老鸦珠提取物对草酸钙型肾结石形成的抑制作用研究

李先梅，肖金龙，劳斌章，欧晓凤，谢绍辉，李大宁，张剑光，陆 洋

（钦州市卫生学校，广西 钦州 535000）

薏苡Coix lacryma.jobi.Linn.为禾本科薏苡属一年生或多年生草本，在广西各地均有分布，资源非常丰富，其种仁和根均可药用。薏苡仁为薏苡的成熟种仁，具有健脾利湿、除痹止泻、清热排脓、健胃解痉等功效，用于治疗水肿、小便不利、脾虚泄泻等［1］。老鸦珠为薏苡的干燥根，民间常用于治疗泌尿系统结石，取得了一定的效果，但关于其治疗泌尿系统结石的药理作用研究目前尚无报道。本文通过复制泌尿系统结石动物模型，检测小鼠尿液中草酸和钙的含量，以及在显微镜下观察草酸钙晶体在小鼠肾脏沉积的情况，初步研究老鸦珠提取物对草酸钙型肾结石小鼠的影响。

1 实验材料

1.1 药物 老鸦珠采集于广西浦北，由广西中医药大学刘寿养副教授鉴定为禾本科薏苡Coix lacryma.jobi.Linn.的干燥根。

1.2 动物 昆明种雄性小鼠，体质量18～22 g，由广西医科大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK桂2009-0002。

1.3 试剂 净石灵胶囊（吉林省银诺克药业有限公司，批号20160103）；溴百里草酚蓝（国药集团化学试剂有限公司，批号20180228）；盐酸（廉江市爱廉化试剂有限公司，批号20171105）；氢氧化钠（国药集团化学试剂有限公司，批号20180131）；甲基红（国药集团化学试剂有限公司，批号20170804）；铬酸钾（国药集团化学试剂有限公司，批号20171201）；氧氯化锆（天津市光复精细化工研究所，批号20170221）；铬黑T（天津市光复精细化工研究所，批号20180308）；钙羧酸（国药集团化学试剂有限公司，批号20180104）。

1.4 仪器 760CRT型双光束紫外分光光度计（上海安亭科学仪器厂）；FA2204B型电子天平（上海天美天平仪器有限公司）；DM2000型LED显微镜（LEI⁃CA，德国）。

2 实验方法

2.1 老鸦珠提取物的制备 取老鸦珠适量，加水8倍，煎煮3次，第一次煎煮1 h，第二、三次各煎煮0.5 h，过滤，合并滤液，浓缩至稠膏，备用。

2.2 阳性对照组灌胃溶液的制备 取净石灵胶囊适量，临用前加水溶解，混匀，作为阳性对照药。

2.3 动物分组及给药 参照文献［2］采用诱石液（0.75%乙二醇+0.75%氯化铵）制作动物结石模型。取雄性昆明种小鼠60只，随机分为6组：空白对照组，模型对照组，阳性对照组（予净石灵胶囊灌胃，剂量为3.75 g/kg），老鸦珠高、中、低剂量组（予老鸦珠提取物灌胃，剂量为60 g/kg、30 g/kg、15 g/kg），10只/组。空白对照组、模型对照组灌胃给予自来水，其余各组灌胃给予相应的药物，1次/天，给药容量为20 ml/kg，连续4周。

2.4 观察指标及检测 参照尿液中草酸、钙含量的测定方法［3］，分别于第1、2、3、4周测定小鼠尿液中草酸含量及钙含量；采用HE染色，于显微镜下观察草酸钙晶体在小鼠肾脏中的分布情况，参照判定标准［4］，对结晶进行分级。

2.5 统计学方法 采用SPSS 19.0软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差（±s）表示，两组间差异用t检验（方差不齐时采用t检验校正公式）；等级资料采用Ridit分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

