核致密斑点型抗核抗体的临床应用

戴 蕾，臧福宇，朱文波，郑齐锶，宁明哲，陶 月

0 引 言

抗核抗体(antinuclear autoantibodies，ANA)是临床诊断系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)、干燥综合征(Sjögren′s syndrome)等自身免疫病重要的参考指标之一[1-3]。目前利用以人喉癌上皮细胞(HEp-2)为基质的间接免疫荧光法(IIF)检测抗核抗体仍然是国内外公认的检测抗核抗体的“金标准”[4-6]。研究人员于2014年在巴西召开的第12届国际自身抗体及自身免疫学术会议上第一次制定了ANA荧光模型国际共识(international consensus on antinuclear antibody pattern,ICAP)，并明确提出了核致密斑点型(nuclear dense fine speckled，AC-2)。但目前AC-2的临床意义仍未得到具体的阐述。本研究对我院检出的AC-2及其临床意义做简要探讨。

1 资料与方法

1.1 标本来源收集2019年1-3月在南京鼓楼医院收治的门诊或住院或体检中心患者的抗核抗体检测报告显示为核致密斑点型的血清标本，共计19例，其中女18例，男1例，年龄25～73岁，中位数年龄29岁。血清标本在采集后2 h内送至检验科进行检测。临床诊断：不孕症6例，肝损伤、妊娠、关节炎、体检各2例，桥本甲状腺炎、胃炎、发热待查、肾功能受损、贫血各1例。

1.2 试剂抗核抗体谱(IgG)检测试剂盒(欧蒙印迹法)、抗核抗体IgG试剂盒(间接免疫荧光法)、抗DFS-70抗体(IgG)试剂盒(欧蒙印迹法)均购自杭州欧蒙医学科技有限公司。

1.3 实验方法实验均参照试剂盒说明书完成。 抗核抗体谱(IgG)和抗DFS-70抗体(IgG)试剂盒检测完成后，将检测膜条放置在结果判定模板中，风干后判读结果。抗核抗体(间接免疫荧光法)检测后，用EUROStar III Plus 荧光显微镜下(40×物镜)观察检测结果,间接免疫荧光法以HEp-2和猴肝作为检测基质。激发滤片：488 nm，分光滤镜：510 nm，阻挡滤镜：520 nm。

2 结 果

2.1 抗核抗体谱(IgG)检测结果19例标本的抗核抗体谱(IgG)检测结果中，无特异性抗体阳性的结果标本为17例，占89.47%。出现阳性结果的标本为2例，占10.53%，其中1例表现为抗多发性肌炎/硬皮病抗体(PM-Scl)阳性，另1例表现为抗着丝点蛋白B(CenpB)和抗合成酶抗体(Jo-1)阳性。见图1。

图1 2例抗核抗体谱阳性标本膜条结果

2.2 抗核抗体IgG检测结果(HEp-2 IFA)19例患者标本HEp-2 IFA核型检测结果均为AC-2，选取其中2例患者的抗核抗体IgG检测结果(Hep-2 IFA)，见图2a、图2b。另选取一张细胞核细颗粒型(AC-4)和一张细胞核均质型(AC-1)作比对，见图2c、图2d。AC-2在猴肝基质片中无特殊荧光表现，见图3a、图3b，选取AC-4和AC-1的猴肝基质片图像作比对，见图3c、图3d。

a-b：蓝色箭头所指的分裂期细胞在中间板层上呈致密颗粒分布，橙色箭头所指的间期细胞呈颗粒样分布且荧光不均匀；c：蓝色箭头所指的分裂期细胞中间板层无荧光染色；d：蓝色箭头所指的分裂期细胞中间板层呈均匀玻璃样染色，橙色箭头所指的间期细胞均匀染色图2 AC-2、AC-4和AC-1在HEp-2细胞基质上的荧光表现

a-b：猴肝基质上未见明显细胞特征；c：黄色箭头示细胞核呈颗粒样荧光；d：黄色箭头示猴肝细胞呈均匀块状荧光图3 AC-2、AC-4和AC-1在猴肝细胞基质上的荧光表现

2.3 抗DFS-70 抗体(IgG)检测结果19例患者标本中，抗DFS-70 抗体(IgG)检测结果均为阳性。见图4。

图4 抗DFS-70 抗体(IgG)检测结果

3 讨 论

抗核抗体AC-2，即核致密斑点，在ICAP的抗核抗体荧光模型命名和分类树中，归属于抗核抗体细胞核型中的斑点型，其在IIF法检测ANA的初期并未引起重视。随着对ANA研究的不断深入，研究人员发现并明确了这种和均质型及粗、细斑点型相似但存在差异的荧光模型。并在随后的研究中发现了特定的自身抗体抗DFS70抗体，这进一步明确了核致密斑点型是一种独立的荧光模型。

致密斑点型的典型形态特征为：间期细胞核呈现大小不一、荧光强弱不同、分布不均匀的荧光斑点。这些荧光斑点在间期细胞的某些地方分布密集，而在其它地方则分布疏松。细胞分裂中期，细胞中央板块区则呈现强发光的斑点，并且呈粗颗粒状[7-8]。值得注意的是，致密斑点型的间期形态容易与粗颗粒斑点型混淆，因为两者在间期细胞内均有广泛分布的颗粒荧光。同时，致密斑点型的分裂中期形态还易与均质型混淆，因为两者均表现出分裂期细胞染色体发出强的浓缩荧光。由于以上的荧光模型特征，致密斑点型同均质型、粗颗粒斑点型，尤其是两者混合的荧光模型不易分辨、容易混淆。

同时，根据本实验研究结果，我们对核致密斑点型的荧光特征做如下补充：①间期细胞中颗粒分布相对均匀，但发光强度不均匀；②间期细胞核充满颗粒且有清晰边界；③核仁呈颗粒荧光，但是不会出现空洞；④猴肝片上不呈现荧光等。并且，ICAP官网中提供了四张图谱，其中的三张图谱的试剂盒来源为美国INOVA公司。本实验室的ANA IgG抗体(IIF法)试剂盒来源为德国欧蒙公司，且有猴肝细胞基质片协助判断，为实验室工作人员学习AC-2的特征提供了参考。

在发现和命名AC-2致密斑点型后，研究人员开始尝试明确致密斑点型ANA与自身免疫病的相关性，并探讨该荧光模型与其他自身免疫病血清学指标的相关性[9-11]。目前，有国外报道存在AC-2核型ANA的人群不易患自身免疫病，其5年内自身免疫病的发病率低于其他ANA阳性的人群[12-15]。在本研究中，19例AC-2核型的患者，有6例均因不孕症而就诊。因此我们提出假说，AC-2核型与不孕不育有一定相关性。但受制于本研究的样本数过少，此猜测尚需更多样本量及临床数据支持。目前，对于该荧光模型的临床意义还未达成广泛的共识。

综上可以看出，致密斑点型的形态学不典型，在ICAP中，该核型虽然被规定为一级必报核型，但不同于均质型、粗颗粒斑点型以及细颗粒斑点型等常见荧光模型，致密斑点型对于检验人员的经验有着更高要求。实验室工作人员应加强读片的训练，为临床提供准确及时的报告。