧化氢酶活力(CAT)采用比色法测定、丙二醛(MDA)采用硫代巴比妥酸法测定、超氧化物歧化酶(SOD)采用黄嘌呤氧化物酶法测定。采用试剂盒及检测结果均来自北京华英生物科技研究所。

1.4 数据统计分析

采用SPSS22.0统计软件中的ANOVA分析试验数据，结果用“平均值±标准误”表示。P<0.01，表示差异极显著，P<0.05，表示差异显著，P>0.05，表示差异不显著。

2 结果与分析

2.1 胍基乙酸中药制剂对小鼠毒性症状观察

给药一段时间后，小鼠未出现怠动、嗜睡等现象，进食和饮水情况正常，无异常活动，对外界刺激反应正常，大剂量给药后，小鼠出现短暂的休息调整行为，后恢复正常行为，试验期间无小鼠死亡(表1)。

表1 胍基乙酸中药制剂对小鼠灌胃后死亡情况

2.2 胍基乙酸中药制剂对小鼠脏器指标的影响

由表2可知，与对照组相比，不同剂量试验组的心脏指数、肝脏指数、脾脏指数和肾脏指数变化不明显，但数值在一定剂量范围内随着灌胃剂量的增加而增加(P>0.05)。

表2 胍基乙酸中药制剂对小鼠脏器指标的影响

2.3 胍基乙酸中药制剂对小鼠血清生化指标的影响

由表3可知，与对照组相比，各试验组AST指标极显著降低(P<0.01)；试验2、3、4组ALT相对于对照组均极显著降低(P<0.01)，试验1、5组ALT低于对照组但差异不显著(P>0.05)；各试验组ALP均低于对照组(P<0.01)。

表3 胍基乙酸中药制剂对小鼠血清生化指标的影响

2.4 胍基乙酸中药制剂对小鼠抗氧化指标的影响

与对照组相比，试验2、3、5组T-AOC指标差异极显著(P<0.01)；与对照组相比，试验1、2、3组GSH-PX极显著增加(P<0.01)；试验2、3、4组与对照组相比,CAT极显著增加(P<0.01)，同样与试验1、5组相比，极显著增加(P<0.01)；与对照组相比，试验2、3组MDA极显著降低(P<0.01)；各试验组SOD与对照组相比，均差异极显著(P<0.01)。

表4 胍基乙酸中药制剂对小鼠抗氧化指标的影响

3 讨论

3.1 胍基乙酸中药制剂对小鼠毒性症状

急性毒性试验:是1次投给实验动物较大剂量的受试物, 观察其在短时期(一般为24 h～2周以内)中毒反应的一种试验方法[5]。该试验通过设置5个不同的灌胃剂量，不同剂量组小鼠精神状况正常，未出现死亡情况，判断胍基乙酸中药制剂无毒。

3.2 胍基乙酸中药制剂对小鼠脏器指标的影响

动物内脏器官的正常发育是实现各项生理机能的前提, 器官指数和肠道指数可反映机体组织器官的生长发育情况[6]。可以通过脏器指数的大小, 反应病理情况和功能强弱[7]。当试验物导致脏器损伤时会导致脏器指数发生变化[8]。据报道，灌胃后小鼠肝脏、肾脏指数差异不显著，表明无急性毒性作用[9]。该试验灌胃不同剂量的胍基乙酸中药制剂后，小鼠各种脏器指数均差异不显著，但脏器指数在一定范围内随着给药剂量的增加而增加，说明一定剂量的胍基乙酸中药制剂对免疫系统存在一定作用。

3.3 胍基乙酸中药制剂对小鼠血清生化指标的影响

AST、ALT分别是存在于动物组织细胞胞液和线粒体中重要的氨基转移酶, 当动物机体肝脏受到损伤时, 这些酶会释放到血液中引起血液中2种酶活性的升高[10]。肝脏是体内重要的解毒器官, 当肝脏受到损伤时, 导致动物机体物质代谢异常、紊乱等, 血清中的谷草转氨酶和谷丙转氨酶的含量增加[11]。该试验结果显示，随着胍基乙酸中药制剂灌胃剂量的增加，AST、ALT、ALP指标先降低后增加，但整体低于对照组，表明胍基乙酸中药制剂对肝脏和心脏具有保护作用。

3.4 胍基乙酸中药制剂对小鼠抗氧化指标的影响

机体的抗氧化状态在维持动物健康、生长性能和繁殖性能方面都有着重要作用[12]。动物机体的抗氧化状态必须保持一定的平衡, 过高或过低都会影响机体健康[13]。SOD是机体重要的抗氧化酶, 在清除过氧化物和保护细胞免于氧化损伤中起重要作用[14]。GSH-PX及CAT将H2O2分解为水和氧,并防止羟基自由基的形成[15]。MDA是脂质过氧化标志，反应机体过氧化程度[16]。日粮中添加中草药或者中草药组方可以增强畜禽机体的抗氧化功能, 进而提高机体的免疫水平[17]。该试验结果显示，随着胍基乙酸中药制剂灌胃剂量的增加，总抗氧化能力、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶指标先增加后降低但整体水平高于对照组；丙二醛指标先降低后上升，但整体水平低于对照组，表明胍基乙酸中药制剂具有抗氧化作用。

4 结论

综合小鼠精神状况、死亡数量和脏器指数进行分析，发现胍基乙酸中药制剂无毒性，安全。通过对血清指标分析，发现胍基乙酸中药制剂具有抗氧化、保护肝脏的作用，为胍基乙酸中药制剂在实际生产中的应用提供参考依据。