肿瘤坏死因子α、白介素1β、白介素6 在2 型糖尿病不同中医证型中表达差异性研究

何君婷 龚文波

2 型糖尿病（T2DM）是一种慢性炎症性疾病[1]。T2DM 患者的胰岛素抵抗（IR）程度与血清C-反应蛋白（CRP）水平显著相关[2]。对动物模型与人体研究发现，T2DM 患者的胰岛存在炎症细胞浸润现象，T2DM患者胰岛组织切片显示纤维化与淀粉样沉积，从而给胰岛炎症反应说提供了证据[3]。文献报道气虚或气机不利是糖尿病的基本病机，在疾病发生发展过程中，会演变为阴虚、气阴两虚证[4]。研究表明，肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）表达上调是糖尿病炎症反应的重要途径和指标[5]。本研究探讨IL-1β、IL-6、TNF-α 在三种证型中的表达差异。

1 临床资料

1.1 一般资料 选取2016 年8 月—2017 年8 月浙江省宁波市中医院内分泌科门诊就诊T2DM 患者202 例，随机数字表法分为气虚组68 例，阴虚组67例，气阴两虚组72 例。选取本院体检中心同期健康体检人群73 名为对照组，所有研究对象均签署知情同意书，本研究经医院伦理委员会审核通过。

1.2 诊断及排除标准 T2DM 诊断标准:参照中国T2DM 防治指南（2013 年版）诊断标准:空腹血糖（FPG）7.0mmol/L；或糖耐量试验（OGTT）11.1mmol/L；或随机血糖11.1mmol/L[6]。中医辨证标准:参照《中药新药临床研究指导原则》[7]、《中西医结合糖尿病诊疗标准》[8]、《消渴病（糖尿病）中医分期辨证与疗效评定标准》[9]的标准。气虚证:主症为神疲乏力，少气懒言，汗出气短，脉细无力；次症为自汗，怔仲健忘，舌淡或淡胖。符合2 项主症及1 项次症即可诊断。阴虚证:主症为咽干口渴；怕热汗多或有盗汗；手足心或五心烦热；舌红，苔薄黄或薄白；次症为消谷善饥；形体消瘦；大便秘结；脉细数。符合2 项主症及1 项次症即可诊断。气阴两虚证:主症为神疲乏力，汗出气短，五心烦热，咽干口渴，舌红少津，苔薄或白腻；次症为怔仲健忘，多食易饥，心悸失眠，脉细或濡细。符合2 项主症及1 项次症即可诊断。排除标准:（1）糖尿病急性并发症，如糖尿病酮症、糖尿病高渗性昏迷；（2）糖尿病各种应激状态，如感染、创伤、大出血等；（3）糖尿病其他兼症，如肿瘤、免疫系统或血液系统疾病者；（4）因严重心脑肾并发症者；（5）妊娠或哺乳期妇女。

2 研究方法

2.1 观察指标及方法 采集所有研究对象清晨空腹静脉血5mL，运用酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）法测定TNF-α、IL-1β、IL-6 蛋白表达水平，具体操作严格按试剂盒说明书进行，所有试剂盒购自英国abcom 公司（批号ab181421、ab46052、ab46027）。并同时采用葡萄糖氧化酶法测定血清FPG，高效液相离子层析法测定糖化血红蛋白（HbAlc）水平，ELISA 法测定超敏-C 反应蛋白（hs-CRP）等相关指标。

2.2 统计学方法 应用SPSS 25.0 统计软件，计量资料以均数±标准差（） 表示，两组间比较采用t 检验，多组间比较采用方差分析，均以P＜0.05 为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 四组研究对象一般资料比较 气虚组68 例，男35 例，女33 例，年龄（54.30±8.80）岁，病程（5.21±2.18）年，体质量指数（BMI）（23.32±3.06）kg/m2；阴虚组67 例，男35 例，女32 例，年龄（55.30±8.60）岁，病程（6.81±2.73）年，BMI（22.72±2.87）kg/m2；气阴两虚组72 例，男38 例，女34 例，年龄（52.30±7.90）岁，病程（5.76±3.35）年，BMI（22.09±2.48）kg/m2。对照组73名，男37 名，女36 名，年龄（52.10±8.10）岁，BMI（22.12±2.86）kg/m2。四组研究对象一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

