两代抗-HCV酶联免疫吸附试验试剂性能评估

陈 莎，高 洁

（陕西友谊医学检验实验室，陕西 西安 710065）

目前，检测抗-HCV（丙型肝炎病毒抗体）的主要方法是酶联免疫吸附试验（ELISA）[1]，试剂主要为间接酶联免疫法第三代诊断试剂和双抗原夹心法第四代诊断试剂。间接酶联免疫法第三代诊断试剂检测结果存在一定的假阳性[2]，而且检测抗-HCV的窗口期较长；双抗原夹心法诊断试剂可有效弥补间接酶联免疫法第三代诊断试剂存在的部分缺陷[3]。基于此，本实验室通过检测1 875份血浆标本，对第三代、第四代抗-HCV酶联免疫吸附试验试剂的性能进行评估。

1 材料与方法

1.1 标本

收集2018年6月—12月在本检验所采用间接ELISA法诊断试剂和双抗原夹心ELISA法诊断试剂进行抗-HCV检测的血浆样本1 875份，离心取血清，-70℃冻存。

1.2 试剂与仪器

1.2.1 试剂 两代抗-HCV ELISA诊断试剂分别用A、B表示，A试剂反应原理为间接法，B试剂反应原理为双抗原夹心法。质控血清由陕西省临床检验中心提供，确证试剂为Chiron RIBA HCV3.0 SIA（美国CHIRON公司），所有试剂均在有效期内，其检测方法、结果判定均严格按照说明书进行。

1.2.2 仪器 全自动酶免分析仪为深圳爱康公司生产，酶标仪、洗板机为郑州安图绿科生物工程有限公司生产，全自动加样仪为瑞士哈美顿公司生产，所有仪器设备定期进行维护、校验。

1.3 方法

对1 875份血浆标本平行采用间接法和双抗原夹心法两代抗-HCV ELISA试剂进行检测，初次检测结果为反应性时，使用原试剂进行双孔复查。采用Chiron RIBA确认试剂对两种试剂中任意一种检测为阳性或可疑的标本进行检测，把RIBA试验结果为阳性的标本再用两代ELISA试剂检测，对得到的S/CO进行比较。

所有标本均按说明书进行两种试剂的检测，若检测呈阴性反应，即判断为阴性。若检测呈初次反应性，需用原有试剂对相应标本进行双孔复试，双孔均呈无反应性则判为阴性；双孔均呈反应性，或有1孔呈反应性，则判为阳性。对两种方法任一试剂检测为反应性的标本通过RIBA做进一步确证，RIBA确证试验按照试剂说明书操作和判读。若两种方法均为阴性或RIBA确证试验结果为阴性判为真阴性。

标本S/CO值≥1判断为阳性，0.7≤S/CO值＜1判断为灰区，阳性和灰区标本结果均判定为不合格。

1.4 统计学分析

使用SPSS22.0统计软件进行数据处理，计数资料采用χ2检验，计量资料采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

间接法和双抗原夹心法检测为阳性或弱阳性的65份标本中，RIBA确证试验结果30例为阳性，32例为阴性，3例为可疑；间接法检测为阳性，双抗原夹心法检测为阴性的33例样本中，31例确证为阴性，2例确证为可疑；间接法检测为阴性，双抗原夹心法检测为阳性的2例样本中，1例确证为阴性，1例确证为可疑。目前公认的检测抗-HCV的准确方法为RIBA，以此为标准，本检验所间接法和双抗原夹心法的特异性分别统计为96.64%（1 812/1 875）和 98.29%（1 843/1 875）。实验结果证实了双抗原夹心法与RIBA的符合率为93.75%，间接法与RIBA的符合率为47.62%，抗-HCV双抗原夹心法的特异性比间接法提高了1.65个百分点，所产生的灰区和假阳性样本大幅度减少。另外，间接法只检测IgG，双抗原夹心法增加了IgM的检测，因此窗口期缩短，提高了抗-HCV的检出率。

2.1 对比ELISA间接法和双抗原夹心法诊断试剂检测抗-HCV情况

从间接法和双抗原夹心法诊断试剂对1 875份标本检测情况的比较来看，双抗原夹心法诊断试剂的阳性检出率为1.71%（32/1 875），明显低于间接法诊断试剂的3.36%（63/1 875），差异有统计学意义（P=0.03），见表1。

