ELL2在前列腺癌组织中表达水平分析

徐 珀

深圳市第二人民医院急诊科，广东 深圳 518000

前列腺癌是男性常见的恶性肿瘤之一，每年全世界有100万人左右被确诊此病［1］。以前我国前列腺癌死亡率和发病率都较低，但是随着人口老年化，前列腺癌的发病率渐渐呈上升趋势。治疗方案有前列腺切除术等大多数前列腺癌治疗方案的疗效是显著的［2-3］，但激素非依赖性前列腺癌的疗效不太乐观［4］。

刘畅等［5］采用免疫组织化学染色法检测前列腺癌中SKP2、kindlin-2蛋白的表达情况，结果发现前列腺癌组织中SKP2、kindlin-2蛋白的表达率显著升高，该蛋白的表达与前列腺癌的发生、发展密切相关。周亮等［6］研究miR-372在前列腺癌中的表达及对前列腺癌细胞迁移的影响，结果发现miR-372在前列腺癌组织中表达下调，抑制癌细胞迁移，可作为前列腺癌的抑癌因子。张兴华等［7］研究CaMKⅡδ在前列腺癌组织的表达及意义结果发现CaMKⅡδ在人前列腺癌组织中表达过度，该基因的表达表达与淋巴结转移、前列腺癌的外侵显著相关。定位于染色体19p13.1的人类ELL（Eleven-nineteen lysine-rich leukemia gene）基因在调节生长发育和肿瘤形成起到重要作用，但是ELL基因与定位于染色体11q23上的白血病基因发生易位［4］，在多种白血病患者中得到了证实。但是，对于ELL基因在前列腺癌中的表达情况，稀有报道。为了了解ELL2在前列腺癌组织中表达水平及其对前列腺癌细胞株C4-2增殖的影响，我们采用qRT-PCR及对ELL基因表达的上调或沉默，旨在揭示分析ELL基因在前列腺癌组织细胞中的表达，以及ELL基因在前列腺癌发生发展的作用。

1 一般资料

1.1 临床资料

上海芯超前列腺癌芯片HProA150CS01中含有前列腺癌50例：癌100点/癌旁50点。Gleason分级6-10，临床分期2期～4期。前列腺癌患者均为未接受抗肿瘤治疗，且排除其他器官的恶性肿瘤。患者年龄（70.96±6.10）岁。前列腺癌病理分级标准参考Gleason评分系统中相关标准，肿瘤临床分期参考《中国泌尿外科疾病诊断治疗指南》。手术后取得供试的材料标本,液氮中速冻10～15 min后，-70℃保存。经病理学证实所有标本均是前列腺癌。100例患者中Gleason评分评分＜7分者6例，=7分者48例,Gleason评分＞7分者46例；肿瘤临床分期:Ⅱ期15例，Ⅲ期61例，Ⅳ期18例。

1.2 ELL抗体行免疫组化检测

经过石蜡切片脱蜡至水，将这些组织制成约3 mm，0.01MKPBS清洗5min×3后，加入配好的0.3%的过氧化氢甲醇溶液。室温下孵育10min，以阻断内源性过氧化物酶的活性，PBS冲洗3次/3 min，采用浓度为10%牛奶蛋白封闭，室温孵育5 min，加入ELL2蛋白抗体（ELL2抗体购买自Abcam公司），室温孵育2 h，PBS冲洗3次/5 min，滴加生物素化抗兔二抗，37℃孵育30 min，再用PBS冲洗3次/5min，加入NBT/BCIP色剂显色，5min后复染，自来水冲洗，蓝化，切片经梯度酒精脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封固，晾干后观察。

1.3 统计学方法

数据处理采用SPSS 21.0软件，计数资料以例数和百分比（%）表示，组间比较采用χ2检验;P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Gleason评分与ELL2基因蛋白表达情况分析

Gleason评分＜7分的组织中ELL2基因蛋白阳性表达率为83.33%；Gleason评分=7分的组织中中ELL2基因蛋白阳性表达率为75.00%；Gleason评分＞7分的组织中ELL2基因蛋白阳性表达率为13.04%，Gleason评分＞7分的组织中的ELL2基因的阳性表达率显著小于其它两种组织，差异有统计学意义（χ2=39.580，P＜0.001）。

表1 Gleason评分与ELL2基因蛋白表达情况

2.2 TNM分期与ELL2基因蛋白表达情况分析

TNM分期为Ⅱ的ELL2基因蛋白阳性表达率为86.67%；TNM分期为Ⅲ中ELL2基因蛋白阳性表达率为73.77%；TNM分期为Ⅳ的组织中ELL2基因蛋白阳性表达率为11.11%，TNM分期为Ⅳ的组织中的ELL2基因的阳性表达率显著小于其它两种组织，差异有统计学意义（χ2=27.668，P＜0.001）。

表2 Gleason评分与ELL2基因蛋白表达情况

3 讨论

前列腺癌发病率仅次于的肺癌，是男性第二的肿瘤。前列腺癌死亡率在男性肿瘤中排名前列［8］。目前用于前列腺癌的生物标志物为总PSA（tPSA）和游离PSA（fPSA）［9］。

真核细胞转录延伸的调控是基因正常表达的重要条件。ELL家族是RNA聚合酶II（RNAPⅡ）转录因子,调控RNAPⅡ的功能的关键因子［10］。ELL2是ELL蛋白家族中的一员。本研究发现前列腺癌组织中，Gleason评分＞7分的组织中的ELL2基因的阳性表达率显著小于其它两种组织且TNM分期为Ⅳ的组织中的ELL2基因的阳性表达率显著小于其它两种组织。所以ELL2表达的下调可能是诱发前列腺癌的病因之一；ELL2可否作前列腺癌肿瘤标志物，评估恶性程度、提高早期诊断率，有待于进一步研究。杨铁军［11］报道前列腺癌的恶性程度越高，其组织ELL2表达水平越低。他推测ELL2基因可能是前列腺癌的抑癌基因，且ELL2可以作为反映前列腺癌恶性程度指标。

Zhou J等［12］报道ELL直接调控血小板反应蛋白1水平的高低，抑制血管生成；前列腺癌中ELL基因抑制肿瘤生长与；也有报道ELL2与EAF2结合，成为超级延伸复合体（SEC）的一部分。ELL2是ELL蛋白家族中的一员，该家族调控转录的功能类似。通过调节基因的表达，抑制细胞凋亡进程。本研也究探讨ELL2对前列腺癌细胞凋亡与增殖的影响，发现ELL2基因的表达加速前列腺癌细胞C4-2凋亡，抑制前列腺癌细胞C4-2增殖。