GeneXpert MTB/RIF在结核病诊断及利福平耐药检测中的应用分析

关丽迎

广东省江门市结核病防治所检验科，广东江门 529000

临床中对结核病较难控制的一个重点就是确诊耗时十分长、且敏感度不理想[1]。而在针对出现耐药性的结核病方面，特别是耐多药结核的临床诊断方面存在一定的滞后现象，导致出现治疗延后及疾病传播等现象。所以寻找一种快速诊断结核病及耐多药情况的检测方法对提高临床对结核病的诊断及治疗水平都具有十分积极的意义[2]。Gene Xpert MTB/RIF 系统（以下简称MTB/RIF 系统）首次在2010 年被WHO 批准在临床对结核病的诊断当中应用，因其诸多优点，如灵敏度高、特异性高及操作更加简便等逐渐在临床中得到关注及应用[3]。选取2017 年9 月～2019 年3 月我院收治的肺结核患者123 例，采集所有患者的痰标本，分别进行MTB/RIF 系统检测、结核分枝杆菌分离培养及涂片抗酸染色镜检（以下简称涂片镜检），分析如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017 年9 月～2019 年3 月我院收治的肺结核患者123 例，其中，男75 例，女48 例，年龄18 ～70 岁，平均（43.6±2.2）岁。依据肺结核的不同临床诊断标准，其中，确诊肺结核患者为53 例，临床诊断肺结核患者为70 例。

临床诊断肺结核患者的诊断标准[4]：经胸部影像学检查，符合临床中肺结核的影像学表现，同时符合下述所有指标当中的任一项：（1）存在可疑的肺结核症状或（和）全身性症状；（2）经结核菌素试验结果提示呈强阳性，硬结直径≥20mm，或者局部出现淋巴管炎、坏死及水疱；（3）血清抗结核抗体检测结果呈阳性；（4）对肺外组织进行病理检查，证实存在结核病变；（5）经诊断性治疗或者随访观察，排除其他的相关肺部疾病者。

临床确诊肺结核患者的诊断标准[5]：符合下述所有指标当中的任一项：（1）患者的2 份痰样本进行涂片镜检结果全部呈阳性；（2）患者的1 份痰样本进行涂片镜检呈阳性，且对胸部进行影像学检查提示，符合临床中肺结核的相关影像学表现；（3）患者的1 份痰样本涂片镜检结果呈阳性，且1 份痰样本的结核分枝杆菌培养呈阳性；（4）患者的1 份痰样本经结核分枝杆菌培养结果呈阳性，且经胸部影像学检查，符合临床中肺结核的相关影像学表现。

1.2 方法

1.2.1 涂片镜检 采集所有患者的痰样本，进行涂片、染色及抗酸杆菌的镜检。阴性标准：镜检下未见抗酸杆菌；阳性标准：镜检下可见抗酸杆菌。

1.2.2 结核分枝杆菌分离培养 留取所有患者的1mL 痰样本，依据试剂说明书来进行分离培养；通过抗酸染色证实是抗酸菌，再通过结核分枝杆菌的抗原检测试剂盒进行鉴定。

1.2.3 药敏试验 培养结果呈阳性的结核分枝杆菌采用比例法做药敏试验。

1.2.4 MTB/RIF 系统 留取所有患者的1mL 痰样本，放置在无菌试管当中，在试管当中加入配套的消化液约2mL，涡旋振荡20s，室温下静置15min；再将2mL 的处理液加入到样本反应盒当中，盖紧盖之后使用仪器进行测试。

1.3 观察指标

1.3.1 观察比较MTB/RIF 系统与抗酸杆菌分离培养跟涂片镜检间的检测阳性率差异。

1.3.2 观察比较在利福平耐药检测中MTB/RIF 系统与比例法药敏试验结果的差异。

1.4 统计学方法

使用SPSS22.0 进行分析，所有数据当中，计数资料以[n（%）]表示，组间比较采用χ2检验；计量资料以（）表示，组间比较采用t 检验；P ＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MTB/RIF系统与抗酸杆菌分离培养跟涂片镜检间的检测阳性率比较