3 结 果

3.1 老鸦珠提取物对草酸钙型肾结石小鼠尿液中草酸含量的影响 见表1。

表1 老鸦珠提取物对草酸钙型肾结石小鼠尿液中草酸含量的影响 （±s）

表1 老鸦珠提取物对草酸钙型肾结石小鼠尿液中草酸含量的影响 （±s）

注：与空白对照组比较，①P<0.01；与模型对照组比较，②P<0.01

组 别空白对照组模型对照组阳性对照组老鸦珠高剂量组老鸦珠中剂量组老鸦珠低剂量组尿液中草酸含量（μmol/ml）第4周0.011±0.003 0.040±0.008①0.024±0.008②0.026±0.004②0.024±0.005②0.023±0.007②n 剂量（g/kg）10 10 10 10 10 10——3.75 60 30 15第1周0.006±0.001 0.022±0.001①0.010±0.001②0.009±0.002②0.009±0.001②0.008±0.001②第2周0.008±0.002 0.020±0.008①0.010±0.005②0.010±0.003②0.010±0.005②0.009±0.003②第3周0.010±0.003 0.031±0.005①0.015±0.004②0.016±0.004②0.015±0.004②0.015±0.002②

表1结果表明，与空白对照组比较，模型对照组小鼠尿液中草酸的含量明显升高（P<0.01）；与模型对照组比较，老鸦珠高、中、低剂量组及阳性对照组均能明显降低小鼠尿液中草酸的含量（P<0.01）。

3.2 老鸦珠提取物对草酸钙型肾结石小鼠尿液中钙含量的影响 见表2。

表2 老鸦珠提取物对草酸钙型肾结石小鼠尿液中钙含量的影响 （±s）

表2 老鸦珠提取物对草酸钙型肾结石小鼠尿液中钙含量的影响 （±s）

注：与空白对照组比较，①P<0.01；与模型对照组比较，②P<0.05，③P<0.01

组 别空白对照组模型对照组阳性对照组老鸦珠高剂量组老鸦珠中剂量组老鸦珠低剂量组尿液中钙含量（μmol/ml）第4周1.00±0.09 1.52±0.15①1.26±0.29②1.30±0.19②1.43±0.21 1.55±0.13 n 剂量（g/kg）10 10 10 10 10 10——3.75 60 30 15第1周0.35±0.15 0.67±0.16①0.75±0.11 0.43±0.15③0.58±0.10 0.63±0.16第2周0.36±0.19 1.14±0.31①0.98±0.25 0.50±0.11③0.93±0.31 1.08±0.18第3周0.54±0.23 1.08±0.34①1.25±0.12 0.52±0.26③0.76±0.20②0.86±0.26

表2结果表明，与空白对照组比较，模型对照组小鼠尿液中钙的含量明显升高（P<0.01）；与模型对照组比较，老鸦珠高剂量组能明显降低小鼠尿液中钙的含量，差异有显著性意义（P<0.05或P<0.01）。

3.3 老鸦珠提取物对草酸钙型肾结石小鼠肾脏草酸钙晶体形成的影响 见图1、表3。

图1 老鸦珠提取物对肾结石小鼠草酸钙结晶形成的影响 （×40）

图1表明，空白对照组小鼠肾小管未见扩张且未见任何草酸钙晶体沉积。模型对照组小鼠肾脏组织肿胀，表面分布点状白色结晶，镜下见肾小管管腔明显扩张，肾皮质、髓质、上皮细胞明显肿胀、变性、坏死，草酸钙晶体主要位于近曲小管和远曲小管，皮质多于髓质，晶体体积大，有明显慢性炎性细胞浸润，细胞排列不整齐。老鸦珠提取物高、中、低剂量组镜下观察草酸钙晶体主要位于髓质部，细胞肿胀比模型对照组轻，草酸钙晶体体积小。

表3 各组小鼠肾组织草酸钙结晶分级情况 （n=10）

4 讨论

正常情况下，肾小管尿液中新生的草酸钙结晶很快被尿流冲走，无法停留在肾小管中聚集形成结石。因此，在结石形成过程中，草酸钙结晶滞留在肾小管内是必要的前提条件［5］。而草酸钙结晶的滞留会对肾小管造成损伤，会增加草酸钙结晶在肾小管的黏附，形成草酸钙结石。在本次实验中，老鸦珠提取物有降低草酸钙型肾结石小鼠尿液中草酸及钙含量的作用（P<0.05或P<0.01），形成的晶体体积小，可减少草酸钙晶体在小鼠肾脏中的沉积，从而对乙二醇及氯化铵诱导草酸钙晶体结石的形成有抑制作用。但该作用是否是通过溶石作用或抑制晶体形成而产生则有待进一步的研究。