小儿重症毛细支气管炎治疗前后外周血单个核细胞 Treg Th17细胞水平及临床意义

王文慧，李敏副，王 茹，苏红苗

(海南省琼海市人民医院儿科，海南 琼海 571400)

毛细支气管炎是婴幼儿常见呼吸系统疾病之一，约3%的1岁以下婴儿因毛细支管炎住院治疗。重症毛细支气管炎起病急骤、病情进展迅速，如不治疗易引发多种严重并发症，发生支气管哮喘风险也较高，严重威胁小儿生命和健康[1]。有文献指出，毛细支气管炎最主要病原体为呼吸道合胞病毒，病毒侵入人体会诱发T细胞免疫应答，除Th1/Th2细胞应答失衡外，Th17细胞反应在其发病过程中也较为重要[2]。冯柱兴[3]等学者的研究也显示，小儿毛细支气管炎经治疗后Treg细胞明显升高、Th17细胞明显下降。基于此，本研究选取106例重症毛细支气管炎患儿作为研究对象，以探究小儿重症毛细支气管炎治疗前后外周血单个核细胞Treg、Th17细胞水平变化，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料：纳入2017年9月至2018年9月间收治的106例重症毛细支气管炎患儿作为研究对象。纳入标准：符合重症毛细支管炎诊断标准者；年龄<2岁者；入组前未经激素及其他免疫抑制剂治疗者；患儿监护人知情同意；经我院伦理委员会审核通过。排除标准：合并严重器官功能障碍、免疫功能紊乱者；其他先天性疾病者；治疗期间出现严重并发症或过敏症状而更换治疗方案者。106例重症毛细支气管炎患儿中男女分别为60例、46例，月龄6～20个月、平均月龄(15.05±3.49)个月。

1.2 治疗方法：所有患儿均严密监测病情变化，采取对症支持治疗，雾化吸入布地奈德(生产企业：AstraZeneca Pty Ltd，规格：2mL：0.5 mg，批准文号：H20090902)、异丙托溴铵(生产企业：Boehringer Ingelheim Pharma GmbH & Co. KG，规格：2 mL:异丙托溴铵500 μg，批准文号：H20100682)、干扰素α-1b(生产企业：北京三元基因工程有限公司，规格：10 μg：0.5mL/支，批准文号：国药准字S20040039)治疗，布地奈德0.5mg、异丙托溴铵2mL、干扰素α-1b 1 μg/mL、生理盐水2mL混合行经氧雾化吸收，10 min/次。如患儿合并细菌感染加用抗菌药物治疗。

1.3 评估方法：治疗前后均采集患儿外周静脉血，使用AccuriC6型流式细胞仪(美国BD公司生产)测定患儿Treg(CD3+CD8-IL-17+T)、Th17(CD4+CD25highCD127lowT)频率；采用酶联免疫法(ELISA)测定患儿白介素-17(IL-17)、白介素-23(IL-23)、白介素-10(IL-10)、转化生长因子-β(TGF-β)水平，试剂盒均购自上海纪宁实业有限公司和上海江莱生物科技有限公司，酶标仪购自上海沛欧分析仪器有限公司(318C+型)，进行检测前对所有质控品进行检测，测定质控品均在控后再对各组样本进行检测，检测流程均严格按照试剂盒说明书和仪器操作手册进行。

1.4 评估标准：临床疗效根据患儿症状体征分为显效(治疗7d后症状体征明显改善，哮鸣音、湿罗音消失)、有效(治疗7d后症状体征有所改善，哮鸣音、湿罗音基本消失)、无效(治疗7d后症状体征仍无改善或加重)3级，总有效率=(显效+有效)/总例数×100%。

1.5 观察指标：评估患儿疗效，比较治疗前、治疗1周后患儿Treg、Th17水平及相关细胞因子水平(IL-17、IL-23、IL-10、TGF-β)，评估不同疗效患儿的Treg、Th17水平，分析疗效与Treg、Th17水平的相关性。

2 结 果

2.1 临床疗效：治疗7d后，106例重型毛细支气管炎患儿显效61例、有效38例，无效7例，总有效率93.40%(99/106)。

2.2 治疗前后患儿Treg、Th17水平对比：治疗7d后，患儿Treg水平高于治疗前(P<0.05)，Th17水平低于治疗前(P<0.05)，见表1。

2.3 治疗前后患儿相关细胞因子水平对比：治疗7d后，患儿IL-10、TGF-β水平均高于治疗前(P<0.05)，IL-17、IL-23水平均低于治疗前(P<0.05)，见表2。

