DNA结合抑制因子、Rab5基因在子宫内膜异位症患者中的表达及其意义

陈豫中 赖威 张国安 李正英

子宫内膜异位症（Endometriosis，EMS）为孕龄期女性常见疾病，由于EMS 的临床表现有时与病变程度很不相符，给临床诊断、治疗带来诸多困难［1-2］。有学者认为细胞生物学相关因子与EMS 的发生发展有关，病理过程与肿瘤组织的增殖及迁移等相似，因此，积极探索EMS 诊断及治疗的生物学标志物一直是临床研究的重点问题［3-4］。近年研究提示，DNA 结合抑制因子2（Inhibitor of differentiation/DNA binding 2，ID2）与肿瘤细胞的增殖及迁移关系密切［5-6］。此外，Rab5 是三磷酸鸟苷（Guanosine triphosphate，GTP）结合蛋白家族的一员，具有促进细胞迁移、侵袭及血管生成等作用［7-8］。因EMS 具有类似恶性肿瘤的增殖、侵袭及远处转移等生物学行为，推测EMS 患者内膜组织中也可能存在Rab5、ID2 的变化。基于此，本研究尝试综合分析ID2、Rab5 基因在EMS 患者中的表达及意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年6月至2019年8月院138 例EMS 患者作为研究组，年龄29～46 岁，体质量48～73 kg，疾病类型：卵巢型35 例，腹膜型43 例，深部浸润型60 例。另选取同期120 例行输卵管绝育手术患者作为对照组，年龄30～48 岁，体质量47～71 kg。

纳入标准：①EMS 的诊断参照世界子宫内膜异位症学会（World Endometriosis Society，WES）制定的相关标准［9］；②对照组均经检查确认无EMS；③入组前6 个月无性激素药物使用史；④认知功能、沟通能力正常；⑤患者均知晓本研究，已签署同意书。排除标准：①严重肝肾功能障碍者；②合并卵巢囊肿、先天性子宫发育异常、瘢痕子宫等疾病者；③自身免疫性疾病患者；④内分泌功能紊乱者；⑤合并严重呼吸、消化系统疾病及血液系统疾病者；⑥恶性肿瘤患者。研究组病变分期：参照美国生育学会修订的内异症分期标准评分：Ⅰ期（微型）1～5 分，Ⅱ期（轻型）6～15 分，Ⅲ期（中型）16～40分，Ⅳ期（重型）大于40 分。

1.2 方法

Rab5mRNA、ID2mRNA 表达量检测方法：入组当天，由专业检测师取受检者子宫内膜组织，采用磷酸缓冲盐溶液清洗标本组织，并采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）法检测Rab5mRNA、ID2mRNA 表达量，应用公式2-ΔΔct进行定量分析。

血清癌胚抗原125（Carcinoembryonic antigen 125，CA125）、子宫内膜抗体（Endometrial antibody，EmAb）检测方法：入组当天清晨，取受检者空腹状态下静脉血3 mL，由专业检测师采用上海利鑫坚离心机有限公司生产的L-400 离心机，以3 000 r/min转速处理10 min，取血清，采用美国Bio-RAD 公司生产的Bio-RAD550型酶标仪与配套试剂盒，以酶联免疫吸附法测定血清CA125、EmAb 水平。

1.3 观察指标

①两组子宫内膜组织中Rab5mRNA、ID2mRNA 表达量。②分析Rab5mRNA、ID2mRNA 诊断EMS 的价值。③不同病情分期EMS 患者Rab5mRNA、ID2mRNA、血清CA125、EmAb 水平。④分析Rab5mRNA、ID2mRNA、血清CA125、Em-Ab 水平与EMS 患者病情分期的相关性。⑤分析EMS 患者Rab5mRNA、ID2mRNA 与血清CA125、EmAb 水平的相关性。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0 软件进行数据处理，计量资料以（）表示、t检验，多组间比较以单因素方差进行分析，采用Spearman 和Pearson 进行相关性分析，采用受试者工作（Receiver operating characteristic，ROC）曲线分析预测价值，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料对比

对比两组分娩情况、年龄、婚姻状况、体质量、子宫内膜情况，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 两组一般资料的比较［n（%），（±s）］Table 1 Comparison of 2 groups of general information［n（%），（±s）］

表1 两组一般资料的比较［n（%），（±s）］Table 1 Comparison of 2 groups of general information［n（%），（±s）］

项目年龄（岁）体质量（kg）子宫内膜情况（例）增殖期分泌期婚姻状况（例）已婚未婚分娩情况（例）有无研究组（n=138）38.64±3.65 56.43±4.21 72（52.17）66（47.83）129（93.48）9（6.52）117（84.78）21（15.22）对照组（n=120）39.52±4.21 55.57±4.09 68（56.67）52（43.33）114（95.00）6（5.00）100（83.33）20（16.67）t/χ2值1.798 1.658 0.5220.470 0.2710.602 0.1010.751 P 值0.073 0.099

2.2 两组患者子宫内膜组织中Rab5 mRNA、ID2 mRNA 表达量

研究组子宫内膜组织中Rab5mRNA 表达量（2.75±0.34）、ID2mRNA 表达量（2.32±0.27）高于对照组Rab5mRNA 表达量（1.07±0.13）、ID2mRNA 表达量（1.10±0.11）（t=50.974、46.263）差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.3 Rab5 mRNA、ID2 mRNA 诊断EMS 的价值

ROC 曲线分析显示，Rab5mRNA 诊断EMS 的曲线下面积（Area under the curve，AUC）为0.747（95%CI为0.689～0.799），大于ID2 mRNA 的0.733（95%CI为0.675～0.786），二者联合诊断EMS 的AUC 为0.802（95%CI为0.748～0.849），联合诊断的最佳敏感度为78.99%，特异度为69.17%，见图1。

