鸡沙门氏菌病病原菌的分离鉴定

张丽娇

山东省蓬莱市小门家畜牧兽医站，山东蓬莱265600

沙门氏菌是一类肠道杆菌，其中一部分可以导致人和动物感染，统称为沙门氏菌病。据最近研究，沙门氏菌有2 个种，分为42 个群，血清型有2 500多种，我国已经报道的血清型有240 种以上[1]。它是寄生于人和动物肠道内的无芽孢杆菌，是一大属血清学相关的革兰氏阴性菌[2]。沙门氏菌病的发病率高，死亡率高，临床上最常见的是鸡白痢和鸡副伤寒。

1 材料与方法

1.1 材 料

1）材料。烟台市某肉鸡养殖场病死鸡的肝脏和肾脏。

2）试验药剂。SS 营养琼脂培养基，HE 营养琼脂培养基，伊红美蓝营养琼脂培养基，麦康凯培养基，三糖铁琼脂，TSB 营养液，葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖等生化发酵管；壮观霉素，甲砜霉素，头孢噻呋，卡那霉素，庆大霉素，新霉素，恩诺沙星，环丙沙星，氟哌酸，链霉素和阿米卡星药敏试纸。

3）试验动物。来自烟台市某肉鸡养殖场的雏鸡。

1.2 方 法

1）临床检查。首先要了解本次流行的情况，包括最初发病的时间、地点、随后蔓延的情况；再观察整个鸡群的状况，包括精神状态、饮食、饮水、粪便以及发病前有无饲养管理、饲料用药、气候等变化或其他应激因素存在。

2）病理剖检。先观察尸体的外观变化，包括被毛及皮肤变化、表面有无尸僵出现；天然孔有无分泌物、排泄物和出血及其性质；体表有无肿胀或异常；再者检查内脏，主要包括心脏、肝脏、肾脏、肺脏、脾脏等，看其表面有无炎症、水肿、出血、变性、坏死、萎缩等异常病变。

3）病料采集。采自该养殖场7日龄的病死鸡，经过解剖所得到的充血肿大的肝脏和肾脏。

4）细菌的分离与培养。取病死鸡的肾脏或肝脏，在无菌操作下分别将病料接种于麦康凯营养琼脂平板、SS 营养琼脂平板、伊红美蓝营养琼脂平板上，37 ℃恒温培养24 h。然后找灰白色疑似沙门氏菌的菌落进行单菌落抹片，再染色进行镜检。

5）染色与形态观察。用接种环蘸取生理盐水与玻璃片上的病料相混合，并均匀涂片，自然干燥后用火焰固定；在片上滴加草氨酸结晶紫染色液，作用1～3 min，水洗；加染液进行媒染，作用1 min，水洗；加95%的酒精15～30 s 进行脱色，水洗；加复宏复染液染1 min 水洗，自然干燥后镜检，观察细菌形态与颜色。

6）生化试验。用接种针挑起纯培养物，接种于各种生化发酵管中，37 ℃培养24 h。

7）药敏试验。选取SS 营养琼脂上的菌落做药敏试验，用无菌小镊子夹取各种药敏片平贴于琼脂表面，每一直径90 mm 的平板可贴7 片纸片，每张纸片的间距≥25 mm，每张纸片距离平板的边缘≥15 mm。然后把整个平板反过来于37 ℃培养18 h。时间到后取出平板，仔细观察在药敏片周围有无抑菌圈形成，然后用游标卡尺度量其直径的大小，按抑菌圈直径的大小作为供试菌株敏感度指标报告敏感、中度敏感、高度敏感和耐药的结果。

8）致病性试验。在鸡群中随机抽取30 只健康雏鸡，设6 个小组，每组5 只，包括5 个菌株试验小组和1 个对照小组，将纯培养的5 个菌株接种于TSB 溶液中进行增值培养，24 h 后取出菌液分别腹腔注射5 个小组的雏鸡，每只0.4 mL，设第6 小组注射营养肉汤做对照，随时观察其发病及死亡情况。对发病致死的雏鸡进行解剖，观察其病理学变化，并取内容物接种于SS 营养琼脂、伊红美蓝琼脂培养基，观察其菌落的形态和颜色。