表1 治疗前后患儿Treg Th17水平对比

表2 治疗前后患儿相关细胞因子水平对比

2.4 不同疗效患儿Treg、Th17水平：治疗7d后，患儿显效者、有效者Treg水平均高于治疗前(P<0.05)，Th17水平均低于治疗前(P<0.05)；无效者Treg、Th17水平与治疗前对比差异无统计学意义(P>0.05)，显效者、有效者、无效者治疗后Treg、Th17水平对比，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3 不同疗效患儿Treg Th17水平

3 讨 论

毛细支气管炎是以免疫球蛋白E介导的、嗜酸性粒细胞浸润为主的，多种炎症介质共同介导的小气道炎症，辅助型T细胞亚群细胞比例失调是气道高反应发生进展的关键。Th17和Treg是近年发现的一种新型CD4+效应T细胞亚群，应琴[4]等学者的研究显示，孟鲁司特钠可通过调节毛细支气管炎患儿体内Th17/Treg平衡来提高毛细支气管炎疗效。张进军[5]等学者的研究也发现，毛细支气管炎患儿经治疗IL-10、TGF-β1水平均高于治疗前。但回顾既往文献发现，目前国内对小儿毛细支气管炎，尤其是重型毛细支气管炎，发生发展与Th17/Treg的变化研究较少。故本研究就此方面入手，进一步了解毛细支气管炎与Th17/Treg失衡的关系，以指导临床治疗。

毛国其[6]等学者的研究显示，毛细支气管炎患儿Treg频率低于健康婴幼儿，而Th17频率则高于健康婴幼儿，Th17/Treg失衡与毛细支气管炎发生密切相关。本研究中，106例患儿治疗总有效率为93.40%。对比治疗前后发现，治疗7w后，患儿Treg细胞频率较治疗前明显升高，Th17细胞频率较治疗前明显降低，这提示治疗后Th17/Treg失衡状态有所改善。本研究数据还显示，治疗7d后，患儿IL-10、TGF-β均高于治疗前，IL-17、IL-23水平均低于治疗前。机体正常情况下，Th17/Treg呈相互拮抗、相互转化的状态。Th17细胞是人体内起着促进炎症反应作用的一类CD4+T细胞亚群，其通过分泌IL-17细胞因子发挥强烈的致炎作用[7]。而Treg细胞则能够对免疫细胞产生负性调节作用，通过促进释放出IL-10等效应因子，从而对T细胞的活性及增殖产生抑制作用，发挥免疫抑制的功能。当发生毛细支气管炎时，病毒侵袭使Th17上升促进炎性反应，使Treg下降减弱其对免疫功能的调节作用，故引发不同程度的免疫应答，产生各种病理症状体征。而治疗后患儿IL-17等炎症因子水平被控制，IL-10、TGF-β等抗炎因子水平升高，有文献指出，Treg细胞能够通过IL-10依赖的方式抑制Th17的促炎作用，高浓度TGF-β下诱导T细胞向Treg细胞分化，因此患儿治疗后Th17/Treg失衡获得纠正。

本研究进一步分析毛细支气管炎疗效与Treg/Th17的关系，数据显示，治疗后不同疗效患儿Treg、Th17水平对比差异有统计学意义。其中，治疗无效者Th17、Treg水平与治疗前对比差异无统计学意义，这说明患儿Th17/Treg仍处失衡状态。同时，患儿经治疗后，显效者、有效者和无效者Treg、Th17水平存在显著差异，出现Treg水平越高患儿疗效越好、Th17水平越低患儿疗效越好的趋势。而治疗前Th17、Treg水平均与疗效无关，考虑与本组样本均为重型毛细支气管炎患儿，Th17/Treg失衡较严重不足以反映明显线性关系有关。这提示，在小儿重型毛细支气管炎治疗中，对患儿不仅要予以抗炎、给氧等对症支持性治疗，还需根据患儿免疫功能状况以调节和治疗患儿免疫功能失衡。另外，Th17在毛细支气管炎和支气管哮喘的发病过程中均起重要作用。因此，反复发作的毛细支气管炎患儿血清Th17频率较高可能是其病情向支气管哮喘转归的原因之一。

综上所述，治疗后小儿重型支气管炎患儿Treg及其细胞因子水平高于治疗前、Th17细胞因子低于治疗前，治疗后Treg与疗效呈正相关关系，Th17与疗效呈负相关关系。