2.4 不同病情分期患者Rab5 mRNA、ID2 mRNA、血清CA125、EmAb

随着EMS 患者病情分期增高，Rab5mRNA、ID2mRNA 表达及血清CA125、EmAb 水平逐渐提高（P＜0.05），见表2。

表2 不同病情分期患者Rab5 mRNA、ID2 mRNA、血清CA125、EmAb 比较（±s）Table 2 Comparison of Rab5 mRNA，ID2 mRNA，serum CA125 and EmAb in patients with different stages of disease（±s）

表2 不同病情分期患者Rab5 mRNA、ID2 mRNA、血清CA125、EmAb 比较（±s）Table 2 Comparison of Rab5 mRNA，ID2 mRNA，serum CA125 and EmAb in patients with different stages of disease（±s）

组别Ⅰ期Ⅱ期Ⅲ期Ⅳ期F 值P 值n 27 42 36 33 Rab5 mRNA 2.02±0.30 2.33±0.35 2.85±0.41 3.77±0.56 108.381＜0.001 ID2 mRNA 1.81±0.28 2.14±0.32 2.36±0.34 2.92±0.45 54.148＜0.001 CA125（kU/L）21.63±3.71 24.42±4.06 29.80±4.38 35.02±5.03 59.891＜0.001 EmAb（OD 值）0.36±0.04 0.40±0.05 0.45±0.07 0.52±0.08 38.597＜0.001

2.5 Rab5 mRNA、ID2 mRNA 与血清CA125、Em-Ab 相关性

Pearson 相关性分析，Rab5mRNA（r1=0.568；r2=0.468）、ID2mRNA（r1=0.522；r2=0.542）与血清CA125、EmAb 呈正相关（P＜0.05），见图2。

2.6 Rab5 mRNA、ID2 mRNA、血清CA125、EmAb与病情分期的关系

Spearman 相关性分析，Rab5mRNA（r=0.397）、ID2mRNA（r=0.511）、血清CA125（r=0.682）、EmAb（r=0.701）与EMS患者病情分期呈正相关（P均＜0.05）。

3 讨论

EMS 可累及子宫肌层、盆腔、卵巢等部位，形成痛经、慢性盆腔痛、盆腔黏连及不孕等症状，危害性较大，寻求特异性分子标志物对EMS 的诊断及治疗均具有重要临床意义［10-11］。

子宫内膜发生异位增殖的关键在于在位内膜基因的表达，是引发EMS 的内在因素［13］。ID2 是近年发现的新型转录因子，其异常表达与肿瘤恶性生物学行为存在密切关系［14］。国内外大量研究显示，EMS 同样具有类似恶性肿瘤的增殖、侵袭及远处转移等生物学行为［15］。此次研究发现，EMS患者子宫内膜组织中ID2基因表达量显著升高，与EMS 的发生发展密切相关。ID2 可与碱性螺旋-环-螺旋类转录因子结合形成异源二聚体，导致ID2缺失，影响其与靶基因的结合，进而抑制相关基因表达，而ID2 的异常高表达则能促进肿瘤细胞的增殖及迁移，从而参与EMS 的发展［16］。相关研究指出，EMS 患者机体内存在较强的炎症反应，白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α 等炎性因子水平增高［17］。Rab5 作为一种GTP 酶，是细胞内膜运输的关键调节剂，具有调节炎症因子合成的作用，从而参与细胞炎症反应。本研究发现Rab5 基因异常高表达可促进EMS 发生和病情进展，与林慧芳等［18］研究结果相近，且Rab5mRNA、ID2mRNA 联合将有助于改善临床诊断EMS 敏感性，Ⅰ期EMS患者子宫内膜组织中Rab5mRNA、ID2mRNA 表达水平明显高于子宫内膜正常女性，且随着EMS患者病情分期增高，Rab5mRNA、ID2mRNA 表达水平逐渐提高，检测Rab5mRNA、ID2mRNA 表达水平有助于EMS 的早期发现和治疗。

Jelodar 等［19］研究发现，在无EMS 的机体血清中CA125 的浓度较低，而在有EMS 的机体血清中CA125 的浓度较高。CA125 是一种存在于细胞表面的糖蛋白，在某些特定类型恶性肿瘤或其他良性病症患者的血液中升高［20］。EMS 患者血清CA125水平与病情分期存在正相关关系，CA125 可通过损伤EMS 病灶组织中的线粒体而提高腺体细胞的黏附能力，最终严重损伤基底膜层上皮组织，因此CA125 可在一定程度上反映EMS 病情严重程度。EmAb 是子宫内膜内的特异性抗体，当女性子宫内膜发生炎症时，可能转化成抗原或半抗原，刺激机体自身产生相应的抗体［21］。近年来，EmAb 的测定被广泛应用于EMS 的诊断和辅助治疗，研究发现EMS 患者细胞和体液免疫均有变化，异位的内膜使机体产生免疫诱导进而产生EmAb［22］。国外研究指出，EMS 发生过程中，患者血清和子宫内膜中的EmAb 对疾病的进展具有重要促进作用，与患者病情关系密切［23］。本研究发现EmAb 水平与患者病情分期存在正相关，可指导临床评估EMS 病情程度。本研究虽然明确了Rab5和ID2基因表达在EMS 诊断及病情程度评估方面具有较高临床价值，但研究是在较理想的实验条件下进行，实际工作中Rab5和ID2基因表达能否则为EMS 诊断及病情程度评估的生物学指标，仍需以后开展大量研究及临床试验证实，也是我们后续研究的方向。