Septin 9 在胃癌组织中的表达及其临床意义

杨美玲，章礼久

(安徽医科大学第二附属医院消化内科，安徽 合肥)

0 引言

胃癌是常见的消化系统恶性肿瘤，近年来发病率在恶性肿瘤中位居前列。因其早期症状不典型、临床缺乏其特异性诊断标记物，故胃癌的病死率仍居高不下[1]。基于胃癌发生发展过程中存在多基因调控的特点，本文旨在探索胃癌发生发展过程中的分子机制，寻找胃癌新型的诊断标志物及高效特异的治疗靶点[2]。SEPT 基因广泛存在于除植物外真核生物中，具有GTP 酶活性，其编码的蛋白质在动物体内具有较大的功能分化[3]。SEPT 蛋白广泛存在于人体中，在细胞分裂、细胞物质运输、细胞周期调控、T 细胞等发育方面均发挥着重要作用[4-11]。研究表明，SEPT9 不仅与细胞周期密切相关，与肿瘤的发生发展、感染性疾病、神经系统疾病联系紧密。目前有研究指出SEPT9在结直肠癌、卵巢癌、肺癌等肿瘤组织中高表达，近年来有研究指出[12-13]，SEPT9 可能参与胃癌的发生发展过程[14-15]。HIF-1 是一种常见的核转录因子，HIF-1α在调节细胞低氧反应中至关重要，其通过调控多种基因转录，从而调节肿瘤细胞的能量代谢及新生血管生成[16-17]。VEGF 是目前已知的强效血管生成因子，可促进内皮细胞有丝分裂，促进细胞增殖，也可通过增加血管通透性、内皮细胞迁移，促进新生血管生成。本文旨在研究SEPT9 蛋白在胃癌中的表达情况、探索其可能的分子机制，为临床胃癌提供新的诊断及治疗的分子靶点[18-19]。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选取安医大二附院2015 年至2019 年于普外科行手术治疗患者术后胃癌组织82 例及其对应的癌旁组织。病理诊断由三名医师完成。根据AJCC 第7版胃癌 T NM分期标准：I、II 期标本：44 例，Ⅲ期、Ⅳ期标本：38 例。肿瘤大小：＜5cm 者：42 例，≥ 5cm 者 40 例；高中分化者：46 例，低分化者：36 例，有淋巴结转移者：39例，无淋巴结转移者：43 例。所有纳入患者的病历资料齐全真实，且取材时均于未行任何放化疗。

1.2 方法

1）免疫组化染色：将切片经脱蜡、水化、抗原修复、过氧化氢孵育及脱脂牛奶封闭后，分别加入SEPTIN9抗体、HIF-1α 抗体、VEGF 抗体，湿盒孵育，4℃过夜。以PBS 代替一抗作阴性对照，二抗采用HRP 标记羊抗兔多聚体，经DAB 显色、苏木素复染、脱水、透明、封固。2）结果判定：随机选取5 个高倍视野，分别在低倍视野 (×40) 观察，在高倍视野 (×200) 确认，由 3 位经验丰富的病理医师在未知组织病理特征的情况下进行双盲阅片，判定结果。根据阳性细胞染色强度确定染色结果：细胞膜和(或)细胞质染淡棕色为弱阳性(+)，棕色者为阳性(++)，深棕色为强阳性(+++)。染色阴性或弱阳性为低表达，染色阳性或强阳性为高表达。

1.3 统计学处理

运用统计软件 SPSS 20.0 对数据进行处理。SEPTIN 9、HIF-1α、VEGF 在胃癌及癌旁组织中的阳性表达率和Septin 9 在不同分化程度胃癌组织中高表达率采用χ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 研究结果

2.1 SEPTIN 9 在胃癌及癌旁组织中的表达情况

表1 SEPTIN 9 在胃癌组织及癌旁组织中的表达情况

在82 例胃癌组织中，阳性表达67 例(81.7%)，阴性表达15 例(18.3%)。82 例癌旁组织中，阳性表达28例(34.1%)，其余54 例(65.9%)为阴性表达。SEPTIN9在胃癌组织中的表达显著高于癌旁组织。

