凯氏定氮法测定青海省不同地区羌活中全氮含量

李容榕，盛观星，林小艳

（1.青海民族大学药学院,青海西宁，810007；2.青海省青藏高原植物化学重点实验室，青海西宁，810007）

羌活，又称“护羌使者”，为伞形科羌活属植物羌活（Notopterygium incisumTing ex H.T.Chang.）或宽叶羌活（Notopterygium franchetiiH.de Boiss.）的干燥根茎。青海省大宗道地药材，1987年国务院中国野生药材资源保护管理条例将其列为三级保护植物，2005年《中国珍惜濒危保护植物名录》将其列为二级保护物种，并被《中国物种红色名录》收录。主产于青海省海北、黄南、海南、化隆、互助、大通等地区及四川、甘肃、云南等省份[1]。

羌活为常用中、藏药材，许多中、藏医典籍均有记载，其味辛、苦，性温，具有解表散寒、祛风除湿、止痛活血等功效。临床用于改善胃肠消化吸收功能、治疗妇科疾病、风寒感冒、头痛项强、风湿痹痛等病证[2]。现代药理学研究，羌活具解热、镇痛、抗炎、抗过敏、抗病毒、增加脑血流量、抗血小板凝集、抗心肌缺血、抗心律失常、抗哮喘等作用[3-7]。羌活化学成分种类繁多、成分复杂，主要含有挥发油和香豆素类化合物，此外还有氨基酸、有机酸、多糖、微量元素等[8-12]。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

试剂：浓硫酸、95%乙醇（天津市白银良友化学试剂有限公司），硫酸铜、硫酸钾、氢氧化钠(天津市大茂化学试剂厂)，硼酸(上海沪试实验室器材股份有限公司)，甲基红指示剂、溴甲酚绿指示剂、亚甲基蓝指示剂(沈阳塞尼欧化工有限公司)。试剂均为分析纯。

仪器：凯氏定氮器（上海申玻仪器公司），UPHIV-10T型优普系列超纯水机（成都超纯科技有限公司），TM Digestor消化炉（FOSS 分析仪器公司）。

1.2 实验材料

本文所采用植物均经青海民族大学药学院林鹏程教授鉴定，为羌活属植物羌活及宽叶羌活。2018年6-10月采自青海省麦秀林场、互助北山林场（2 种）、大通县、祁连县4 个地区，共5 种，见表1。采集后及时进行处理，弃去植株根部以上部位，留用根部用纯水冲洗，擦干后阴干，用粉碎机粉碎，过40目筛，备用。

表1 青海省不同地区羌活采集时间、地区汇总表

1.3 试验方法

1.3.1 试样的处理

称取充分混匀的羌活试样0.500 g,移入干燥的消化管中，加入0.4 g 硫酸铜、6.0 g 硫酸钾及20 mL浓硫酸,置于消化炉上加热至内容物全部碳化,液体呈蓝绿色并澄清透明后,取下放冷,加入20 mL 水,后移入100 mL 容量瓶中,用少量蒸馏水洗消化管3次,洗液并入容量瓶中,再加水至刻度,混匀备用。同时准备空白试剂。

1.3.2 蒸馏

装好定氮蒸馏装置,向水蒸气发生器内装水至2/3 处,同时加入数粒玻璃珠,加入甲基红乙醇溶液5 滴及数毫升硫酸,以保持水呈酸性,加热煮沸水蒸气发生器内的水并保持沸腾。向接受瓶内加入10.0 mL 硼酸溶液及3～4 滴混合指示剂（1 份甲基红乙醇溶液与5 份溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合）,并使冷凝管下端插入液面下,吸取10.0 mL试样处理液由小玻杯注入反应室,以10 mL 水洗涤小玻璃杯并使之流入反应室内,随后塞紧棒状玻塞。将10.0 mL 氢氧化钠溶液倒入小玻璃杯,提起玻璃塞使其缓缓流入反应室,立即将玻璃塞盖紧,并水封。夹紧螺旋夹,开始蒸馏。蒸馏10 min 后移动蒸馏液接收瓶,液面离开冷凝管下端,再蒸馏1 min。然后用少量水冲洗冷凝管下端外部,取下蒸馏液接收瓶。

1.3.3 滴定

以硫盐酸标准滴定溶液滴定至终点,终点颜色为浅灰红色。同时做试剂空白。

2 结果与分析

按照1.3 方法进行样品含量测定，同时进行平行样品的测定，RSD=0.2%。不同地区羌活蛋白质含量结果如表2所示。

表2 不同地区样品蛋白质含量测定

盐酸标定液实际浓度为0.015 59 mol/L，换算系数为6.25。

结果显示，青海省不同地区羌活的蛋白质含量均在4.5 g/100 g以上，不同地区羌活中全氮含量有明显差异。其中，祁连县地区的宽叶羌活中全氮含量最低，大通县所采集的羌活全氮含量最高。根据全氮含量发现，大通县地区羌活＞互助北山林场宽叶羌活＞麦秀林场羌活＞互助北山林场羌活＞祁连县宽叶羌活。同一地区的不同羌活全氮含量也稍有差异，互助北山林场采集的宽叶羌活的全氮含量略低于羌活的全氮含量。

通过进行全氮含量的测定，发现青海省不同地区羌活全氮含量存在明显的地域差异，这与羌活所处环境的水分、海拔、土壤等因素有密切的联系。此研究为羌活营养学价值提供后续研究基础，为青海省羌活产业化打下基础。