骨桥蛋白（OPN）与卵巢上皮性肿瘤

杨涵，黄学惠 ，邓继红，张雯，杨廷仙

（1 昆明市妇幼保健院，云南 昆明；2 昆明医科大学第一附属医院，云南 昆明）

0 引言

卵巢癌是影响女性健康的重大恶性肿瘤之一，且死亡率在女性恶性肿瘤中最高[1]。骨桥蛋白（osteopontin，OPN）是一种含精氨酸- 甘氨酸- 天冬氨酸三肽序列的分泌型磷酸化糖蛋白，广泛分布于胃肠、卵巢、肾脏等组织细胞中，其与肿瘤细胞的生长、浸润及转移有很大的关系[2,3]，国内外大量研究表明[4-7]，在病理状态时(免疫性疾病、炎症和肿瘤)OPN表达增强。本研究为探索OPN 基因与卵巢上皮性肿瘤的相关性，使用的方法为免疫组化学SABC，分别对正常的卵巢组织、良性卵巢上皮性肿瘤组织及卵巢上皮性癌组织中的OPN进行检测，分析OPN 与卵巢上皮性癌组织学类型、临床分期及年龄之间存在的相关性，现将研究情况报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

随机抽取昆明医科大学第一附属医院中留存的病理档案82 例，均为卵巢上皮组织蜡片，时间均在2010 年9 月至2011 年9 月，将82 例分为三个小组：（1）恶性组：共有24 例，均经过手术及病理确诊为原发性上皮性卵巢癌，浆液性囊腺癌最多，其次为粘液性囊腺癌，再次为宫内膜样癌；（2）良性组：共有28 例，均经过手术及病理证实，肿瘤类型为浆液性囊腺瘤及粘液性囊腺瘤各占一半；（3）正常组：共有30 例，均经过病理证实。所有病例均为首次治疗，均无其他部位肿瘤、心脏病、高血压等疾病。将所有的切片进行HE 染色，由2 名有丰富工作经验的医生将合适的切片挑选出来进行染色处理，使用的方法为免疫组化学SABC 法。

1.2 免疫组化SABC 法

OPN 基因单克隆抗体购于美国Abcam 公司（货号：ab91655），免疫组化学染色SABC 试剂盒购于英国Novocastra 公司。按照SABC 试剂盒说明书，OPN 抗体稀释1:100 进行操作，检测OPN 基因的表达情况。

1.3 评分标准

采用双盲法，2 名有经验的病理诊断医师同时进行诊断。将PBS 液作为阴性对照，并参考相关的文献[8]：OPN 基因阳性呈现出的是胞浆颜色的变化，即为棕色及黄褐色。在高倍视野下（×200），随机选取5 个不同的视野来统计切片视野中细胞总数和核/浆阳性细胞数，计算阳性率的方法为阳性细胞数与总细胞数之比，根据患者阳性细胞所占比例来进行计分统计：（1）阳性细胞率≤5%为0 分；（2）阳性细胞率6%-25% 为1 分；（3）阳性细胞率26%-50% 为2 分；（4）阳性细胞率＞51%为3 分。染色强弱程度计分：（1）阴性1 分；（2）弱染色2 分；（3）中等强度染色3 分；（4）强染色4 分。每张片着色程度得分与着色细胞百分率之积为最后的得分。通过得分来判定，当分数为0-1 分为（-），＞2 分（+）。统计分析时（-）表示阴性表达，（+）表示阳性表达。

1.4 统计学分析

采用SPSS 18.0 软件进行统计学分析，计数资料采用（%）表示，行χ2检验，P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 基本情况

本实验中正常卵巢组织的平均年龄为（40.4±9.4）岁，良性卵巢上皮性肿瘤组织的平均年龄为（40.0±11.5）岁，卵巢上皮性癌组织的平均年龄为（38.8±11.0）岁，组间差异无统计学差异（P＞0.05）；24 例卵巢上皮性癌中将其进行分期，其中有8 例患者为I 期，9 例患者为II 期，7 例患者为III 期，前两者之间的例数分布差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 基本情况

2.2 OPN 基因在不同类型上皮性卵巢肿瘤组织中的表达

OPN 在正常组、良性组和恶性组的阳性率分别为10.00%、7.14%、62.50%。见表2。

表2 OPN 基因在不同类型上皮性卵巢肿瘤组织中的表达

2.3 OPN 基因在不同类型上皮性卵巢癌（EOC）组织中的表达

OPN 在EOC 组织表达阳性率分别为：浆液性囊腺癌为70.00%，粘液性囊腺癌为62.50%，恶性宫内膜样癌为50.00%；不同病理类型EOC 的阳性率无统计学差异（P＞0.05），但均显著高于良性卵巢上皮性肿瘤组织，差异具有统计学意义（P＜0.05），见表3。

表3 OPN 在不同类型卵巢上皮性癌组织中的表达

2.4 OPN 基因表达与EOC 临床特征的关系

（1）OPN 在早期EOC（Ⅰ-Ⅱ期）和晚期（Ⅲ期）患者组织中的阳性表达率分别为47.06%，100%，组间具有统计学差异（P＜0.05），其阳性表达均随国际妇产科联盟（FIGO 2000年）临床分期增高而增强；（2）OPN 表达与EOC 患者年龄无统计学差异（P＞0.05）。

3 讨论

OPN 最初是从骨质中分离出来的，是一种重要的细胞外基质的组成成分[9]。在本次研究中得出的结果为OPN 基因在卵巢上皮性癌组、良性卵巢上皮性肿瘤组和正常卵巢组织组中的阳性表达率分别为62.50%、7.14%、10.00%，OPN 明显表达于过度细胞，其在正常的细胞中呈现出低表达或者是不呈现表达，这就表明OPN 的过度表达能够成为良恶性卵巢上皮性肿瘤鉴别重要的免疫标记物。通过进一步的分析得出：在EOC 的临床分期中OPN 基因呈现出的阳性表达率间的差异有统计学意义（P＜0.05），在临床晚期的OPN 基因有100%的呈现出高表达，只有47.06%临床早期（Ⅰ-Ⅱ期）的肿瘤呈现出过度表达，同样可说明OPN 基因表达程度的检测可能作为判断EOC 病情的指标。这一结论符合大多数研究[10,11]：OPN 在原发性及复发性的卵巢癌症患者中均有高表达。因此，OPN 有助于EOC 的诊断以及病情检测，但是在不同病理类型上皮性卵巢癌组间和不同年龄患者中OPN 表达没有统计学差异（P＞0.05），此结果与Bhattacharya R 等研究存在差异[12]，这是否与样本例数不够有关，尚需进一步研究证实。

综上所述，OPN 基因对于良恶性卵巢上皮性肿瘤的鉴别有一定的临床意义，可作为鉴别的重要免疫标记物；其呈现出的过表达与卵巢癌国际妇产科联盟（FIGO 2000 年）临床分期有关，随着临床分期的不断增高，OPN 表达阳性率也越来越高，在一定程度上反映了EOC 的恶性程度。