不同凝集方法对人间布鲁氏菌检测的影响

曹付龙

（山东省东营市利津县疾病预防控制中心 山东东营 257400）

1 前言

布鲁氏杆菌病多由细菌侵入引起，在人类、动物群体中广泛存在[1]。患病时，会出现长期发热、多汗的症状，同时，部分患者还有关节疼痛、肝脾肿大等问题，严重威胁着人们的身体健康和生命安全[2]。临床中，开展人间布鲁氏菌检测对于传染病预防和治疗极为关键。本文从利津县2006 年1 月—2020 年1月虎红平板凝集试验阳性血清中选取1 500 份，对比虎红平板凝集试验（RBPT）法与布病试管凝集试验（SAT）法在该疾病中检测中的差异性。

2 材料和方法

2.1 材料

试验样本血清由利津县疾病预防控制中心提供。从利津县2006 年1 月—2020 年1 月虎红平板凝集试验阳性血清中选取1 500 份，患者男女比例1.87∶1，年龄分布以40～64 岁年龄组的青壮年为主，占比82.3%。

2.2 方法

采用RBPT 法及SAT 法2 种检测方式。

2.2.1 RBPT 法检测

（1）准备实验器材及试剂：清洁脱脂玻片或有凹型孔的玻片；微量加样器或0.1 mL 吸管；牙签或细铁丝；虎红平板凝集抗原；被检血清等材料。

（2）具体操作步骤：在玻片中加入0.03 mL 被检血清，随后混入0.03 mL 虎红平板凝集抗原，通过牙签混合均匀后，设置阴阳对照组，并于5 min 内完成试验结果判定。

（3）结果判定：判定被检血清的凝聚程度。

2.2.2 SAT 检测

（1）实验材料：被检血清、试管凝集抗原；0.5%的石碳酸生理盐水；吸管、凝集试管、温箱和试管架等材料设备。

（2）操作步骤：第一步，进行被检血清的稀释处理，采用8～10 mm 口径的试管盛装血清，每份血清分5 支试管。各试管稀释方法为：第一管加2.3 mL石碳酸生理盐水；第二管不加任何试剂；第三、第四、第五管各加0.5 mL。随后，选择1 mL 吸管，吸取被检血清0.2 mL 置入第一管，待充分混匀后，采用同一吸管，吸取第一管血清样本滴入第二、三管中，要求滴入规格均保持在0.5 mL。待第三管混匀后，吸取0.5mL 滴入第四管，将第四管吸出的0.5 mL 混合液丢弃。最终确保从第2～5 管各试管血清稀释程度分别为 1∶12.5，1∶25，1∶50 和 1∶100。第二步，完成血清稀释后，开始在各试管中加入抗原，抗原原液稀释前，以0.5%石碳酸生理盐水进行稀释处理，随后在第2～5管中加入稀释后抗原，每管加0.5 mL，此时2～5 管中各管血清及抗原混合液总量1 mL，各管血清稀释度变为 1∶25，1∶50，1∶100 和 1∶200。需注意的是，第一管不加任何抗原，做血清对照液，在对照剂量控制中，吸出0.5 mL，确保第一管剩余血清1 mL。第三步，设置血清对照组，要求设置阴性、阳性2 组对照组，其中阴性对照组加入抗原与被检血清对照相似；阳性血清释到原有滴度，再加抗原；抗原对照，适当稀释的抗原加石碳酸盐水。第四步，进行检测结果的具体判定，先制备比浊管，比浊管配置方法为：取本次试验用的抗原稀释液5～10 mL，加入等量的0.5%碳酸盐水作倍比稀释，随后按实际需要进行调整。然后将对照管与比浊管充分振荡后置37℃温箱中20～22 h，取出后室温静置2 h 开始进行对比。

（3）结果判定：根据各管中上层液体的清亮度判定结果[3]。

2.3 观察指标

对比观察2 组检测方式下血清检测结果的符合率。

2.4 统计学分析

采用SPSS21.0 对本次研究数据进行处理，计量资料以表示，以t 检验，计数资料以%表示，以χ2检验；P＜0.05 表示数据差异有统计学意义。

3 结果

2 种检测方式检查结果对比详见表1。由表1 可知，采用RBPT 检测1 500 份布鲁氏菌病血清样本，“+”350 例；“++”600 例；“+++至++++”550 例，采用SAT 检测法，918 份阳性。2 种检测方法“+”阳性检测符合率为9.7%;“++”阳性检测符合率58.3%；“+++至++++”阳性检测符合率97.1%，总阳性符合率为61.2%。从检测过程来看，RBPT 检测法检测效率较高，SAT 检测精度更加准确，因此，RBPT 法可作为实验室检查初筛实验。

