蒙医五味甘露浴对佐剂性关节炎大鼠肝GSH、GSH-Px、SOD活性及MDA含量的影响

昂格力玛 水 玲 伊茹娜 斯 琴 陈英松

内蒙古自治区呼和浩特市土默特左旗内蒙古医科大学金山校区，内蒙古 呼和浩特 010100

类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)是一种慢性自身免疫性疾病,伴随着复杂的炎症介质导致关节的损害、滑膜炎症、软骨和骨的损坏,导致人类和动物严重的机体功能障碍[1]。目前研究表明免疫学指标的检测对于类风湿关节炎的价值较高，能够较好地辅助已有的实验室诊断[2]。风湿性关节炎属蒙医“协日乌素病”范畴，蒙医称关节“协日乌素病”。蒙医学认为饮食起居不当、长时间在寒湿环境中生活、气候过于寒凉、阴雨连绵、感染引起的一种罕见病，起病缓慢，病程较长，易于复发，难于控制的一种慢性关节疾病[3]。临床实验显示，动物实验显示，蒙医五味甘露对风湿性关节炎的治疗有一定的疗效。蒙医五味甘露浴具有较好地免疫调节作用[4],具有较好的抗炎、镇痛作用[5]。蒙医五味甘露浴是蒙古族特色疗法之一，由小白蒿、水柏枝、麻黄、杜鹃叶、刺柏等5种药物组成。直接从体外给温热刺激，以达到治疗疾病的目的。浴具有悠久的历史，资源丰富，疗效明显，副作用小等特点[6]。佐剂性关节炎模型的研究日渐增多，其抗氧化和抗炎作用受到广泛关注。蒙医五味甘露浴剂，具有舒筋散结、通络止痛、益气补肾、祛燥黄水等功效。临床上主要治疗四肢僵直或拘挛，关节肿痛、肌肉萎缩等“黄水”疾病。方中刺柏叶味甘、涩、性凉、轻、钝，用以清肾热，燥黄水；水柏芝味甘，性凉、钝、重、固，以清热，敛毒、祛黄水、清肉毒；小白蒿味苦，性凉、钝、涩、燥，有通活血脉、祛燥黄水、活血化瘀、益肾壮腰等功效。麻黄味苦、涩，性凉、钝、轻、涩、燥，有清热，除血虫，破痞消肿，发汗止痛[7]之效；照白山味甘、苦、涩，性温、轻、大毒，有祛巴达干，祛痰等功效。

本实验采用CFA (完全弗氏佐剂)诱导的佐剂性关节炎(adjuvant arthritis, AA)模型大鼠。观察治疗前后大鼠肝脏GSH、GSH-Px、SOD活性及MDA含量的变化，探讨蒙医五味甘露浴的抗氧化，疏通气血作用。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器 蒙医五味甘露浴剂(批号:720121110，内蒙古自治区蒙中医医院中心制剂室提供)；完全弗氏佐剂(CFA，Sigma公司提供)；GSH(谷胱甘肽)，GSH-Px(谷胱甘肽过氧化物酶)，SOD(超氧化物歧化酶)，MDA(丙二醛),ELISA检测试剂盒，北京新亚太生物科技有限公司提供，批号分别为DZE30786，DZE30787，DZE30267，DZE30266；

80-2式离心机：金坛市化城敏科实验仪器厂；全自动多功能酶标仪： MULTISKAN MK3，Thermo，USA；电热恒温培养箱：DH4000A，天津泰斯特；MINI shaker：MH-1， kylin-Bell Lab Instruments QILINBEIER。

1.2 实验动物 取7周龄，清洁级雄性SD大鼠[SCxK(军)2012-0004]30只，体重180～200 g，由北京实验动物科技有限公司提供，在黑暗与光明周期为12 h，温度为(24±2)℃的环境，自由饮食水进行3 d适应性饲养。

1.3 分组与造模 将30只SD大鼠，随机分为空白组、模型组、蒙医五味甘露浴组，每组10只。对模型组，蒙医五味甘露浴组大鼠进行造模。无菌条件下在大鼠右后足趾注射0.1 mL的CFA (内含0.1℅灭活结核杆菌) 致炎，空白组注射同剂量的0.9%的生理盐水，之后针眼处涂抹紫药水[6]。

1.4 治疗方案 空白组在第3天开始进行温水浴对照，1次/d，30 min/次，连续治疗15 d，药浴方法为在50 cm×30 cm×20 cm的半透明塑料容器中加入温度为(25±2)℃的清洁饮用水1000 mL，将大鼠的四肢和尾部浸泡在温水中，治疗结束后用清洁毛巾擦拭干净后放入鼠笼中。

模型组在造模之后的浴疗方法同空白组。

蒙医五味甘露浴组在造模后第3天开始进行五味甘露浴治疗，药浴浓度为33.4%，1次/d，30 min/次，连续治疗15 d，药浴方法同空白组，药浴温度为(40±2) ℃。

1.5 取材 末次治疗后24 h，用戊巴比妥钠腹腔麻醉大鼠，切开腹腔取下完整肝脏并称重后置于冻存管，用液氮快速冷冻，放入-80 ℃冰箱保存待测。

1.6 检测方法 采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠肝脏GSH，GSH-Px，SOD活性及MDA含量。

