老年脓毒症诱导急性肾损伤患者血清miRNA-10a与IL-35水平及临床意义

杨挺 黄伟 俞慧

(江南大学附属医院(原无锡市第三人民医院)急诊科，江苏 无锡 214000)

脓毒血症为感染导致的全身炎症反应综合征，病情凶险，老年人群因自身免疫力低下，基础疾病众多，患者易发生休克及多器官衰竭(MODS)，其中尤以合并急性肾损伤(AKI)常见〔1〕。脓毒血症的发病及进展机制源于炎症的瀑布级联反应，目前炎症的瀑布级联反应导致AKI的机制尚未完全明确，动物实验显示〔2〕：促炎与抑炎调节失衡与AKI密切相关。miRNA-10a通过调控多条重要炎症信号通路发挥抑炎或促炎的作用，白细胞介素(IL)-35为免疫抑制因子，本研究探讨老年脓毒症合并AKI患者血清miRNA-10a及IL-35的表达特征及其临床价值。

1 研究对象与方法

1.1一般资料 100例老年脓毒血症患者来源于2016年1月至2019年1月无锡市第三人民医院重症监护病房(ICU)，59例合并AKI患者为AKI组，其中男36例，女23例，年龄62～77岁，平均(71.2±5.3)岁；另41例无AKI脓毒血症患者为对照组，其中男26例，女15例，年龄65～79岁，平均(72.1±5.37)岁。两组性别、年龄构成无统计学差异(P>0.05)，具有可比性。均知情同意。排除恶性肿瘤、自身免疫性疾病、冠心病、先天性畸形、精神疾病史及资料收集不齐全研究对象。

1.2诊断标准 脓毒血症的诊断参考欧洲危重病医学会(ESICM)及美国重症医学会(SCCM)联合发布的脓毒血症诊断标准3.0版〔3〕，具备感染指征，在ICU生存>7 d，序贯器官衰竭评估(SOFA)评分≥2.0分，脓毒血症合并AKI诊断参考阿姆斯特丹 AKI 合作研究会确定的诊断标准。

1.3研究方法 收集研究对象神志、脉搏、体温、呼吸等生命体征资料，并在转入ICU时24 h内取静脉血检测miRNA-10a及IL-35，并由高年资医生进行SOFA评分，包含呼吸、凝血系统、肝功能、循环系统、神经系统、肾脏系统六部分，每项分值为0～4 分，总分值0～48分，分数越高，预后越差。

1.4实验室检测 采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测血清miRNA-10a，全自动基因扩增仪为ABI7500，试剂购自美国Invitrogen公司，逆转录试剂购自美国Fermentas公司，内参为小核 RNAU6(sn RNA U6)，上游：5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3'，下游 ：5'-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3'。miRNA-10a 上游：5'-GGAGGGGTACCAGAATCCCATTTTGGCCA-3'，下游：5'-GGAGGAAGCTTGCGGAGTGTTTATGTCAACT-3'，扩增条件：预变性95℃ 5 min→变性95℃ 10 s→退火60℃20 s→延伸72℃ 20 s，共40循环，2-ΔΔCt表示miRNA-10a 表达水平。IL-35检测采用酶联免疫吸附试验(ELISA)，试剂购自美国BD公司，严格按试剂说明书操作。

1.5统计学处理 采用统计学软件SPSS19.0进行t检验，采用受试者工作特征曲线分析miRNA-10a、IL-35、SOFA对脓毒血症合并AKI的诊断价值。

2 结 果

2.1两组miRNA-10a、IL-35及SOFA评分比较 AKI组miRNA-10a、IL-35及SOFA评分均显著高于对照组(P<0.001)。见表1。

表1 AKI组及对照组miRNA-10a、IL-35及SOFA评分比较

2.2miRNA-10a、IL-35及SOFA评分对脓毒血症AKI诊断性能 对脓毒血症AKI诊断，miRNA-10a诊断切点为3.01，曲线下面积为0.765；IL-35诊断切点分别为386.25 pg/ml，曲线下面积为0.795；SOFA评分诊断切点分别为35.33分，曲线下面积为0.658。见图1。

图1 miRNA-10a、IL-35及SOFA评分对脓毒血症AKI诊断性能

3 讨 论

脓毒血症在临床属于危重症，虽抗感染疗法及器官支持技术得到长足的发展，但脓毒血症造成的死亡率却一直居高不下。资料显示〔4〕：脓毒血症的死亡率高达25%～63%，患者因感染导致多器官衰竭危及生命。AKI为脓毒血症常见的一种并发症，脓毒血症大量的炎症介质促使肾血管微血栓形成，引起肾小球灌注压及滤过率的大幅降低导致AKI发生〔5〕，AKI病情凶险，预后极差。早期诊断、早期预防、及时阻断、逆转肾功能损伤为防治AKI的关键〔6〕。微小RNA为新近发现的一类单链小分子RNA，由19～24个核苷酸组成的短小非编码RNA，其可通过基因转录水平广泛地参与炎症免疫应答的各环节，IL-35为分泌型细胞因子，具有免疫抑制功能与炎症性疾病关系密切，为新型的抗炎因子。

有学者认为〔7〕：脓毒血症发生的重要机制为促炎细胞因子及抗炎细胞因子的失衡，其中包含多种细胞内及细胞间信号通路，诸如Janus激酶/信号转导和转录激活子(JAK/STAT)通路，核因子(NF)-κB通路，丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)通路，磷脂酰肌醇 3 激酶(PI3K/Akt)通路等，miRNA通过转录后蛋白水平调控各通路炎症因子相关基因及转录因子的表达及抑制，其中miRNA-10a属于脓毒血症免疫应答调控的关键因子〔8〕，其表达异常与脓毒血症的免疫调节失衡密切相关。研究显示：miRNA-10a可调节辅助性T细胞比例，促进肿瘤坏死因子(TNF)-α及IL-2炎性因子的分泌，具有促炎作用〔9，10〕。IL-35为IL-12a链与IL-27β链组成的异源二聚体蛋白，IL-35对炎症进程具有延缓作用，可上调调节型 T 细胞比例，促进IL-10的分泌，抑制Th17细胞分化及IL-17的产生，抑制机体过度的炎性反应，AKI脓毒血症患者过度的炎性反应可刺激IL-35反馈性增多，高浓度IL-35具有抑炎作用〔11～14〕；本研究数据与上述观点相符。动物实验显示〔15〕：IL-35对炎性肾损伤有一定的延缓作用。SOFA评分为临床评价危重症严重程度的常用指标，综合患者症状、体征及生理参数从而予以疾病严重程度量化，直观、客观、简单。本研究显示，miRNA-10a、IL-35的诊断效能均优于SOFA评分，其中尤以IL-35最优。

综上，miRNA-10a、IL-35对脓毒血症AKI早期诊断有重要的临床应用价值。