3.2 四组研究对象血FPG、HbAlc 及hs-CRP 比较气阴两虚组、气虚组、阴虚组FPG、HbAlc、hs-CRP 均明显高于对照组（P＜0.05），气阴两虚组、气虚组及阴虚组组间比较FPG、HbAlc、hs-CRP 差异均无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 四组研究对象血FPG、HbAlc 及hs-CRP 比较（）

表1 四组研究对象血FPG、HbAlc 及hs-CRP 比较（）

注:FPG 为空腹血糖；HbAlc 为糖化血红蛋白；hs-CRP 为超敏C 反应蛋白；与对照组比较，aP＜0.05

3.3 四组研究对象血TNF-α、IL-1β、IL-6 比较 与对照组比较，阴虚组和气虚组TNF-α 升高（P＜0.05），气阴两虚组TNF-α、IL-1β、IL-6 均显著升高（P＜0.05）；与阴虚组、气虚组比较，气阴两虚组TNF-α、IL-1β、IL-6 均显著升高（P＜0.05）。见表2。

表2 四组研究对象血TNF-α、IL-1β、IL-6 比较（）

表2 四组研究对象血TNF-α、IL-1β、IL-6 比较（）

注:TNF-α 为肿瘤坏死因子α；IL-1β 为白介素1β；IL-6 为白介素6；与对照组比较，aP＜0.05；与阴虚组、气虚组比较，bP＜0.05

4 讨论

《素问·经脉别论》言:“饮入于胃，游溢精气，上输于脾，脾气散精……水精四布，五经并行。”“脾气散精”即是指将饮食中的营养成分精微物质，有效地输送至全身并充分利用的过程，只有脾气的健运，才能“受气取汁”，将饮食中的水谷变成气血精微。脾气不足或中焦气机不利可能会导致精微物质，包括血糖代谢失常。明代医家楼英所著的《医学纲目》中指出“盖肺藏气，肺无病则气能管摄津液之精微，津液之精微者收养筋骨之血脉，余者溲，肺病则津液无气管摄，津微亦随之溲下”，导致气阴俱损，阐述了消渴病形成气阴两虚证的病机。临床研究显示，益气、养阴或益气养阴法辨证治疗T2DM 均取得较好疗效，同时研究也表明其作用机制与调控、改善T2DM 患者炎症因子水平相关，如TNF-α、IL-6 等[10-12]。

高糖时IL-1β 可激活β 细胞内的激酶核因子-κB（NF-κB），而抑制NF-κB 通路则可使β 细胞免于包括糖毒性等多种损害，故高糖能引起β 细胞凋亡，是胰岛炎症的最早证据[13]。其机制为高糖诱导β 细胞表达促凋亡受体Fas，同时高糖诱导下β 细胞产生的IL-1β 进一步上调，IL-1β 和FFAs 使得β 细胞功能受损，最终发生凋亡[5]。在人胰岛培养物中，FFAs可以刺激IL-1β 与依赖IL-1β 的促炎因子分泌，而高糖联合FFAs 则产生更强大的促炎效应，IL-1β 的表达水平与T2DM 的炎症状态及胰岛细胞凋亡密切相关[14]。本研究显示，T2DM 患者hs-CRP 水平显著高于健康人群。其中气阴两虚T2DM 患者血IL-1β 以及TNF-α、IL-6 水平均显著高于气虚证和阴虚证者（P 均＜0.05），认为气阴两虚证T2DM 患者的炎症反应程度更高；炎症因子的测定有可能成为T2DM 气阴两虚证的客观辅助诊断指标。

T2DM 是一种自然免疫和慢性炎症疾病，多种炎症因子参与其中，能否通过对相关炎症因子的量化测定来辅助诊断T2DM 的病程阶段以及确定中医证型，还需要进一步通过大样本多中心的按病程、分阶段的研究。