插田泡总黄酮对小鼠免疫器官和抗氧化活性的影响

李宇涵 ， 汪 露 ， 陈朝喜

(西南民族大学生命科学与技术学院 ， 四川 成都 610041)

近年来，黄酮类化合物由于其消除自由基、延缓衰老、抗氧化、调节免疫力和抗肿瘤等功效而广泛应用在食品和医药等领域[1-2]。目前，黄酮类化合物主要用于清除动物体内过多的活性氧自由基以防止脂质过氧化[3]。

插田泡(RubuscoreanusMiq.)为蔷薇科悬钩子属植物，又名大乌泡、倒生根、倒生刺等，其资源丰富，在我国南北方均有广泛分布，是集药用、食用、观赏和绿化于一体的多用途植物。相关研究报道表明，插田泡中含有大量的蛋白质、黄酮和三萜皂苷等生物活性物质[4-5]。研究资料表明，国内外研究主要关注其果实的开发和利用，而对于插田泡的化学成分及其药用价值的研究报道相对较少[6-7]。

本试验以采自甘孜州康定跑马山的插田泡为材料，初步探讨其总黄酮对小鼠免疫器官和抗氧化活性指标的影响，以期为深入研究插田泡其他药理学活性及其开发利用提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 45只雌雄昆明系小鼠，体重范围为(20±2) g，购自成都达硕科技有限公司。

1.1.2 试剂及试剂盒 三氯化铝、乙酸乙酯、甲酸、无水乙醇、醋酸、甲醛和二甲苯均为分析纯，购自成都科龙试剂化工厂；二硝基氟苯(DNFB)和左旋咪唑，购自上海源叶生物科技有限公司；丙二醛(MDA)测试盒、总抗氧化能力(T-AOC)测试盒和超氧化物歧化酶(SOD)测试盒，均购自南京建成生物研究所。

1.2 插田泡总黄酮提取 取插田泡粉末0.5 kg，按料液比1∶10的比例，用75%的乙醇浸提，得到插田泡提取物，浓缩后用AB-8大孔树脂柱纯化，经薄层层析(展开剂为乙酸乙酯∶甲酸=8∶3)及显色反应鉴定，冷冻干燥后得到插田泡总黄酮，4 ℃保存备用。临用前用生理盐水配置成10 mg/mL、20 mg/mL和40 mg/mL插田泡总黄酮的溶液。

1.3 动物试验设计 45只小鼠随机平均分成5组，其中A、B组为阴性和阳性对照组，阳性药物剂量的确定参照文献[8]，分别以灌胃生理盐水和17.5 mg/mL的左旋咪唑，C、D、E分别为低、中、高浓度插田泡总黄酮组，以每天0.2 mL/(10 g·bw)的剂量连续灌胃21 d。

1.4 小鼠脏器指数测定 摘取小鼠胸腺和脾脏，称重并计算脏器指数，脏器指数=脏器重量(mg)/活体重(g)×10。

1.5 抗氧化指标测定 参照试剂盒说明书操作方法，分别对各试验组小鼠血浆进行丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和总抗氧化能力(T-AOC)测定。

1.6 数据处理 试验中所有数据均用SPSS 18.0软件进行处理。

2 结果

2.1 插田泡总黄酮对小鼠免疫器官脏器指数的影响 插田泡总黄酮对小鼠脏器指数的影响结果如图1所示。由图1可知，B、C、E组胸腺指数均高于A组，但D组与A组相比略低，5组间差异不显著(P>0.05)，说明插田泡总黄酮在一定程度上可以提高小鼠的胸腺指数，但高、中、低剂量组对胸腺指数的影响并未呈现剂量依赖性关系；与对照组相比，给药组对脾脏指数的影响并未达到预期的免疫增强作用(数据未列出)，其具体原因还有待进一步探讨。

图1 插田泡总黄酮对小鼠胸腺指数的影响

2.2 插田泡总黄酮抗氧化活性结果 插田泡总黄酮抗氧化活性结果见表1。由表1可知，B、D、E三组SOD均高于A组，C组虽低于A组，但两者间差异不显著(P>0.05)；B、C、D、E四组的MDA均低于A组，T-AOC均高于A组，说明一定浓度的插田泡总黄酮可以提高小鼠SOD和T-AOC活性，同时有助于降低MDA活性，抑制脂质过氧化。

表1 插田泡总黄酮对小鼠SOD、MDA、T-AOC的影响

3 讨论

胸腺和脾脏是机体重要的免疫器官，其指数的高低可以作为机体免疫功能的重要指标[9-11]。本试验结果表明，与阴性对照组相比，插田泡总黄酮在一定程度上可以提高小鼠的胸腺指数，但脾脏指数并未升高，与其他研究结果存在一定差异，分析其原因可能与给药组药物的剂量选择有关。在试验中，为验证药物是否对小鼠的脾脏造成损伤，分别对阴性对照组和给药组中死亡小鼠的脾脏进行病理组织观察，但并未发现明显的病理变化。

机体中过多的自由基会造成氧化胁迫，加上脂质过氧化的终产物会引起细胞功能紊乱，引起机体衰老，SOD是生物体内重要的抗氧化酶, 可以有效清除氧自由基, 保护生物体细胞避免氧化损伤，MDA是生物膜脂质过氧化的降解产物, 是反映过氧化损伤的常用指标[12-13]，T-AOC作为反应机体内各种抗氧化分子及酶的总体水平的指标，也具有重要意义。抗氧化剂通过抑制脂质过氧化、蛋白氧化和清除体内自由基,可以调整和改善机体状态,修正生理功能,从而达到预防和治疗慢性疾病的目的[14]。本试验中SOD、MDA和T-AOC抗氧化结果显示，插田泡总黄酮可以提高小鼠SOD和T-AOC活性，同时可以降低MDA活性，有助于抑制脂质过氧化。由此可知，插田泡总黄酮具有较好的抗氧化作用,能够提高机体内抗氧化相关酶的活性, 抑制自由基的产生和脂质过氧化产生的不良代谢产物。

4 结论

在一定浓度剂量范围内，插田泡总黄酮可以提高小鼠胸腺指数，且插田泡总黄酮浓度越高，小鼠的SOD和T-AOC活性提高越明显，抑制MDA活性越强，抗氧化的作用较为明显，为插田泡药效学广泛研究及其开发利用提供理论依据和基础。