红细胞分布宽度对气虚质大鼠辅助诊断的评价

徐 文，邹 明，高丕明，张红梅，刘小莉，张 静，郭 莉，虞亚明

(1.成都体育学院附属体育医院，四川 成都 610041；2.四川省骨科医院，四川 成都 610041)

红细胞分布宽度(RDW)是衡量红细胞体积异质性的指标，主要用于贫血的鉴别诊断，由血液分析仪通过测定大量红细胞的体积，依据其粒度分布曲线得到，将其表示为红细胞分布宽度标准差(RDW-SD)和红细胞分布宽度变异系数(RDW-CV)，二者表示的临床意义相似。但令人感兴趣的是RDW也与多种疾病的发病率和死亡率紧密相关，其影响机制仍尚不清楚，推测主要是通过机体处于慢性炎症来影响疾病的发生[1]。由于气虚质者气息低弱，其可能对血液循环的推动及血液成分造成影响，通过建立脾气虚质大鼠模型，了解机体是否处于炎症状态，并试图从常规检查中筛选出方便、快速及廉价的指标以辅助诊断气虚质体质。

1 材料与方法

1.1 动物分组与造模于2014年12月至2016年9月选择4周龄SPF级SD雄性大鼠60只，购于四川省达硕生物技术有限公司，许可证编号：SCXK(111)2013-24，体重(202.9±5.6)g，采用随机数字表法将其分为A组(脾气虚质组，30只)和B组(对照组，30只)。A组大鼠：参考中医体质的成因，采用限制饮食结合干扰睡眠的方法，建立大鼠脾气虚质模型[2～4]。采用无鼠粮供给2 d、足量鼠粮供应1 d的方式进行干预，鼠粮投放及撤除时间均为每日早8：30。饮用水(本院纯净水)始终足量供应。每日测量剩余食/水量，食/水量均值=(投放量-剩余量)/大鼠只数。睡眠剥夺，将大鼠置于跑台跑道内，设置跑台速度为1 m/min左右，缓慢移动形成不稳定平面，大鼠不能长时间静止站立不动或趴下，无法睡眠，每次24 h，隔日1次。每7 d观察1次大鼠体表特征，测量1次大鼠体重、腋温、摄食量、饮水量、抓力，体温及抓力连续测量3次取平均值，造模干预时间为28 d，B组大鼠正常饲养，成功建立大鼠脾气虚质模型[4]。

1.2 标本收集与处理造模完成后，10%(0.15 ml/100 g)水合氯醛于腹腔注射施行麻醉后，在心脏处行负压采血。EDTA.2k抗凝管采血2 ml，日本Sysmex XN1000血细胞计数仪于2小时内完成全血细胞计数[19]，获得RDW-CV和Hb。无添加剂采血管采血4 ml，各组大鼠TNF-α、IL-1β水平测定使用深圳欣博盛生物科技有限公司生产的ELISA试剂盒，用奥地利anthos2010酶标仪进行测定。

1.3 统计学方法使用SPSS 19.0和MedCalc19.0.2软件进行统计分析。符合正态分布的计量资料以均数±标准差表示，组间比较用t检验。P< 0.05为差异有统计学意义。MedCalc19.0.2受试者工作特征曲线(ROC)评价观察指标的诊断性能，曲线下面积(AUC)比较采用Delong检验。

2 结果

2.1 两组各检测指标比较A组TNF-α、RDW-CV及IL-1β明显高于B组，差异有统计学意义(P< 0.05)，但两组Hb比较，差异无统计学意义(P> 0.05)，见表1。

表1 两组各实验检测指标比较

2.2 RDW-CV、TNF-α及IL-1β单独用于气虚质大鼠的诊断价值RDW-CV诊断气虚质大鼠的AUC最大，明显高于IL-1β及TNF-α(P< 0.05)，而IL-1β和TNF-α间差异没有统计学意义(P> 0.05)，当RDW-CV的最佳截断值为17.6%(95%CI：17.6%～18.7%)时，敏感性为80%，特异性为80%，阳性预测值为80%，阴性预测值为80%，见图1、表2。

图1 RDW-CV、TNF-α及IL-1β单独诊断气虚质的ROC

表2 各指标单独检测时诊断分析

2.3 RDW-CV与TNF-α及IL-1β联合用于气虚质大鼠的诊断价值联合检测时，RDW-CV与TNF-α及IL-1β分别进行两项及三项联合检测，单独检测时与两项、三项联合检测相比及两项与三项联合检测相比，各组AUC差异均无统计学意义(均P> 0.05)。见图2、表3。