2 结果

2.1 各组大鼠肝匀浆MDA含量和SOD、OGSH-Px、GSH活性的影响。

与正常组相比，模型组SOD、GSH、GSH-Px的活性明显下降(P<0.05)，MDA的含量明显增加(P<0.05)。五味组与模型组相比蒙医五味甘露浴组SOD、GSH、GSH-Px的活性明显升高(P<0.05)，MDA的含量明显减少(P<0.05)。见表1，如图1所示。

图1 A表示各组SOD活性的比较；B表示各组MDA含量的比较； C表示各组GSH活性的比较；D表示GSH-Px活性的比较

表1 各组大鼠肝脏SOD、GSH、GSH-Px活性，MDA含量的比较

2.2 各组大鼠肝指数变化 与空白组比较，模型组大鼠活动减少、体重减轻，肝脏指数明显增加(P<0.05)，且随着造模时间的延长，模型组大鼠炎症的加重，表现为原发侧足趾肿胀进行性加重，且出现渐进性的继发性足肿胀和前足肿胀，逐渐行动不便、站立不稳，肝脏指数逐渐增加。与模型组比较，五位组大鼠肝脏指数明显降低(P<0．05)。如图2所示。

图2 各组肝脏指数的比较

3 讨论

蒙医五味甘露浴是蒙古族特色疗法之一，由小白蒿、水柏枝、麻黄、杜鹃叶、刺柏等5种药物组成。直接从体外给温热刺激，以达到治疗疾病的目的。浴具有悠久的历史，资源丰富，疗效明显，副作用小等特点[7]。佐剂性关节炎模型的研究日渐增多，其抗氧化和抗炎作用受到广泛关注。蒙医五味甘露浴剂，具有舒筋散结、通络止痛、益气补肾、祛燥黄水等功效。临床上主要治疗四肢僵直或拘挛，关节肿痛、肌肉萎缩等“黄水”疾病。方中刺柏叶味甘、涩、性凉、轻、钝，用以清肾热，燥黄水；水柏芝味甘，性凉、钝、重、固，以清热，敛毒、祛黄水、清肉毒；小白蒿味苦，性凉、钝、涩、燥，以通活血脉、祛燥黄水、活血化瘀、益肾壮腰等功效。麻黄味苦、涩，性凉、钝、轻、涩、燥，以清热，除血虫，破痞消肿，发汗止痛[8]；照白山味甘、苦、涩，性温、轻、大毒。以祛巴达干，祛痰等功效。

肝脏是机体物质代谢的重要器官，其中的自由基代谢及抗氧化酶变化较为明显。SOD是保护肝脏所必需的蛋白质，对预防、修复氧化应激引起肝损伤中具有重要的作用，也是体内重要的防御自由基毒害的抗氧化酶，分解过氧化氢和脂质过氧化物，阻断脂质过氧化反应，保护细胞免受伤。有文献显示RA患者体内SOD含量低于正常人，SOD和MDA是相互对立的氧自由基相关因子，当体内SOD含量偏低时，不能防御自由基，分解不了过氧化氢和脂质过氧化物，不能阻断脂质过氧化反应，因此MDA会增加。MDA是脂质过氧化的代谢产物，是造成细胞膜损伤的物质基础，其含量可以反映机体内脂质过氧化的程度，间接反映自由基对细胞的损伤程度。MDA增多会引起生命大分子蛋白质、核酸等发生交联聚合，故有细胞毒性。GSH是一种低分子清除剂，其量的多少是衡量机体抗氧化能力大小的重要因素。GSH含量增多会引起体内过量的氧自由基造成肝细胞膜脂质的过氧化，损伤抗氧化酶。GSH-Px是体内催化过氧化氢分解的重要的酶，它特意催化GSH对过氧化氢的还原反应，可以起到保护细胞膜结构和功能完整的作用[9]，GSH-Px水平的高低反映着机体抗氧化能力，GSH-Px水平下降表明机体抗氧化能力的下降，导致机体自由基生成大量增加。

本实验中，AA模型组大鼠肝脏GSH、GSH-Px和SOD活性显著降低，而MDA的浓度增加，说明AA模型组大鼠肝脏组织中存在氧化应激作用。过量的氧自由基造成肝细胞膜脂质的过氧化，损伤抗氧化酶，引起GSH、GSH-Px和SOD的催化作用降低甚至失活。还有研究发现RA患者抗氧化能力下降，在急性和慢性炎症RA患者滑膜液内O2的增长超过了SOD的清除能力，且SOD水平低于正常人，同时脂质过氧化损伤增加。大量产生的自由基促进软骨的破坏，加重RA关节损伤。

与空白组比，模型组肝脏指数明显增长，与模型组比，五味组肝脏指数明显下降，但没有统计学意义。具体原因还有待进一步研究。

本实验结果表明蒙医五味甘露浴具有抗氧化作用，能提高AA体内降低的抗氧化能力，减轻细胞的过氧化损伤，同时能保护好AA大鼠软骨。实验结果提示蒙医五味甘露浴对AA大鼠有抗氧化作用和对其关节有保护作用。