蛹虫草中虫草素测定的前处理条件优化

高冬

摘 要：采用正交试验设计研究提取温度、提取次数、提取时间以及料水比对蛹虫草中虫草素含量测定的影响，得出较优的前处理条件。结果表明，最佳前处理条件为：提取温度100 ℃，提取次数2次，料水比为1∶100，提取时间120 min。

关键词：蛹虫草;虫草素;高效液相色谱

Abstract：The orthogonal test design was used to study the influence of extraction temperature， extraction times， extraction time and the ratio of material to water on the determination of cordycepin content in Cordyceps militaris. The results showed that the best pretreatment conditions were： extraction temperature 100 ℃， extraction times 2 times， material water ratio 1∶100， extraction time 120 minutes.

Key words：Cordyceps Militaris; Cordycepin; High performance liquid chromatography

蛹虫草，又称北虫草，是一种子囊菌，通过异宗配合进行有性生殖，是一种具有有效抗癌活性的天然产物[1]，并于2009年通过国家卫生和计划生育委员会批准为新资源食品[2]。随着人们对蛹虫草了解的不断深入，对人工蛹虫草栽培技术的不断优化，蛹虫草的营养价值得到了越来越多人的认可和青睐。虫草素是具有抗菌活性的一种核苷类物质，也是蛹虫草价值的重要量化指标之一，因此便捷、准确的前处理条件对检测虫草素具有重要意义。目前已有不少学者做过相关试验，因原料或设备等原因没有进行整体比较，本文在前期实验基础上，采用正交试验，综合分析温度、提取次数、时间和料水比的最佳条件。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 菌株

蛹虫草来自沈阳师范大学特种菌业研究。

1.1.2 标准品

虫草素标准品购自美国sigma公司（产品纯度大于99%）。

1.2 仪器

高效液相色谱仪（配VWD检测器），Agilent公司（型号1260）;超声波清洗器，Prima公司。

1.3 试验方法

1.3.1 绘制标准曲线

配制虫草素标准溶液（美国sigma公司）浓度分别为10、20、30、50 μg·mL-1和100 μg·mL-1，按照1.3.4的条件进行测试，并以虫草素浓度为横坐标，吸收峰面积为纵坐标绘制标准曲线[3]。

1.3.2 样品测定方法

将粉碎并过筛后的蛹虫草粉末加入蒸馏水，并超声提取后冷却至室温，定容之后经4 000 r·min-1离心10 min，并取上层清液过0.22 μm水相滤膜，滤液待上机测定。

1.3.3 正交因素水平设计

正交试验因素水平设计如表1所示。

1.3.4 液相色谱条件

色谱柱：ZORBAX SB-C18柱，4.6 mm×150 mm，5 μm;流动相：甲醇+水=25+75;流速：1.0 mL·min-1;柱温：30 ℃;波长：260 nm;进样量：10 μL。

2 结果与分析

2.1 标准曲线的绘制

10、20、30、50 μg·mL-1和100 μg·mL-1系列标准溶液的标准曲线如图1所示，可得峰面积Y与虫草素的浓度X之间的曲线关系为Y=64.135 535 9X-50.999 217。

可根据图1所示标准曲线，计算不同前处理条件下提取出的样品中的虫草素。

2.2 结果的比较

按照表1的因素水平开展正交试验，并根据图1中的标准曲线计算单位样品中的虫草素含量，所得结果如表2所示。

由表2知，4种因素对虫草素含量结果的影响程度依次是D>C>A>B，4种因素的最优组合应为A3B2C2D3，即提取温度100 ℃，提取次数2次，料水比为1∶100，提取时间120 min，此组合参数不在正交试验之列，采用此组合条件做验证试验，得到虫草素含量为3 735 mg·kg-1，大于正交试验表中的任一组合，为最优组合。

3 结论

本研究采用4因素3水平正交试验对虫草素含量测定方法的前處理进行了优化，确定最优条件为提取温度100 ℃，提取次数2次，料水比为1∶100，提取时间120 min。

参考文献：

[1]中华人民共和国国家卫生部.关于批准蛹虫草为新资源食品的公告（2009年第3号）[EB/OL].（2009-03-16）[2020-03-04]. http：//www.gov.cn/gzdt/2009-03/18/content_1262018.htm.

[2]刘彦威，刘 娜，刘利强.冬虫夏草有效成分的研究进展[J].动物医学进展，2004，25（3）：15-17.

[3]马麦艳，张相锋，焦子伟.蛹虫草主要成分虫草素、腺苷提取方法对比[J].现代农业科技，2019，739（5）：228-230，234..