miR-499a-5p通过靶向APC减轻氧化应激对心肌细胞的损伤

武国利 张宁 田蜜 田征 许金鹏 马竞 杨泽峰

【摘  要】目的：探讨miR-499a-5p通过靶向APC减轻氧化应激对心肌细胞的损伤。方法：将心肌细胞H9C2作为对照组，将H2O2用400μmol/L处理后建立氧化应激损伤模型作为模型组，对比两组的组的细胞存活率、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、LDH活性、miR-499a-5p以及APC。结果：模型组LDH、MDA、APC明显高于对照组，而SOD、miR-499a-5p明显低于对照组（P<0.05）。结论：miR-499a-5p可调控H2O2诱导的心肌细胞的增殖、凋亡和氧化应激，其能靶向抑制APC，临床可将抑制氧化应激反应作为保护心肌细胞损伤的治疗新靶点。

【关键词】氧化应激;心肌细胞损伤;miR-499a-5p;APC

國内有研究miR-449a在不稳定型心绞痛、急性冠脉综合征、急性心肌梗死患者的血样中高表达。也有研究中报道，miR-499a-5p在缺氧/复氧模型心肌细胞中表达水平显著降低，过表达miR-499a-5p后细胞的凋亡率和乳酸盐脱氢酶（LDH）活性均发生下调，其作用机制与靶向分化簇38（CD38）具有相关性，揭示miR-499a-5p可通过靶向CD38减轻缺氧/复氧引起的心肌细胞损伤[1]。还有报道，四甲基吡嗪（TMP）可以部分缓解缺氧引起的H9c2细胞中miR-449a的上调，并且miR-449a的过表达减弱了TMP对缺氧处理的H9c2细胞的治疗作用，另外沉默信息调节因子1（Sirt1）是miR-449a的靶基因，揭示了TMP通过下调miR-499a，上调Sirt1，然后激活PI3K/AKT途径部分缓解了缺氧引起的心肌细胞H9c2活力降低和凋亡促进。这暗示了miR-499a在缺氧诱导的H9c2细胞中表达异常上调[2]。本研究进一步分析miR-499a-5p通过靶向APC减轻氧化应激对心肌细胞的损伤，现具体汇报如下。

1 材料与方法

1.1材料：大鼠心肌细胞H9c2购自深圳市百恩维生物科技有限公司;DMEM培养基购自Hyclone公司;反转录试剂盒购自北京明阳科华生物科技有限公司;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）试剂盒购自日本TaKaRa公司;丙二醛（MDA）检测试剂盒、超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒检测试剂盒均购自上海碧云天研究所。

1.2方法：①建立心肌细胞H9c2损伤模型。H9c2细胞培养时使用含DMEM培养基（10 %胎牛血清）进行常规的培养、传代。将正常培养的H9c2细胞标记为对照组，将其用H2O2（100、200、400、800 μmol/L）处理4 h，检测细胞的存活率，筛选400μmol/L的浓度建立氧化应激损伤模型，标记为模型组。②细胞存活率。采用CCK-8法检测，收集细胞，取5×105个/mL的细胞200μL，加入96孔板，每孔再加入CCK-8反应液20μL，在490 nm波长下检测细胞的吸光值（A490）。存活率（%）= A490实验组/ A490对照组×100%。③miR-499a-5p、APC的表达检测。采用qRT-PCR检测。④SOD、LDH、MDA检测。采用ELISA法检测，按试剂盒说明书要求进行检测。

1.3统计学方法 应用 SPSS20.0 统计学软件，计量资料用均数±标准差（）表示，采用t检验，P<0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1两组各项指标比较，见表1。

3 讨论

氧化应激反应是引发心肌细胞凋亡的重要因素之一，miRNA在心血管疾病中的致病作用已被大量研究证实，但miR-499a-5p在心肌细胞损伤中的功能尚未完全清楚。miR-499-5p在心室肌中高度表达，在缺氧或氧化应激条件下，miR-499-5p表达明显降低[3]。APC属于一种生理抗凝剂，能够发挥细胞调控作用，对心肌细胞的炎症和凋亡有抑制作用。miR-499a-5p在H2O2诱导的心肌细胞损伤中明显降低，并能升高APC水平，达到抑制氧化应激反应，保护受损心肌细胞的作用[4]。

综上所述，miR-499a-5p通过靶向APC减轻氧化应激对心肌细胞的损伤，为临床治疗提供了新的靶点。

参考文献

[1] 吴丽梦，李恩，周小翠等.miR- 499-5p干预对心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡的影响[J].郑州大学学报（医学版），2018，53（5）：614-618.

[2] 范宗静，吴旸，唐杰等.缺血再灌注损伤人心脏微血管内皮细胞凋亡基因Bcl-2、Bax的表达及黄芪多糖干预研究[J].中华中医药杂志，2017，32（12）：5603-5606.

[3] 建强，邢金平，来春林等.微RNA-98 在姜黄素保护缺氧-复氧心肌细胞损伤中的作用及其机制[J].中华生物医学工程杂志，2019，25（2）：136-141.

[4] 崔瑞新，吕风华，岳莹等.microRNA-499靶控的PI3K/Akt通路在大鼠缺血-再灌注心肌损伤中的作用[J].郑州大学学报（医学版），2016，51（6）：740.