原子吸收分光光度法测定葡萄酒中铁含量的方法验证

蒋祥飞，张 利

（安徽古井贡酒股份有限公司，安徽亳州 236820）

随着我国人民生活水平的不断提高，葡萄酒已经逐渐走向普通消费者，并成为大众所喜欢的果酒之一。葡萄酒正在向着营养型、健康型、保健型、低浓度型的方向发展。葡萄酒在正常情况下是稳定的，而且酒的颜色、质量、理化因素和口感都是很不错的。酒在贮藏的过程中，由于受到各种因素的影响，会产生浑浊或沉淀，其中铁等金属离子超量是葡萄酒发生化学浑浊的主要因素。因此，如何控制铁等金属离子的含量，对于保证葡萄酒的稳定性显得尤为重要。葡萄酒中铁含量的测定方法为GB/T 15038—2006《葡萄酒、果酒通用分析方法》4.9 铁（原子吸收分光光度法），对其所涉及的测量范围、线性范围、检出限、定量限、精密度、正确度6 个方法参数[1]进行了检测以确保分析数据的准确性、科学性和严密性。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂及仪器

1.1.1 样品

葡萄酒酒样：赤霞珠西拉干红葡萄酒，市售，生产日期：2016年8月16日，保质期：10年。

1.1.2 试剂及耗材

本方法中所用水应符合GB/T 6682—1992 中二级水规格，所用试剂为优级纯。

硝酸溶液：量取8 mL硝酸，稀释至1000 mL。

铁标准贮备液：按GB/T 602配制。

铁标准使用液：吸取10.00 mL铁标准贮备液于100 mL 容量瓶中，用硝酸溶液稀释至刻度，此溶液每毫升含10 μg铁。

铁标准系列：分别吸取铁标准使用液0.00 mL、1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL、5.00 mL、10.00 mL于5个100 mL容量瓶中，用硝酸溶液稀释至刻度，混匀。该系列用于标准工作曲线的绘制。

1.1.3 仪器设备

原子吸收分光光度计，备有铁空心阴极灯。

1.2 试验方法

采用国家标准GB/T 15038—2006《葡萄酒、果酒通用分析方法》4.9铁（原子吸收分光光度法）。

原理：将处理后的试样导入原子吸收分光光度计中，在乙炔-空气火焰中，试样中铁被原子化，基态原子铁吸收特征波长（248.3 nm）的光，吸收量的大小与试样中铁原子浓度成正比，测其吸光度，求得铁含量。

1.3 分析步骤

1.3.1 试样制备

用硝酸溶液准确稀释样品5～10 倍，摇匀，备用。

1.3.2 标准工作曲线的绘制

置仪器于合适的工作状态，调波长至248.3 nm，导入标准系列溶液，以零管调零，分别测定其吸光度。以铁的含量对应吸光度绘制标准工作曲线。

1.3.3 试样的测定

将试样导入仪器，测其吸光度，然后根据吸光度在标准曲线上查得铁的含量。

2 结果与分析

2.1 测量范围

依据GB/T 27417—2017《合格评定化学分析方法确认和验证指南》中5.2 测量范围的验证方法，对本方法的测量范围进行验证，对0.2 mg/L 铁标准溶液、0.4 mg/L 铁标准溶液、0.5 mg/L 铁标准溶液3个不同浓度的标准溶液进行6 次检测分析，其结果具体如下：

（1）试验所得标准曲线线性回归方程的相关系数为0.9997，结果（见表1、图1 标准曲线线性）符合GB/T 27417—2017 中对于准确定量方法，线性回归方程的相关系数不低于0.99的要求。

（2）精密度以不同浓度的铁标准溶液6 次检测结果值的室内变异系数表示，其结果（见表2 标准溶液变异系数及正确度结果表）符合GB/T 27417—2017中被测组分含量为1～10 mg/kg时实验室内变异系数小于11%的要求。

表1 标准曲线线性

（3）正确度以不同浓度的铁标准溶液的回收率来表示，即铁标准溶液6 次检测结果的平均值与已知浓度的比值，其结果（见表3 标准溶液变异系数及正确度结果表）符合GB/T 27417—2017 中被测组分含量为0.1～1 mg/kg 时方法回收率在80 %～110%的要求。

2.2 线性范围

依据GB/T 27417—2017《合格评定化学分析方法确认和验证指南》中5.3 线性范围的验证方法，对本方法的线性范围进行验证，线性回归方程的相关系数为0.9997，结果（见表1 标准曲线线性）符合GB/T 27417—2017中对于准确定量方法，线性回归方程的相关系数不低于0.99的要求。

2.3 检出限和定量限

依据GB/T 27417—2017《合格评定化学分析方法确认和验证指南》中5.4 检出限和定量限的验证方法，采用空白标准偏差法对本方法的检出限进行验证，方法的检出限为空白试验的平均值与3 倍的标准偏差之和，方法定量限为方法检出限的3倍。故本方法的方法检出限为0.0151 mg/L，定量限为0.0453 mg/L（见表3 方法检出限和定量限结果表)。

表2 标准溶液变异系数及正确度结果表

表3 方法检出限和定量限结果表

2.4 正确度

依据GB/T 27417—2017《合格评定化学分析方法确认和验证指南》中5.5 正确度的验证方法，采用加标回收的方法对正确度进行验证，结果方法回收率（见表4 正确度及精密度结果表）符合GB/T 27417—2017 中被测组分含量为1～100 mg/kg 时方法回收率在90%～110%的要求。

表4 正确度及精密度结果表

2.5 精密度

依据GB/T 27417—2017《合格评定化学分析方法确认和验证指南》中5.6 精密度的验证方法，以不同样品6 次检测结果值的室内变异系数表示精密度，其结果（见表4 正确度及精密度结果表）符合GB/T 27417—2017 中被测组分含量为1～10 mg/kg时实验室内变异系数小于7.5%的要求。

3 结论

本次方法验证依据GB/T 27417—2017《合格评定化学分析方法确认和验证指南》对GB/T 15038—2006《葡萄酒、果酒通用分析方法》4.9 铁（原子吸收分光光度法）进行方法验证，其检测过程中所涉及的测量范围、线性范围、检出限和定量限、正确度及精密度6 个方法参数均符合GB/T 27417—2017 和GB/T 15038—2006 的要求，故方法GB/T 15038—2006《葡萄酒、果酒通用分析方法》4.9铁（原子吸收分光光度法）在本实验室内可用。