2.2 SEPTIN 9 在胃癌组织中的表达及其与临床病理参数间的关系

表2 SEPTIN 9 在胃癌组织中的表达及其与临床病理参数间的关系

表 2：肿瘤直径 ＞5cm 胃癌组织中，SEPTIN9 高表达 30 例 (75.00%); ≤ 5cm 胃癌组织中，SEPTIN9 高表达6 例(14.3%)。SEPTIN9 在肿瘤直径＞5cm 胃癌组织中的高表达率显著高于肿瘤直径≤5cm 胃癌组织。同样，在低分化胃癌组织中SEPTIN9 高表达率显著高于中高分化组（表达率分别为88.9%、39.1%），在有淋巴结转移胃癌组织中SEPTIN9 高表达率显著高于无淋巴结转移胃癌组织（表达率分别为：82.00%、50.00%），在TNM 分期为III、IV 期胃癌组织中SEPTIN9 高表达率显著高于TNM 分期为I、II 期胃癌组织（表达率为89.5%、18.2%），差异均具有统计学意义。（P＜0.05）

2.3 胃癌组织中HIF-1α、VEGF 的表达情况

2.3.1 胃癌组织中HIF-1α 的表达情况

见表三。

表3 胃癌组织中HIF-1α 的表达情况

在82 例胃癌组织中，阳性表达52 例(63.4%)，阴性表达30 例(36.6%)。82 例癌旁组织中，阳性表达26例 (31.7%)，其余 56 例 (68.3%) 为阴性表达。HIF-1α在胃癌组织中的表达显著高于癌旁组织。

2.3.2 胃癌组织中VEGF 的表达情况

表4 胃癌组织中VEGF 的表达情况

在82 例胃癌组织中，阳性表达48 例(58.5%)，阴性表达34 例(41.5%)。82 例癌旁组织中，阳性表达15例 (18。3%)，其余 67 例 (81.7%) 为阴性表达。VEGF在胃癌组织中的表达显著高于癌旁组织。

3 讨论

目前全世界范围内, 肿瘤已经成为致死的主要原因，胃癌是常见的消化系统肿瘤之一，其病死率居高不下。迄今为止，胃癌尚无特异的肿瘤标志物，故寻找新型的分子标记物对于胃癌的诊断及治疗有着重要意义。SEPTIN 基因家族成员庞大，广泛存在于真核生物中，其编码的蛋白质功能复杂，参与细胞分裂、囊泡运输、细胞极化等众多过程。[20]研究表明SEPTIN家族作为癌症的重要相关因子，在人类肿瘤性疾病的发生发展中发挥重要作用。[20]SEPTIN 9 定位于染色17q25.3，研究发现，Septin9 与卵巢癌、前列腺癌、胃肠道肿瘤、肾细胞癌的发生发展密切相关，[21]血清Septin 9 基因甲基化水平对于结直肠癌的诊断及预后判断有着重要参考价值。[22]也有报道指出Septin9 可能为潜在的原癌基因，通过调控其下游的信号转导来促进肿瘤的发生发展，可能为监测癌症发生的生物学标记物，并且为癌症的治疗提供潜在的靶点。

本研究发现，SEPTIN 9 在胃癌组织中的表达显著高于对应的癌旁组织，且表达水平与胃癌肿瘤大小、分化程度、有无淋巴结转移、临床分期存在显著相关性，表明SEPTIN 9 与胃癌增殖、侵袭、转移联系紧密。学者发现，[22-24]SEPT9 是HIF-1α 的重要保护因子，当SEPT9 蛋白表达升高，可以通过抑制缺氧诱导因子（HIF-1α) 的泛素化降解途径，促进 HIF-1α 过表达，从而促进细胞增殖及新生血管生成。换言之，SEPT9可通过激活HIF-1α-VEGF 通路，来调节肿瘤细胞在微环境中的增殖。本研究可证实，HIF-1α、VEGF 在胃癌组织中的表达显著高于癌旁组织，表明SEPTIN 9可能通过上述机制促进胃癌的发生发展。

综上所述，SEPT9、HIF-1α、VEGF 在胃癌组织中的表达显著升高，且SEPT9 表达与患者临床病理学特征存在相关性，其可能通过SEPT9-HIF-1α-VEGF 通路影响胃癌细胞的生物学行为，在胃癌的发生发展中起重要作用，可用于辅助胃癌的诊断和病情评估，相关机制需进一步研究证实。