复合益生菌制剂在断奶仔猪中的临床应用

杨 嫡 ， 郭 亮 ， 夏 冰 ， 陈其名 ， 朱要宏 ， 王九峰

(中国农业大学动物医学院 ， 北京 海淀 100193)

断奶仔猪腹泻是目前困扰养猪业的一大难题，给养猪业造成巨大经济损失。造成断奶仔猪腹泻的原因有多种，包括传染性腹泻、营养性腹泻、生理性腹泻和应激性腹泻。因此，如何改善断奶仔猪腹泻，维持断奶仔猪肠道微生态平衡，阻止病原菌入侵，增加肠道有益菌，减轻断奶应激等因素造成的危害，已经成为预防断奶仔猪腹泻的研究热点[1]。

随着抗生素在养猪行业的滥用，造成大量耐药菌株的出现，严重影响动物源性食品安全，对动物和人体健康造成巨大威胁。2018年1月，农业农村部“第2638号”公告指出[2]，停止在食品动物中使用喹乙醇、氨苯胂酸、洛克沙胂等3种兽药。因此，亟待开发新型抗生素替代品，目前常见的抗生素替代品有益生菌、益生元、酶制剂、酸化剂和植物提取物等，在生产实践中常联合使用。单种益生菌在临床中有较多应用，如约氏乳杆菌，它可阻止致病菌粘附，调节肠道局部免疫应答，酸化肠道环境[3]。临床中也常将枯草芽孢杆菌与地衣芽孢杆菌共同使用，它们作为兼性厌氧菌可抑制病原菌，有利于厌氧益生菌生长。目前尚无约氏乳杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌联合应用的研究报道。本试验将从健康仔猪中分离到的猪源约氏乳杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌制成复合益生菌制剂添加至基础日粮中，观察其对早期断奶仔猪腹泻率、生长性能及血清免疫球蛋白的影响，为日后复合益生菌制剂的临床应用提供可供参考的数据支持。

1 材料与方法

1.1 试验益生菌 约氏乳杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌为本实验室分离自临床健康的断奶仔猪结肠内容物或粪便，制备为冻干菌粉后，按照以下剂量添加至基础日粮中，约氏乳杆菌109CFU/kg、枯草芽孢杆菌106CFU/kg、地衣芽孢杆菌106CFU/kg。

1.2 试验动物 本试验于山东省聊城市大北农种猪场进行，试验动物为120头21日龄断奶的杂交仔猪(长白×大白)。按照初始体重均衡的原则对其进行分组，随机分成2组，对照组和试验组，各设3个重复组，20头仔猪为1个重复组。对照组饲喂基础日粮，试验组饲喂添加有复合益生菌制剂的基础日粮。试验中所用基础日粮为北京大北农科技集团股份有限公司生产。对照组和试验组同舍饲养，每个重复组的20头仔猪饲养于一栏中，自由采食与饮水，试验期共35 d。

1.3 腹泻状况及生产性能检测 记录每个重复组日采食量，每周称重，计算平均日采食量、平均日增重、肉料比。每天观察并记录每个重复组断奶仔猪的腹泻情况，计算腹泻率，方法为：

腹泻频率% = 腹泻头次÷(试猪头数×试验天数)×100%

1.4 血液样品采集 每周于各个重复组中随机选择4头仔猪，前腔静脉采血，采血量为5 mL，4 ℃静置过夜，分离血清，-20 ℃保存。

1.5 血清免疫球蛋白检测 将冷冻保存的血清样品室温下解冻，ELISA检测免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)含量，检测方法参照说明书进行，试剂盒购自北京雪杰特科技有限公司。

1.6 数据处理与分析 试验数据采用SPSS 24.0软件进行t检验分析，结果表示为平均值±标准误，P<0.05为具有显著性差异，P<0.01为具有极显著性差异。

2 结果

2.1 复合益生菌对断奶仔猪腹泻的影响 由图1可知，与对照组相比，试验组第2周腹泻率显著降低(P=0.023)，而其他周次没有显著性差异(P>0.05)。

图1 复合益生菌对断奶仔猪腹泻率的影响

2.2 复合益生菌对断奶仔猪生长性能的影响 由表1可知，与对照组相比，试验组体重增加0.65 kg(3.67%)，平均日增重增加19.6 g(6.84%)，肉料比升高0.05(8.33%)。复合益生菌制剂对仔猪体重、平均日增重和肉料比均没有显著性差异(P>0.05)。

