胃癌组织中VEGF-A、ADD1与临床病理特征的相关性

张志明

胃癌是严重危害人体健康的恶性肿瘤，近年来在我国发病率不断增长，且呈年轻化发展，而临床研究发现，胃癌患者进展期5年生存率较低，但早期5年生存率在90%以上[1-2]。因此，为提高胃癌患者生存质量，帮助其早期确诊治疗，寻求有效的特异性标志物尤为重要。相关研究发现，在食管鳞状细胞癌、原发性胆囊癌、宫颈癌等恶性肿瘤中，血管内皮生长因子-A(vascular endothelial growth factor-A，VEGF-A) 及α-内收蛋白(α-adducin，ADD1)存在异常表达，均与肿瘤的发生发展及侵袭转移具有密切联系[3-4]。鉴于此，本研究探讨胃癌组织中VEGF-A、ADD1与临床病理特征的相关性。报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析我院2018年11月至2019年11月96例经病理证实为胃癌患者的肿瘤组织标本，其中男59例，女37例；年龄30～78岁，平均年龄(54.45±5.61)岁；组织分化程度：中低分化74例，高分化22例；肿瘤位置：上部41例，中部22例，下部33例。

1.2 入选标准 纳入标准：经病理证实为胃癌；临床资料完整者；术前未经任何治疗；无严重精神系统疾病者。排除标准：存在严重器官功能异常者；存在其他恶性肿瘤者；存在其他消化系统疾病者；不能配合治疗或中途退出者。

1.3 方法

1.3.1 免疫组织化学检测 将收集的标本用10%中性甲醛溶液固定，乙醇梯度脱水，石蜡包埋，以4 μm厚连续切片，脱蜡用二甲苯，抗原修复用柠檬酸盐缓冲液，漂洗用磷酸缓冲液(PBS)，灭活用内源性过氧化物酶，封闭采用山羊血清；将兔抗人ADD1多克隆抗体以1∶300比例稀释及兔抗人VEGF-A多克隆抗体以1∶200比例稀释并加入，过夜4 ℃孵育，PBS漂洗；将羊抗鼠IgG以为1∶400比例稀释并加入，20 min、37 ℃孵育、PBS漂洗；显色采用购于北京中杉金桥生物有限公司的DAB显色试剂盒，反应5 min，PBS终止反应，苏木精复染，脱水，封固采用中性树脂封片剂，观察ADD1及VEGF-A表达。

1.3.2 结果判断 由2名经验丰富的病理科医师对结果进行分析，对阳性信号染色强度进行评估，并计数阳性细胞百分比，按染色强度及阳性细胞百分率计分乘积进行结果判定。染色强度为1分：黄色；2分：棕黄色；3分：棕褐色。阳性细胞百分率为0 分：≤5%；1 分：6%～25%；2 分：26%～50%；3分：51%～75%；4分：＞76%。其中，阴性：0分，弱阳性：1～4分；中度阳性：5～8分；强阳性：9～12分。高表达为中度阳性及强阳性；低表达为阴性及弱阳性。

1.4 统计学方法 采用SPSS 20.0进行统计学分析，均经正态分布检验全部数据，符合正态分布，计数资料用率表示，采用χ2检验，等级资料采用Spearman 相 关 检 验，P ＜0.05 表 示 差 异 具 有 统 计学意义。

2 结果

2.1 胃癌组织中VEGF-A、ADD1表达与临床病理特征(表1) 96例胃癌患者的肿瘤组织中VEGF-A高表达48例，占比50.00%；ADD1高表达61例，占比63.54%。VEGF-A 表达癌肿瘤位置中上部最高，其次为中部、下部，差异有统计学意义(P＜0.05)；ADD1表达在组织分化程度中中低分化最高，其次为高分化，差异有统计学意义(P＜0.05)；ADD1表达在淋巴结转移中≥16个最高，其次为7～15个、3～6个、1～2个、0个，差异有统计学意义(P＜0.05)。