表1 ELISA间接法与双抗原夹心法诊断试剂检测抗-HCV结果对比（例）

2.2 RIBA确证ELISA间接法和双抗原夹心法检出的阳性标本情况

RIBA检测结果阳性的30例样本，两代酶联免疫试剂均能检出，但是ELISA间接法试剂假阳性率为96.88%，远高于ELISA双抗原夹心法试剂的3.13%（P＜0.001），见表2。

表2 65份间接和双抗原夹心ELISA法诊断试剂抗-HCV阳性和弱阳性样本确证结果

2.3 比较ELISA间接法和双抗原夹心法试剂检测出阳性标本的准确度

间接ELISA法试剂检出的63份阳性样本中，有30份确证为真阳性，占阳性样本检出量的47.62%；双抗原夹心ELISA法试剂检出的32份阳性样本中，有30份确证为真阳性，占阳性样本检出量的93.75%。双抗原夹心ELISA法试剂的准确度远远高于间接ELISA法试剂，差异有统计学意义（P＜0.001），见表3。

表3 间接和双抗原夹心ELISA法诊断试剂检测出阳性标本的准确度比较

2.4 对比ELISA间接法和双抗原夹心法试剂的灵敏度

利用质控血清比较两种试剂，ELISA间接法试剂检测到4倍稀释，S/CO值为1.46，双抗原夹心法试剂检测到64倍稀释，S/CO值为1.08，进一步比较RIBA确证的30例阳性样本两代试剂检测的S/CO值，双抗原夹心法诊断试剂检测的数据值明显高于间接法试剂，表现出更高的灵敏度。

3 讨论

3.1 评估抗-HCV ELISA检测试剂性能的意义

由于目前没有HCV疫苗，筛查及早期诊断成为控制丙型肝炎发生和传播的重要手段。基于丙肝抗体在血液中能长期稳定存在的特性，采用ELISA法对抗-HCV进行检测成为主要筛查手段。双抗原夹心法试剂B是一种检测抗-HCV的ELISA试剂，本次研究设计了对相关标本的平行检测，旨在通过与间接法ELISA试剂A检测结果的比较和分析，对目前市场上第三、第四代抗-HCV ELISA检测试剂的性能进行综合评估。

当前，影响抗-HCV试剂质量的主要因素是其包被的丙型肝炎病毒抗原[4]。间接法ELISA检测试剂（第三代），酶标二抗为抗人IgG，由于血清中高浓度非特异性IgG的干扰，会影响检测的特异性，从而导致假阳性标本增多，增加复检率；为减少非特异性干扰，待测标本经稀释后，又会影响检测敏感性。双抗原夹心法ELISA检测试剂（第四代），除包被丙肝抗原外，还加入生物素化丙肝抗原，形成包被抗原-抗体-抗人IgG抗体复合物，使特异性增强。同时该试剂借助生物素-亲和素系统灵敏度提高，并且双抗原夹心法加样量增加，减少了因加样引起的实验误差，也使得检测的灵敏度大大提高[5-7]。

3.2 双抗原夹心法ELISA检测试剂准确度、灵敏度均高于间接法

从本次研究数据来看，间接法ELISA检测试剂阳性检出率为3.36%，假阳性率达96.88%，准确率为47.62%；而双抗原夹心法ELISA检测试剂的阳性率检出率为1.71%，假阳性率仅为3.13%，准确度为93.75%。利用质控血清比较发现，双抗原夹心法ELISA试剂的灵敏度高于间接法ELISA试剂，符合研究[5-7]的结论，也与赵龙友等[8]的研究结果——双抗原夹心法ELISA试剂可以有效提高抗-HCV阳性标本的检出率，并降低假阳性率一致。

3.3 双抗原夹心法ELISA试剂诊断性能优于间接法ELISA试剂

双抗原夹心法ELISA试剂检测的是IgM、IgG等总抗体，诊断性能明显优于间接法ELISA试剂，更适用于早期筛查HCV抗体，值得推荐使用。