菊明降压丸的薄层色谱研究

叶紫金 廖树清 杨泽旋 李焯星 姚楠泓 林耿丰

1. 广州中医药大学第二附属医院，广东 广州 510000；2.广东省揭阳市药品检验所，广东 揭阳 522000； 3.广东汇康元药业有限公司，广东 揭阳 522000

菊明降压丸收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第二十一册，是由野菊花和决明子组成的中成药，具有降低血压的功效。用于高血压及其引起的头痛、目眩[1]。但因卫生部药品标准中仅有显微鉴别项和检查项，因此，为能更好的控制该药的质量，本研究对野菊花和决明子建立薄层色谱鉴别方法，提供了薄层鉴别指标，为控制菊明降压丸的内在质量提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 DCS-10薄层色谱自动分析系统；TII-II型薄层加热器；KQ-300DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司，功率300 W，频率300 W)；电子分析天平(梅特勒AL204)；硅胶G预制板(德国默克有限公司，批号：536092，规格：10×20 cm)；硅胶G预制板(烟台化学工业研究所，批号：150325，规格：10×20 cm)，硅胶G预制板(青岛海洋化工厂分厂，批号：20150108，规格：10×20 cm)。

1.2 试药 野菊花对照药材(批号120995-201506)；蒙花苷对照品(批号111578-201710)；决明子对照药材(批号121011-200604)；橙黄决明素对照品(批号111900-201605)，均购于中国食品药品检定研究院；甲醇、无水乙醇、乙酸乙酯、石油醚(60～90 ℃)、丙酮、丁酮、甲酸均为分析纯；菊明降压丸4批(批号：14071348、14072106、14072107、17072812，北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂)，阴性样品为自制。

2 方法与结果

2.1 野菊花的薄层色谱鉴别 取本品10 g，粉碎，加无水乙醇30 mL，超声处理30 min，放冷，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取野菊花对照药材1 g，加无水乙醇20 mL，同法制成对照药材溶液。再取蒙花苷对照品，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，作为对照品溶液[2]。照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验，吸取上述三种溶液各2～5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铝溶液，热风吹干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。结果表明，供试品中清晰，分离效果，阴性无明显干扰，方法专属性强。如图1所示。

1.缺野菊花阴性供试品，2～5.供试品， 6.野菊花对照药材，7.蒙花苷对照品图1 野菊花的薄层色谱鉴别

2.2 决明子的薄层色谱鉴别 取本品10 g，粉碎，加乙酸乙酯30 mL、盐酸1 mL，加热回流30 min ，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取决明子对照药材0.2 g，同法制成对照药材溶液。再取橙黄决明素对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验，吸取上述三种溶液各3～10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90 ℃)(10∶4)为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光(365 nm)下检视。置氨蒸气中熏后，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同的斑点。结果表明，供试品中清晰，分离效果，阴性无明显干扰，方法专属性强。如图2所示。

1.缺决明子阴性供试品，2～5.供试品， 6.决明子对照药材，7.橙黄决明素对照品图2 决明子的薄层色谱鉴别

3 方法学考察

3.1 不同薄层板的考察 选用硅胶G预制板(德国默克有限公司，批号：536092)；硅胶G预制板(烟台化学工业研究所，批号：150325)，硅胶G预制板(青岛海洋化工厂分厂，批号：20150108)3种薄层板，斑点清晰，阴性无干扰，结果表明不同产家的薄层板对本实验所建立的方法无明显影响。如图3、图4所示。

1.缺野菊花阴性供试品 2～5.供试品 6.野菊花对照药材 7.蒙花苷对照品 A：默克；B：青岛；C：烟台图3 不同薄层板的考察：野菊花

1.缺决明子阴性供试品 2～5.供试品 6.决明子对照药材 7.橙黄决明素对照品 A：默克；B：青岛；C：烟台图4 不同薄层板的考察：决明子

3.2 不同温度的考察 对低温(6 ℃)、室温(26 ℃)进行了考察，结果展开温度为低温(6 ℃)、室温(26 ℃)时，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点，且斑点清晰，分离度好，阴性无干扰，结果表明不同温度展开的条件对本实验建立的方法无明显影响。如图5、图6所示。