2 结果与分析

2.1 临床检查

在该养殖场内大部分鸡群精神沉郁，扎堆不动，而且病鸡“糊肛”现象比较严重，其中死亡鸡已经接近40 只，根据这些临床症状可以初步判断病死鸡感染沙门氏菌病。

2.2 病理解剖

随机抽取5 只病死鸡进行解剖，发现肝脏、肾脏肿大都比较严重，肺脏的表面还伴有弥漫性充血和出血，把解剖的结果与以上所观察的临床结果相结合可以确诊为病死鸡感染了沙门氏菌病。为了进一步确诊，采集其病变的肝脏、肾脏送往实验室进行检验。

2.3 分离培养

将菌株接种于各个培养基中结果有很大区别，有5 株疑似沙门氏菌的菌株。在伊红美蓝琼脂平板上呈表面光滑、圆形、微凸、边缘整齐、淡蓝色、直径在1～2 mm 的小菌落；在SS 琼脂平板上，呈现白色菌落；在麦康凯琼脂平板上呈现圆形、微凸、边缘整齐、直径1～2 mm 的小菌落；在HE 琼脂平板上呈圆形、微凸、边缘整齐、灰褐色或灰绿色、直径1～2 mm的小菌落。

2.4 生化试验

由表1可知：疑似沙门氏菌的5 个菌株能发酵葡萄糖、麦芽糖和甘露醇产酸产气；对乳糖和蔗糖不反应；尿酸酶试验为阴性；在三糖铁培养基中生长，斜面红色，底层黄黑色。

2.5 染色及镜检

选取单个菌落进行革兰氏涂片、染色、镜检，发现沙门氏菌为数量多、个头短小的革兰氏阴性杆菌，无芽孢，无荚膜，无运动能力。

2.6 药敏试验

由表2可知：沙门氏菌对不同药物出现不同的敏感度。抑菌圈直径在20 mm 以上的为高度敏感，10～20 mm 为中度敏感，10 mm 以下为低敏。5 个菌株对头孢噻呋、甲砜霉素、壮观霉素高敏；对卡那霉素、庆大霉素中敏；对恩诺沙星、环丙沙星不敏感或低敏。

3 讨 论

1）科学的饲养管理。保证鸡群健康成长的前提是有一个良好的生存环境，鸡群生长的环境对鸡群的健康状况和生产性能有着重要的影响[3-4]。特别是雏鸡的管理饲养，不能过分拥挤，而且饲料要搭配得当，定时添加微量元素和维生素。如果发现鸡群异常，要立即将病鸡隔离，已经治愈的鸡仔也要持续隔离一段时间，以防止病原的继续传播。

表1 生化试验结果

表2 药敏试验结果 mm

2）严格的消毒工作。健全场内的消毒制度，特别是雏鸡场、育雏室在进雏前必须经彻底清扫、刷洗和消毒。设备、器具上的残留物清除后再用3%火碱水、0.2%过氧乙酸或抗菌威等轮换消毒，最后每立方米用28 mL 福尔马林熏蒸24 h，通风排净气味后才可进雏；10日龄以后的雏鸡，每周用0.1%次氯酸钠或0.1%过氯乙酸带鸡消毒1 次，育雏室每天清扫1 次，清扫后用0.3%过氧乙酸消毒；要实施全进全出的饲养制度。

3）合理的免疫程序。制定合理的免疫程序，饲养鸡群时要严格按照免疫程序来接种，饲养员应根据每一批鸡群饲养的结果及时做出总结，以对现有的程序进行适当的修改。

4 结 论

此次在烟台市某肉鸡养殖场所发生的疫病，通过细菌的分离培养、生化试验、血清学试验、药敏试验及致病性试验可以基本确定为鸡白痢沙门氏菌病。药敏试验结果表明，鸡白痢沙门氏菌对头孢噻呋和甲砜霉素高度敏感，所以在药物治疗时要首选头孢噻呋和甲砜霉素。

通过药敏试验了解了此次沙门氏菌对恩诺沙星和环丙沙星保持着一定的耐药性，耐药性的产生主要是由于饲料中的抗生素含量过高和临床上长期盲目用药造成[3]。因此，在鸡白痢沙门氏菌的诊断治疗中，要把头孢噻呋和甲砜霉素作为首选药物。在治疗鸡细菌病、腹泻病的同时，要轮换用药，以减少由于耐药性所产生的经济损失。