不同部位中华芦荟抑菌活性

王斌，张腾霄，李艳芳，赵洪波，崔英姿

1. 绥化学院食品与制药工程学院（绥化 152061）；2. 绥化学院食用菌研究所（绥化 152061）

中华芦荟（Aloe veraL.var Chinesis）为百合科多年生常绿多肉草本植物，是库拉索芦荟的优良变种。研究表明，芦荟具有抗感染消炎、提高免疫力、抗肿瘤、抗胃溃疡、护肝、保护心肌缺血、降血脂、降血糖等多种功效[1-2]。芦荟中蒽醌化合物具有较强广谱抑菌效果，且对易产生耐药性的葡萄球菌和链球菌最为敏感[3-4]。有关芦荟抑菌研究主要涉及临床用药[5-6]、畜禽养殖[7-9]、大田作物栽培[10]、食品防腐[11]等。金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、肠炎沙门氏菌、阴沟肠杆菌，不但引起畜禽疾病，而且是人类常见的食源性致病菌，困扰着人类的健康和养殖业的发展。在食品防腐中，合成防腐剂和添加剂对人体健康存在隐患，发现和开发新型天然抗菌剂符合当前人们健康需求。此次试验采用药敏纸片法和二倍稀释法，比较不同部位中华芦荟皮加凝胶、凝胶的抑菌效果，为其在食品加工、防腐方面抗菌性能方面深度开发提供依据。

1 试验材料、仪器与试剂

1.1 试验材料

由绥化学院食品与制药工程学院王双侠老师鉴定为中华芦荟（Aloe veraL. var Chinesis），自家栽培6年生，产地黑龙江省绥化市。供试菌革兰氏阳性菌：金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus）、单增李斯特菌（Listeria monocytogenes）；革兰氏阴性菌：大肠杆菌（Escherichia coli）、铜绿假单胞菌（P.Aeruginosa）、肠炎沙门氏菌（Salmonella enteritidis）、阴沟肠杆菌（Enterobactercloacae），以上菌种均购于中国工业微生物菌种保藏中心。

1.2 试验试剂

乙醇、蒸馏水、NaCl、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、葡萄糖等均为分析纯。阳性对照品有红霉素肠溶片（江苏平光制药有限责任公司）、硫酸庆大霉素胶囊（重庆迪康长江制药有限公司）、芦荟胶制剂（芦荟胶含96%，广州广德堂药业有限公司）。

1.3 试验仪器与设备

HPX-9162MBE数显电热培养箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；电子万用炉（天津市泰斯特仪器有限公司）；YXQ-LS-50SII型立式压力蒸汽灭菌器（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；SW-CJ-2F双人双面净化工作台（苏州净化设备有限公司）；BCD-209KHC冰箱（合肥美菱股份有限公司）；FA2104电子天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；KQ-50B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

2 方法

2.1 培养基制备

单增李斯特菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌、肠沙门氏菌培养基配方：蛋白胨10.0 g、牛肉膏3.0 g、琼脂20.0 g、NaCl 5.0 g、琼脂20.0 g，H2O 1 000 mL。金黄色葡萄球菌培养基配方：NaCl 40.0 g、牛肉膏1.5 g、蛋白胨5.0 g、琼脂10.0 g，蒸馏水500 mL。阴沟肠杆菌培养基配方：牛肉膏5.0 g、蛋白胨5.0 g、NaCl 2.5 g、葡萄糖5.0 g、琼脂10.0 g，蒸馏水500 mL。上述培养基配置好后分装，于121 ℃灭菌20 min，超净工作台内倒平板，备用。

2.2 菌悬液制备

从冰箱（4 ℃）中取出6种供试菌，分别转接在相应平板培养基上，在37 ℃条件下培养24 h。将培养好的菌落分别用接种环刮取两三环，放入装有灭菌生理盐水锥形瓶中，置于摇床（200 r/min）上，振摇10 min，按麦氏比浊管法将菌悬液的菌浓度稀释为1×106CFU/mL，置超净工作台中备用。

2.3 样品液制备

表1 样品编号

灭菌水清洗中华芦荟、研钵、剪刀、镊子等材料和工具，再用75%的酒精棉球擦拭。称取中华芦荟老叶、中叶、嫩叶的皮加凝胶（外皮与中部凝胶）及凝胶（叶片中部凝胶），各10 g，平行3次，充分研磨，得样品原液。无菌水分别进行稀释得75%，50%和25%样品液，置超净工作台中备用。样品编号见表1。