表1 胃癌组织中VEGF-A、ADD1表达与临床病理特征[n(%)]

2.2 胃癌组织中VEGF-A、ADD1与临床病理特征的相关性 Spearman相关检验结果显示，VEGF-A表达与肿瘤位置呈正相关(r ＝0.287，P ＜0.05)；ADD1表达与组织分化程度呈负相关(r＝-0.514，P＜0.05)；ADD1表达与淋巴结转移呈正相关(r＝0.317，P＜0.05)。

3 讨论

胃癌是临床常见的恶性消化系统肿瘤，主要发生在胃黏膜上皮，细菌感染、饮食、生活习惯、环境等均可诱发，部分患者伴有上腹疼痛、消瘦、恶心等症状，易损伤消化系统，严重者出现转移，累及呼吸机肝肾功能，危及患者生命安全[5]。因胃癌早期患者无特异性症状，在进展期出现明显的进食后饱胀、上腹不适等上消化道症状，且依据肿瘤位置不同，其临床表现具有差异性。因此，为帮助胃癌患者提高早期确诊率，明确其发生发展机制具有积极意义。

研究发现，肿瘤发生发展及转移与血管生成密切相关，是血管生成抑制因子与刺激因子共同作用的结果[6]。其中，VEGF是一种血管生成刺激因子，属于同源二聚体糖蛋白，由单一基因编码，可增强血管通透性，促使血浆蛋白如纤维蛋白原等外渗，且对间质形成具有促进作用，进而诱导新生血管生成；同时可强效刺激血管形成，并结合内皮细胞上的FIt-1、KDR两种受体，诱导血管内皮细胞增生、迁移[7-8]。而作为VEGF重要家族成员之一的VEGF-A，属于血管生成调节因子，可通过促进血管生成，影响肿瘤的发生发展[9]。本研究结果显示，96例胃癌患者的肿瘤组织中VEGF-A高表达占比50.00%；Spearman相关检验结果显示，VEGF-A表达与肿瘤位置呈正相关(r＝0.287，P＜0.05)。提示胃癌患者肿瘤组织中VEGF-A表达与肿瘤位置明显相关，在李良等[10]研究结果中，胃癌患者组织中VEGF-A 高表达率49.66%，且VEGF-A表达水平在不同肿瘤位置有差异，与本研究结果一致。分析其原因在于，人体是通过新生血管向各个部位运输营养物质，而在胃癌肿瘤细胞发生发展过程中，需要摄取大量的营养元素，在激活VEGF-A后，会造成肿瘤的增生、迁移。ADD1属于异源二聚体，由22个残基组成，可影响多个细胞的生命活动，如细胞黏附、细胞膜离子转运、细胞增生等，并在细胞膜骨架网状结构的构建中产生重要作用，同时具有胞间信号转导功能，可维持细胞膜稳定性，而在ADD1被磷酸化后，会降低与血影蛋白、肌动蛋白件的交互，减弱细胞间黏附力，进而影响细胞生长、分化[11]。本研究结果显示，胃癌组织中ADD1 高表达占比63.54%；ADD1表达与组织分化程度呈负相关(r＝-0.514，P＜0.05)；ADD1 表达与淋巴结转移呈正相关(r＝0.317，P＜0.05)。提示胃癌患者肿瘤组织中ADD1表达与组织分化程度及淋巴结转移明显相关，在宋韬等[12]研究结果中，胃癌组织中ADD1阳性表达率为67.50%，且不同淋巴结转移情况胃癌组织中ADD1阳性表达率有差异，与本研究结果一致。分析其原因在于，细胞生命活动主要通过磷酸化进行调控，对细胞分化、增生及凋亡产生影响，同时可促进蛋白质活性改变，而ADD1被磷酸化后，其正常调控功能受影响，会造成细胞恶性增生。

综上所述，胃癌患者肿瘤组织中VEGF-A表达与肿瘤位置明显相关，ADD1表达与组织分化程度及淋巴结转移明显相关。