表3 RDW-CV与TNF-α及IL-1β联合检测时诊断分析

图2 RDW-CV与其它指标联合检测的ROC

3 讨论

RDW是反应红细胞大小异质性的参数，而红细胞大小易受季节、衰老及运动等生理因素的影响。但当机体有缺铁、缺乏维生素B12和叶酸、溶血和输血等影响红细胞大小的病理因素时，因血流中释放的红细胞比正常人更不成熟，可导致RDW增加。其在临床主要应用于贫血的鉴别诊断及疗效观察，但最近累积的研究证据表明RDW在糖尿病[5，6]、血糖不良控制[7]、高血压[1，8]、心血管事件[9～11]、心力衰竭[12]和髋部骨折[13]等多种疾病的诊断和与疾病短期和长期预后的预示中是一个有价值指标。目前认为RDW对疾病的影响是因机体处于慢性炎症的状态，特别是通过炎症细胞因子的存在和高氧化应激来影响机体的发病，甚至Bilal[1]、 Hassan[14]等认为RDW升高本身就是慢性炎症的标志物之一，慢性炎症可能导致RDW升高，而RDW水平升高可能反映潜在的慢性炎症。而人体健康涉及多方面，由于医学发展，现在已非常强调在机体处于已有病因但尚未发病的疾病前期时即对机体采取干预措施。即使对已发生疾病也强调同病异治，异病同治，这要求临床医生必须正确了解机体处于何种状态，即辨清体质，强调因人而异的重要性。体质是客观存在的生命现象，个体间有不同的差异，不同的体质对疾病的易感性不一，这与机体先天遗传和后天获得有关，但这种差异性是可分可调的。王琦[15]将体质划分为9类，认为气虚质是由于元气不足，以气息低弱、机体、脏腑功能状态低下为主要特征的一种体质状态，有肌肉不健壮，性格内向等表现，为先天本弱，后天失养或病后气亏所致，不利于机体血液循环推动。

TNF-α是重要的促炎细胞因子，可由巨噬细胞，NK细胞等产生，促进细胞凋亡，通过参与血管扩张和水肿的形成，白细胞粘附，促进炎症部位的氧化应激等方式参与炎症[16]。IL-1也是一种典型的促炎细胞因子，有IL-1α和IL-1β两种形式，它们的生物活性相似，常与另一种促炎细胞因子肿瘤坏死因子协同作用。IL-1β由巨噬细胞、单核细胞、树突状细胞及上皮细胞等分泌的，可以旁分泌的方式或系统地发挥作用，有多重作用，可参与T细胞、NK细胞和巨噬细胞活话，诱导急性期反应蛋白、发热而发挥有效促炎活性，生物活性由于其功能的强大和广泛，其合成、加工、分泌和活性是受到严格调控的，在正常条件下，在低水平表达[17]。

本研究发现脾气虚质大鼠TNF-α、IL-1β明显高于对照组，表明机体处于炎症状态，已有研究表明机体RDW升高与高敏C反应蛋白、红细胞沉降率等炎症标志物强相关。因而RDW-CV水平升高与炎性细胞因子TNF-α、IL-1β表达水平升高相关。炎性细胞因子的过高表达，可通过调节红细胞生成，包括抑制红细胞成熟、铁代谢受损以及抑制促红细胞生成素的产生或反应及增加细胞凋亡等损害红细胞的存活，导致未成熟红细胞过早的进入血液循环，使得RDW增加[6]。本研究通过限制大鼠饮食的方法来构建脾气虚质模型，可能会引起对脾气虚质大鼠的营养摄入而致贫血进而影响RDW-CV，因而将气虚质与对照组的血红蛋白的含量进行比较，发现二者的含量并未出现明显变化，也进一步表明其RDW的升高与贫血没有相关性，是因机体炎性因子升高所致，与Hassan等[14]排除贫血患者后发现RDW的升高与炎症因子的升高相关一致。

正常血液不停地周流于全身，运载营养及代谢物质，使得各组织和器官血液供应得有效保证。要保证血液循环正常流动则需机体能提供充足动力，祖国医学认为气为血帅，血为气母，气行则血行，气虚则血行无力[18]。气虚质实因元气不足所致，若需元气充沛则需后天之精气不断滋养。机体若要获得充足之精气来维持元气充沛，则需主运化之脾功能正常，因其有运化水谷精微功能，为气血生化之源，为化生精、气、血、津液提供足够动力。脾气虚质者则气血无源，脉中气虚血少，血行也难以正常，可致组织、器官的血、氧供应不足和代谢障碍，其RDW-CV的升高可能代表多种生理机制的综合指标，即慢性炎症、更大的氧化应激、营养不足、器官供血供氧不足等共同作用[7，10，11]。对于治未病，包括未病先防均需先辨清体质，而气虚质的辨识现多依据相关临床的主观表现，如何通过实验室的客观指标快速有效进行定量判断仍尚缺乏。本研究显示，单独检测时，RDW-CV较TNF-α、IL-1β有更好的诊断效能。为提高RDW-CV在气虚质大鼠中的诊断性能，通过与TNF-α、IL-1β进行两项和三项联合检测，并不能明显提高诊断性能。而RDW可通过自动血细胞计数很方便、快捷的获得，是一个廉价、常规可用的实验室参数，从检测的便捷性、检测成本及诊断性能等方面综合考虑，在气虚质诊断时，RDW可作为临床诊断中较好的客观辅助指标。本研究显示，RDW可以作为脾气虚质风险辨识的标记物，在机体向疾病转化，出现临床症状前可以尽早发现，进行风险评估并积极采取干预措施进行体质调节，防止机体向疾病转化，对治未病具有十分重要的意义。

综上所述，RDW与气虚质有直接关系，其升高与机体处于炎症状态相关。作为一项相对容易获得的测试，它可以作为一个早期预警指标，供临床医生用来识别气虚质，为调节体质，防疾病过早出现提供客观的辅助诊断，但因本研究是在脾气虚质大鼠中进行的观察，临床应用及其升高机制需要进一步的在大样本的人群中进行观察。