2.4 药敏纸片法抑菌试验

在超净工作台中，分别用移液枪吸取0.2 mL不同菌悬液，均匀涂布于相应培养基平板上。将无菌滤纸片在样品液中浸泡0.5 h。用无菌镊子夹取滤纸片，淋掉多余液体，使滤纸片与培养基密切接触。每个培养平板均匀放置4张滤纸片。灭菌生理盐水为阴性对照，抗生素（红霉素标记H、硫酸庆大霉素标记Q、氯霉素标记L）及芦荟胶制剂（标记Y）为阳性对照。阳性对照所用的抗菌药品及浓度，针对各种试验菌种通过预试验确定，芦荟胶制剂稀释成与样品液相同的4个浓度。置于37 ℃恒温培养箱内，培养24 h。测定其抑菌圈直径，以毫米（mm）为单位，平行3次，抑菌圈直径用均数±标准差表示，统计分析数据用SPSS 19.0软件。

2.5 最小抑菌浓度（MIC）测定

采用二倍稀释法，参照文献[8]方法进行测定。2.3制备的芦荟样品原液以有效成分为1.0 g/mL计，用液体培养基将各芦荟样品原液稀释成二倍比的系列，使各管质量浓度分别为0.50，0.25，0.125，0.062 5，0.031 3，0.015 6，0.007 8，0.003 9，0.002 0和0.001 0 g/mL，再向各管中加入0.1 mL含1×106CFU/mL的菌悬液，试管置于37 ℃恒温培养24 h，观测MIC。

3 结果与分析

3.1 抑菌预试验结果

由预试验可知，中华芦荟对阴沟肠杆菌、铜绿假单胞菌无明显抑菌效果。阳性对照抗生素浓度筛选结果表明，0.13 mg/mL红霉素（H）为金黄色葡萄球菌阳性对照效果较好，5 mg/mL氯霉素（L）为单增李斯特菌的阳性对照效果较好，0.8 mg/mL硫酸庆大霉素（Q）为革兰氏阴性菌阳性对照效果较好。

3.2 抑菌试验结果

抑菌试验结果见表2～表5，试验数据均符合统计学意义（p＜0.05）。中华芦荟样品液浓度越高，抑菌效果越明显；中华芦荟皮加凝胶样品液的抑菌效果明显高于凝胶的抑菌效果。中华芦荟皮加凝胶对单增李斯特菌抑菌活性与芦荟胶制剂接近，抑菌活性略低于氯霉素阳性对照。中华芦荟皮加凝胶对大肠杆菌抑菌活性与芦荟胶制剂接近，抑菌活性略低于庆大霉素阳性对照；中华芦荟中叶对大肠杆菌抑菌效果明显高于嫩叶和老叶。结合相关研究文献表明，蒽醌类化合物和凝胶多糖是芦荟发挥抗菌作用的有效成分，且蒽醌类化合物的抗菌活性大于凝胶多糖，由于蒽醌类化合物主要积累于芦荟外皮中[3]，因此同叶龄中华芦荟皮加凝胶的抑菌效果明显优于凝胶的抑菌效果。

表2 金黄色葡萄球菌抑菌效果 mm

表3 单增李斯特菌抑菌效果 mm

表4 大肠杆菌抑菌效果 mm

表5 肠炎沙门氏菌菌抑菌效果 mm

3.3 最小抑菌浓度

结果表明：不同叶龄、不同部位中华芦荟对供试菌的抑菌活性存在差别，低浓度的芦荟样品对单增李斯特菌和大肠杆菌产生抑制作用，其最小抑菌质量浓度分别为0.015 6和0.007 8 g/mL。而肠炎沙门氏菌对芦荟样品敏感度低，只有高浓度样品才能发挥抑菌作用。

4 结论

中华芦荟对单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肠沙门氏菌有明显抑菌作用，对铜绿假单胞菌、阴沟肠杆菌无明显抑菌作用。中华芦荟样品液浓度越高抑菌效果越好，中华芦荟嫩叶、中叶、老叶的抑菌效果有差别。中华芦荟皮加凝胶部位对被试菌的敏感强弱顺序依次为：大肠杆菌、单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌、肠沙门氏菌。中华芦荟凝胶部位对被试菌的敏感强弱顺序依次为：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌、肠沙门氏菌。芦荟具有较强抗菌性、不产生耐药性、低毒低害等优点，具有成为新型天然抗菌剂的巨大潜力。今后在深度开发中华芦荟对单增李斯特菌和大肠杆菌抑菌性能时，结合生物学产量，建议选用中华芦荟中叶皮加凝胶部位。