在53 例确诊肺结核组患者的痰样本当中，MTB/RIF 系统跟抗酸杆菌分离培养都呈阳性，但是涂片镜检仅有35 例呈阳性；在70 例临床诊断肺结核患者的痰样本当中， MTB/RIF 系统检测呈阳性者8 例，但是抗酸杆菌分离培养跟涂片镜检结果均呈阴性。在所有123 例患者当中，MTB/RIF 系统的检测阳性率为49.6%，分离培养的阳性率为43.1%，涂片镜检的检测阳性率为28.5%；在确诊肺结核组患者的检测当中，MTB/RIF 系统的检测阳性率为100.0%、分离培养的检测阳性率为100.0%、涂片镜检的检测阳性率为66.0%；在临床诊断肺结核组当中，MTB/RIF 系统的检测阳性率为11.4%、分离培养的检测阳性率为0、涂片镜检的检测阳性率为0。MTB/RIF 系统在结核分枝杆菌的检测阳性率显著高于涂片镜检，差异有统计学意义（χ2=6.492，P=0.019），略高于抗酸杆菌分离培养，但差异无统计学意义（χ2=1.087，P=0.274），见表1。

表1 MTB/RIF系统与抗酸杆菌分离培养跟涂片镜检间的检测阳性率比较[n（%）]

2.2 利福平耐药检测中MTB/RIF系统与比例法药敏试验结果比较

MTB/RIF 系统检测结果出现利福平耐药的患者13 例，比例法药敏试验结果出现利福平耐药的患者为14 例，两者差异无统计学意义（χ2=1.198，P ＞0.05），见表2。

表2 在利福平耐药检测中MTB/RIF系统与比例法药敏试验比较

3 讨论

目前临床中在结核病的临床诊断方面，尤其是在涂阳肺结核及结核病耐药方面的临床诊断主要是通过结核病的相关实验室检测结果来进行诊断的[6]。目前，临床实验室当中常用的检测方法主要包括样本培养及涂片镜检；但是在肺结核患者当中，痰涂片检测的阳性率通常在50%左右，分离样本培养的阳性检出率在60%左右[7]。而在临床中所有活动性肺结核患者当中，涂阴肺结核患者约占到75%左右；所以，会在约67%的肺结核患者痰样本当中不能检测出结核分枝杆菌，以致出现临床误诊及误治[8]。

MTB/RIF 系统是临床当中全新的一种对肺结核早期发现、快速诊断的检测方式，在临床对结核病进行诊断及治疗过程当中具有里程碑的意义[9]。研究指出，通过MTB/RIF 系统能够代替临床中的抗酸涂片镜检，能够使得结核病的检出率显著提高[10]。同时还有研究指出，通过MTB/RIF 系统来替代传统药敏能够耐多药的结核检出率提高3 倍[11]。本研究结果提示，MTB/RIF 系统在结核分枝杆菌的检测阳性率显著高于涂片镜检，差异有统计学意义（P ＜0.05），略高于结核分枝杆菌分离培养，但差异无统计学意义（P ＞0.05）。

针对结核分枝杆菌的菌株，rpoB 基因在鉴定利福平耐药检测当中具有重要的意义[12]。而MTB/RIF 系统就是通过对样本当中的rpoB 基因片段突变区进行检测，从而简便、快速地获取到药物的耐药情况[13]。且其检测所需时间较短，能够在2h 之内快速得出检测结果[14]。而传统的培养法药敏试验，不仅需要2 周左右的培养时间，还需要28d左右的培养药敏[15]。由此可见，在检测时效方面MTB/RIF 优势显著。本研究结果提示，MTB/RIF 系统检测结果出现利福平耐药的患者13 例，比例法药敏试验结果出现利福平耐药的患者为14 例，两者差异无统计学意义（P ＞0.05）。本研究中还有部分样本在MTB/RIF 系统中呈阳性，但是不能培养菌株进行药敏试验。这一现象提示，MTB/RIF 系统在检测利福平耐药性方面不仅检测时间较短，同时还能够直接使用临床标本进行检测，无需前期培养，优势明显[16]。

综上所述，使用GeneXpertMTB/RIF 系统能够更加快速、简便的对结核病进行临床诊断，同时有效的检测利福平的耐药情况，值得应用。