胸腹水结核斑点试验在诊断结核性胸膜炎中的临床价值

牟向欣

（辽宁省锦州市传染病医院检验科，辽宁 锦州 121017）

结核性胸膜炎属于临床多发胸膜炎症性疾病，主要由结核杆菌及其代谢、自溶产物侵入超敏机体胸膜腔所致[1]。多数结核性胸膜炎患者早期症状不典型，甚至无明确症状，而待出现明确症状入院确诊时，往往已失去最佳治疗时机，影响预后[2]。因此，就结核性胸膜炎患者来说，临床需采取积极措施，提升患者早期诊断准确性，以指导临床治疗方案制定，改善预后。当前，临床常用结核性胸膜炎诊断方法较多，包括细菌学指标检测、胸膜活检等。但细菌学检测也存在一定不足之处，如阳性率较低等；而胸膜活检虽然是结核性胸膜炎患者诊断金标准，但也属于有创性操作，会给患者带来一定身心创伤，且部分患者耐受度不佳，应用受限[3]。近年来，临床开始越来越多地关注结核感染T细胞斑点实验（T-SPOT.TB）在结核病诊断中的应用，但就外周血、胸腹水T-SPOT.TB检测在结核性胸膜炎中的诊断效能仍存在一定争议。本次研究选取2017年12月至2018年12月本院82例疑似结核性胸膜炎患者，重点分析其诊断中外周血、胸腹水T-SPOT.TB检测的价值，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料：经医院伦理委员会审核批准后，回顾性分析2017年12月至2018年12月本院82例疑似结核性胸膜炎患者的临床资料。纳入标准：①临床表现出胸痛、咳嗽、发热等症状；②胸部影像学检查显示存在胸腔积液征象；③无严重精神、脏器类疾病；④临床资料完整。排除标准：①合并其他呼吸系统疾病，如支气管炎、支气管哮喘等；②合并严重肝肾功能衰竭；③合并结缔组织疾病；④存在精神病史；⑤近期服用过免疫抑制剂等药物者；⑥临床资料不完整。本组患者中，男60例，女22例；年龄16～68岁，平均（40.02±2.62）岁。其中经活检病理检查确诊68例。所有患者均行胸腹水、外周血T-SPOT.TB检测。以病理结果为标准，比较胸腹水、外周血T-SPOT.TB诊断效果。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂：采用英国Oxford Immunotec LTD生产的T-SPOT.TB试剂盒、青岛海尔生物安全柜（HR40-ⅡA2）、美国CTL提供的酶联斑点分析仪、北京北方利辉设备生产的CO2培养箱等。

1.2.2 检测方法：抽取受检者5～10 mL外周血，肝素锂抗凝，行单个核细胞分离，以备行外周血T-SPOT.TB检测。抽取受检者5～10 mL新鲜胸腔积液，置入肝素锂抗凝管，混匀，行单个核细胞分离，以备行胸腹水T-SPOT.TB检测。检测步骤：标记培养板，阴性对照组加入50 μL无血清培养液，A孔加入50 μL人早期分泌抗原靶6，B孔加入50 μL培养滤液蛋白10。随后分别将100 μL调整好浓度的细胞悬液加入各孔。微孔板置入培养箱，条件：5%CO2，37 ℃，持续培养16～20 h。随后以PBS液冲洗，加入50 μL碱性磷酶标记的单克隆抗体，2～8 ℃条件下孵育，持续1 h，洗板。各孔内分别加入底物显色液，室温下静置，持续7 min，蒸馏水终止反应。判断标准：①若观察阴性对照孔版点数不超过6个，且抗原A或B孔版点数与阴性对照孔斑点数差值≥6，即为阳性；反之为阴性。②若观察硬性对照孔斑点数为6～10个，且抗原A或B孔版点数≥阴性对照孔斑点数2倍，即为阳性；反之为阴性。

1.3 观察指标：①比较胸腹水T-SPOT.TB、外周血T-SPOT.TB对结核性胸膜炎检出阳性率；②以病理学结果为标准，比较胸腹水、外周血T-SPOT.TB诊断效果，包括敏感度、特异度、准确度。敏感度=真阳性/（真阳性+假阴性）×100.0%。特异度=真阴性/（真阴性+假阳性）×100.0%。准确度=（真阳性+真阴性）/总人数×100.0%。

1.4 统计学分析：数据以SPSS20.0软件分析。计数资料以例数或百分比表示，用χ2检验对比。计量资料以平均值±标准差（±s）表示，组间比较采用独立样本t检验。P＜0.05表示有统计学差异。

2 结果

2.1 两种方法检测结果比较：本组患者经胸腹水T-SPOT.TB检出阳性率81.71%（67/82），高于外周血T-SPOT.TB的68.29%（56/82），差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两种方法检测结果对比[n（%）]