1.缺野菊花阴性供试品 2～5.供试品 6.野菊花对照药材 7.蒙花苷对照品 A：低温(6 ℃)；B：室温(26 ℃)图5 不同展开温度的考察：野菊花

1.缺决明子阴性供试品 2～5.供试品 6.决明子对照药材 7.橙黄决明素对照品 A：低温(6 ℃)；B：室温(26 ℃)图6 不同展开温度的考察：决明子

3.4 不同湿度的考察 对低湿度(18%)、中湿度(55%)、高湿度(88%)进行考察，结果在展开温度为室温，湿度分别为18%和88%时，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点，且斑点清晰，分离度好，阴性无干扰，结果表明不同湿度下的展开条件对实验所建立的方法无明显影响。如图7、图8所示。

1.缺野菊花阴性供试品 2～5.供试品 6.野菊花对照药材 7.蒙花苷对照品 A：相对湿度(18%)；B：相对湿度(55%)；C：相对湿度(88%)图7 不同展开湿度的考察：野菊花

1.缺决明子阴性供试品 2～5.供试品 6.决明子对照药材 7.橙黄决明素对照品 A：相对湿度(18%)；B：相对湿度(55%)；C：相对湿度(88%)图8 不同展开湿度的考察：决明子

4 讨论

实验过程中野菊花和决明子提取方法和展开剂系统均参考了药典中单味药材及部分相关中成药的鉴别方法[3],而根据复方制剂的复杂性、实验操作简易型及所使用试剂的安全性。笔者对最终的薄层方法进行了一定的优化，以达到鉴别的最佳效果。

4.1 野菊花的鉴别 提取方法比较了水超声后乙醚再萃提[4]、80% 乙醇浸泡后提取[5]、甲醇超声[6]、乙醇超声[7]、无水乙醇超声、展开系统比较了乙酸乙酯-丁酮-氯仿-甲酸-水(15∶15∶6∶4∶1)、乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)[3]、正己烷-乙酸乙酯-丁酮-甲酸(2∶5∶5∶1)，实验结果表明甲醇超声提取和无水乙醇超声提取差别不大，所以最终选择无水乙醇作为提取溶剂，展开剂为乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)这个组合操作简易，试剂环保，所得到的斑点清晰，重现性好，专属性强、阴性对照无干扰，故用此法。

4.2 决明子的鉴别 通过比较7种提取方法，最终以乙酸乙酯加盐酸加热回流提取，去除以乙醚作萃取，三氯甲烷溶解为主体的几种类似提取方法；展开系统比较了石油醚(30～60 ℃)-丙酮(2∶1)、石油醚(30～60 ℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)上层溶液[8]、环己烷-乙酸乙酯-甲酸(12∶3∶0.15)、石油醚(30～60 ℃)-环己烷-乙酸乙酯-甲酸(6∶12∶5∶0.5)、正己烷-乙酸乙酯-甲酸(10∶1∶1)上层溶液、石油醚(30～60 ℃)-丙酮(3∶1)、石油醚(60～90 ℃)-丙酮(1∶3)[9],实验结果表明乙酸乙酯加盐酸加热回流提取的操作最为简易，所用试剂毒性低，对环境污染少，所得到的斑点清晰，重现性好，专属性强、阴性对照无干扰，故用此法。

综上，菊明降压丸中的野菊花和决明子的薄层色谱具有明显的鉴别特征。所采用的方法专属性强、灵敏度高，重复性好，操作简便，可为有效控制菊明降压丸的质量标准提供科学的依据，填补该药缺少薄层鉴别的空白。