表1 复合益生菌对断奶仔猪生产性能的影响

在增重方面，由图2可知，试验组第4周每头平均体重显著增加(P=0.018 6)，平均每头日增重也显著增加(P=0.025 7)。

图2 复合益生菌对断奶仔猪体重、日增重的影响

2.3 复合益生菌对断奶仔猪免疫水平的影响 由图3可知，与对照组相比，试验组第3周血清IgM极显著升高(P= 0.001 5)，而其他周次没有显著性差异。由图4可知，与对照组相比，试验组第3周血清IgG含量显著升高(P= 0.026)，而其他周次没有显著性差异。由图5可知，与对照组相比，试验组试验期内血清IgA含量无显著性差异。

图3 复合益生菌对断奶仔猪血清IgM含量的影响

图4 复合益生菌对断奶仔猪血清IgG含量的影响

图5 复合益生菌对断奶仔猪血清IgA含量的影响

3 讨论

仔猪断奶后，由于受到饲料和环境等各方面的应激，容易导致严重的腹泻。Zhang等研究发现，仔猪断奶后，肠道菌群多样性降低，乳酸杆菌和双歧杆菌等有益菌数量减少，肠杆菌和肠球菌等有害菌数量升高[4]，肠道对一些外源性或者内源性致病菌的抗性降低，最终导致断奶仔猪腹泻的发生。本试验结果显示，第2周时，与对照组相比，益生菌组腹泻率降低61.54%。整个试验周期内，第2周腹泻发生率最高。本试验结果与黄金华等[5]研究结果一致，服用混合益生菌制剂可以显著降低断奶仔猪引起的腹泻。服用混合益生菌制剂能显著降低断奶仔猪引起的腹泻率，可能是复合益生菌制剂有助于维持断奶仔猪肠道内环境稳态，抑制病原菌的繁殖，进而降低腹泻率。

早期断奶仔猪消化系统发育尚未完善，胃肠道结构、pH值和消化酶浓度均有较大变化。胃酸分泌不足，导致胃中多种酶活力减弱，可能发生吸收不良[6]。此外，断奶后的食物由流质的乳汁更换为固体饲料，极易造成仔猪对饲料中各种养分的消化利用率降低，生长性能发展缓慢。本试验结果显示，复合益生菌制剂对仔猪体重、平均日增重和肉料比均没有显著影响，但有升高仔猪体重、平均日增重和肉料比的趋势。其中，第4周复合益生菌组体重及平均日增重明显高于对照组，这可能与益生菌组的平均腹泻率从第2周起逐渐降低有一定关系。本试验结果与Lu等[7]的研究结果一致，断奶后第21天，与对照组相比，2种不同益生菌复合制剂组均表现出体重、平均日增重显著升高。本试验所使用的乳酸杆菌能够通过促进肠道蠕动，刺激肠道绒毛生长，增加隐窝深度及肠绒毛的长度，增加营养物质消化吸收的表面积[8]。另一方面，乳酸菌代谢产生的有机酸，如乳酸、乙酸、丙酸、柠檬酸等，不仅能降低胃肠道pH值，抑制、杀死肠道病原菌，调节肠道菌群平衡，同时还能提高胃肠道消化酶活性[9]。此外，芽孢杆菌能分泌多种消化酶，如蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶等[10]，有利于断奶仔猪生长。

仔猪断奶后，母源抗体逐渐消失，使其本就发育不完全的免疫机能更易受到病原及各种应激的影响。本试验结果显示，第3周时，与对照组相比，试验组的血清IgM含量极显著升高92.41%，提示近期有感染；血清IgG含量显著升高79.32%，提示机体调动体液免疫应答，正在对抗感染。试验期内，试验组的血清IgA含量与对照组相比无明显差异。

本试验研究结果与之前关于益生菌对断奶仔猪免疫球蛋白含量影响的研究结果一致[11-12]。益生菌对断奶仔猪肠道免疫调济功能随益生菌种类不同而有所区别，仅添加枯草芽孢杆菌的日粮，可以提高血清IgG、IgA的含量；仅添加约氏乳杆菌的日粮，则可以降低IgM含量。复合益生菌制剂的使用，各种益生菌间、益生菌与肠道原有菌群间可能存在相互作用，故试验组免疫球蛋白水平的变化有所不同。

因此，研究益生菌对动物各方面的影响，需要综合考虑动物种类、品种、营养、健康状况、年龄、饲养管理条件及环境、日粮的成分、抗生素影响、益生菌的种类、活力、剂量及饲喂方式等。为改善早期断奶仔猪腹泻选择合适的复合益生菌制剂，还需要更深入研究。

4 结论

日粮中添加约氏乳杆菌、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌复合制剂可有效降低断奶仔猪腹泻率，提高生长性能和机体免疫力。