2.2 两种方法诊断效能比较：以病理结果为标准，胸腹水T-SPOT.TB对结核性腹膜炎诊断敏感度、特异度、准确度分别为97.06%（66/68）、92.86%（13/14）、96.34%（79/82），高于外周血T-SPOT.TB诊断敏感度、特异度、准确度的70.59%（48/68）、42.86%（6/14）、65.85%（54/82），差异有统计学意义（χ2=17.569、5.894、24.860，P=0.000、0.015、0.000）。见表2。

表2 两种方法诊断结果与病理诊断结果对比（n）

3 讨论

结核性胸膜炎在临床上较为常见，是一种多发肺外结核疾病。一旦患者出现结核性胸膜炎，会导致其临床表现出胸痛、发热、干咳等症状，影响身心健康和生活质量[4-5]。而临床提升此类患者治疗效果、改善其预后的关键，是采取积极措施进行早期诊断和治疗。但是，结核所致各类临床症状往往缺乏特异性，诊断难度较大。既往临床多采用痰标本检测，但也极易受痰标本质量不达标等因素影响，导致出现误诊、漏诊现象，且培养周期长[6]。影像学检查也是临床常用结核性胸膜炎诊断措施，但相应影像检查对积液性质诊断准确度较低，在疾病诊断中的应用存在一定局限性。相关Meta分析发现在结核性胸膜炎诊断中应用胸水腺苷脱氨酶检测，认为其具有一定敏感度，能为结核性胸膜炎诊断提供参考价值，但该方法也存在不足之处，如特异性较低等[7]。而且，在部分免疫性疾病（如系统性红斑狼疮等）所致胸腔积液中，胸水腺苷脱氨酶也会存在升高现象，影响诊断准确性、特异性。故需临床采取积极措施，寻找新型诊断方法，提升结核性胸膜炎早期诊断准确性，以指导临床治疗方案制定，改善疾病控制效果。

近年来，随着医学技术的快速发展，酶联免疫斑点技术开始越来越多地引起人们的关注，且经过30多年研究及发展，已发展成为特异T细胞检测中最敏感措施之一，能在数量众多外周血单个核细胞中检测出抗原特异细胞。而在酶联免疫斑点技术基础上形成的T-SPOT.TB检测主要以T细胞免疫应答为实施基础，在结核分枝杆菌感染诊断中具有较高效能，且敏感度、特异度较高，还不受免疫力功能是否正常影响，即便在免疫力极低人群中也能发挥较好诊断效能[8-9]。特别是早期分泌抗原靶6、培养滤液蛋白10这两种特异性结核分枝杆菌刺激源的应用，大大提升了T-SPOT.TB检测准确度、敏感度、特异度，受到国内外临床高度关注[10]。此外，T-SPOT.TB检测还不受接种卡介苗等因素影响，在全球广泛内获得广泛认可。而且，胸腹水T-SPOT.TB能对结核活动早期状况进行反映，便于评估机体细胞免疫情况，具有较高敏感度，且检测速度快，耗时短。但是，笔者查阅知网、万方、Pubmed等中英文数据库，发现临床就结核性胸膜炎诊断中外周血、胸腹水T-SPOT.TB诊断效能的研究仍较少。而胸腔积液属于全身性疾病或胸膜积液所致液体渗出或渗出在胸膜积聚引发的病理改变，能对疾病状况进行准确反映。本次研究中，82例患者经病理学检查确诊为结核性胸膜炎者共68例，而胸腹水T-SPOT.TB检出阳性率81.71%，外周血T-SPOT.TB检出阳性率为68.29%，差异显著（P＜0.05）。而且，自表2可以看出，以病理学结果为标准，胸腹水T-SPOT.TB对结核性腹膜炎诊断敏感度为97.06%，特异度为92.86%，准确度为96.34%。而外周血T-SPOT.TB诊断敏感度为70.59%，特异度为42.86%，准确度为65.85%。这说明胸腹水T-SPOT.TB对结核性胸膜炎检出阳性率、诊断敏感度、特异度及准确度均优于外周血T-SPOT.TB，提示胸腹水T-SPOT.TB诊断效能更高。笔者认为，这可能是因为，外周血T-SPOT.TB虽然检测速度快，但检测结果也可能受一定外界因素影响，如血液采集质量、体内存在交叉抗体等。但胸腹水T-SPOT.TB检测也存在一定亟待解决的问题，如检测步骤复杂、对技术及实验室要求较高、价格昂贵等，可能影响其在基层医院的全面推广。

综上所述，结核性胸膜炎诊断中胸腹水T-SPOT.TB检测应用价值较高，需引起高度关注。