超高效液相色谱-串联质谱法测定鱼肉组织中的恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星残留量

罗贤静丽

摘 要：本文建立了鱼肉中恩诺沙星（ENRO）、环丙沙星（CIP）和沙拉沙星（SARA）残留量的UPLC-MS/MS液相串联质谱测定方法。结果表明：各组分在1～500 ng·mL-1范围内具有良好的线性，回收率为83.7%～103.1%，相对标准偏差（n=6）为1.7%～5.4%，检出限（LOD）为0.08～0.17 ?g·kg-1，定量限（LOQ）为0.34～0.56 ?g·kg-1。

关键词：鱼;恩诺沙星;环丙沙星;沙拉沙星;超高效液相色谱-串联质谱

Abstract：A method was developed for the determination of enrofloxacin， ciprofloxacin and sarafloxacin in fish tissue by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry （UPLC-MS/MS）. The results showed that there existed good linear relationships for the components in the range of 1～500 ng·mL-1， the recoveries were in the range of 83.7%～103.1% with the relative standard deviations of 1.7%～5.4%， the detection limits of determination in the range of 0.08～0.17 ?g·kg-1， the quantitation limits were 0.34 ～0.56 ?g·kg-1.

Key words：Fish; Enrofloxacin; Ciprofloxacin; Sarafloxacin; UPLC-MS/MS

恩诺沙星（Enrofloxacin，ENRO）、环丙沙星（Ciprofloxacin，CIP）和沙拉沙星（Sarafloxacin，SARA）均属于喹诺酮类药物（Quinolones，QNs）[1]。

喹诺酮是一类合成抗生素类药物[2]，具广谱抗菌活性，杀菌效果好，广泛用于水产养殖中疾病的治疗[3]。喹诺酮类药物可在水产动物体内残留，通过食物链进入人体，对人体产生直接危害。近年来，部分水产品养殖户为提高产量，常在养殖过程中、滥用此类药物，以致水产品安全事件频发。为确保消费者安全，我国及欧盟等组织均对水产品中喹诺酮类药物的使用情况及残留限量作出严格规定[4]。我国国家标准GB 31650-2019中规定鱼组织（皮+肉）中恩诺沙星（恩诺沙星与环丙沙星之和）的最大残留限量为100 ?g·kg-1，沙拉沙星的最大殘留限量为30 ?g·kg-1。欧盟（EC）在1999年3月公布的508/1999号法规规定的最高残留限量为恩诺沙星和环丙沙星总限量为30 ?g·kg-1[5]。本文选择鱼组织为研究对象，建立了3种喹诺酮类药物残留的提取和检测方法。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

试剂。乙腈为LC-MS级别、甲酸、正己烷为HPLC级别;酸化乙腈：99 mL乙腈中加入1 mL甲酸，混匀;5%乙腈甲酸水溶液：95 mL水中加入5 mL乙腈和100 ?L甲酸，混匀;恩诺沙星（ENRO）和环丙沙星（CIP）购自安谱公司，沙拉沙星（SARA）购自Dr公司，纯度均大于94.0%。

仪器。XevoTMTQ-S液相色谱串联四级杆质谱联用仪（Waters公司）;电子天平（万分之一，Mettler-Toledo）。

1.2 样品前处理

称取鱼肉试样（皮+肉）2 g（精确至0.001 g）于50 mL离心管中，加入10 mL酸化乙腈，涡旋1 min，超声提取10 min，5 000 r·min-1离心5 min，将全部上清液转入另一50 mL离心管中，剩余残渣用10 mL酸化乙腈再重复提取1次，合并全部上清液，加入10 mL乙腈饱和正己烷涡旋1 min，5 000 r·min-1离心5 min，去除上层正己烷层，再加入10 mL乙腈饱和正己烷，重复除脂1次，转移下层乙腈层于50 mL离心管中，40 ℃水浴条件下氮吹至净干，用1 mL5%乙腈甲酸水溶液定容，涡旋混匀，经0.22 μm滤膜过滤，供液相色谱-串联质谱测定。

1.3 实验条件

色谱柱：ACQUITY UPLC? BEH C18（1.7 μm，2.1 mm×100 mm）;流动相：0.1%甲酸水+乙腈，梯度洗脱;电喷雾正离子扫描模式，多反应监测（MRM），离子源温度150 ℃，母离子，子离子的锥孔电压和碰撞能量见表1。

2 结果与分析

2.1 线性范围和定量限

本次实验标准曲线制作了9个点，分别为1、2、5、10、20、50、100、200 ng·mL-1和500 ng·mL-1，呈良好线性关系，以20次方法测定低限加上样品测定结果的标准偏差的3倍作为方法检出限，10倍作为方法定量限，测定结果见表2。

2.2 加标回收率实验

分别称取鱼肉试样2 g（精确至0.001 g）进行3水平浓度添加实验，根据GB/T 27404-2008的要求，3水平添加浓度分别为0.5、30、100 ?g·kg-1，按照1.2的方法进行样品前处理，上机测定，计算加标回收率和精密度，计算结果见表3。

3 结论

本研究以超高效液相色谱-四级杆串联质谱联用法建立了鱼肉中3种喹诺酮类药物残留的检测方法。分析结果显示在1～500 ng·mL-1范围内具有良好的线性，回收率为83.7%～103.1%，相对标准偏差（RSD）为1.7%～5.4%。本方法准确度高，检出限低，适用于鱼肉中恩诺沙星（ENRO）、环丙沙星（CIP）和沙拉沙星（SARA）等喹诺酮类药物残留检测。

参考文献：

[1]刘丽贞，周婉苹，薛 冰.高效液相色谱-荧光检测法同时测定鱼肉组织中的诺氟沙星、环丙沙星和恩诺沙星残留[J].中国卫生检验杂志，2008（7）：1296-1297，1307.

[2]李雅丽，胥传来.喹诺酮类药物残留检测方法[J].食品科学，2007（11）：628-633.

[3]张 乐.水产品中环丙沙星残留量检测方法的比较优化[J].杭州农业科技，2006（6）：17-18.

[4]梁晶晶，徐潇颖，丁宇琦，等.高效液相色谱-串联质谱法快速测定水产品中19种喹诺酮类药物残留[J].分析测试学报，2018，37（2）：224-230.

[5]施 冰，张志刚，吴抒怀，等.LC/MS/MS测定水产品中7种氟喹诺酮类抗菌素残留量的方法研究[J].检验检疫科学，2004（S1）：25-30.