表1 282 份布鲁氏菌病血清样本RBPT 法、SAT 法检测结果

4 讨论

布鲁氏菌病是一种自然疫源性传染病，该疾病的发病率及复发率极高，并且容易转为慢性疾病，对人畜的危害极大[4]。有研究表明，该疾病在全球范围内均有较广的发病率，其中欧洲的疫情较为严重，我国内蒙古、甘肃、陕西等西北地区发病明显[5]。布鲁氏菌病可由牛、羊、猪感染人所导致，通常情况下，因羊患病而感染的人群较多，尤其是在羊分娩过程中，其会随分娩体液流出，进而感染人群。从发病表现来看，布鲁氏菌感染人之后，不仅会造成亚临床的感染，还会带来较为严重急性或者亚急性感染。当发生感染时，患者多有发热表现，且发热时间较长，多数患者发热时间维持在2~3 周，随后体温恢复正常。需注意的是，患者体温变化会呈现波浪形，即体温恢复正常后会再次发热。伴随着发热表现，部分患者还有明显的出汗、游走性大关节剧烈疼痛、脾肿大以及淋巴结肿大的表现，给患者带来较大痛苦。当有人患有该疾病时，就容易引发较为严重的公共卫生问题。当前环境下，人们对于畜产品的需求量持续增加，而在畜产品交易中，活畜交易极为频繁，部分活畜本身带有布鲁氏菌病，增加了布鲁氏菌病感染的概率。相对而言，养殖业、屠宰业、畜牧业、皮毛加工、兽医等行业的人群是布鲁氏菌病的易感人群。在发生感染时，其会通过直接接触、消化道、呼吸道等途径进行传播。在临床中，正确地预防和治疗布鲁氏菌病，可实现疾病的完全控制。从生物学特点来看，布鲁氏菌病对于紫外线、热、常用化学消毒剂具有极为敏感的表现。采用阳光直射1～4 h 即可杀死布鲁氏菌病病毒，此外，湿热 100℃ 1～4 min、80℃ 7～19 min、3%的漂白粉澄清液2 min 等手段都能起到杀死布鲁氏菌病的作用。要实现布鲁氏菌病的有效防治，做好前期检疫极为关键。然而，在当前环境下，我国畜牧业养殖多为农作物种植者散养，分布范围广、规模小、蓄养种类繁杂，这给整体检疫工作带来了较大难度，在检测过程中，样本获取难度大，费时费力[6，7]。基于此，需进行检测方式的不断优化。具体而言，消除布鲁氏菌病传播的根本措施是扑杀患病动物，消灭传染源。因此，快速检出阳性患畜并将其扑杀是一种有力措施。

临床实践中，针对此类疾病的诊断主要采用血清学检验法，具体而言，平板凝集试验、虎红平板凝集试验、试管凝集试验等都是较为常见的实验室检测方式，此外，采用抗球蛋白试验、补体结合试验等均能有效地检测出布鲁氏菌病。相对而言，RBPT 及SAT 在人间布鲁氏菌病检疫中的应用较为常见。RBPT检测方式的可操作性更强，同时操作过程极为简单，检疫人员在较短的时间内，即可实现布鲁氏菌病的有效检查。基于此，其在布鲁氏菌病大范围检测中应用较广，有效地满足了布鲁氏菌病初步检疫需要。不可否认的是，该检测方式在使用中仍存在一定缺陷，如较为常见的特异凝集现象，该现象会使检测结果出现假阳性问题，因此，尚需对检疫方式进行有效优化。SAT 是一种高精度的布鲁氏菌病检测方式，其虽然具有较为烦琐的操作步骤且耗时较长，但仍能确保检测结果的准确性[8]。基于这一优势，SAT 在布鲁氏菌病检疫中的应用十分广泛，并且在实践中，人们对其方法进行了持续更新和优化。就SAT 检疫方法本身而言，其包含了传统试管凝集试验、改良试管凝集试验、水浴法试管凝集试验、微量法凝集试验等诸多类型。每种方法均有不同侧重点，且检疫结果也存在一定差异。相对而言，改良SAT 法的检出率较高。这是因为在检疫过程过程中，其通过微量移液器代替习惯，并进行加样方式改良，使加液、加样的精度更高，同时也避免了因血清量较少而无法实验的问题；此外，移液器可以随时更换吸头，减少了洗涤、消毒、干燥等环节，既保证了检疫工作的衔接性，又减少了工作强度，保证了工作效率，有效地减少了SAT 的检疫误差。从本文检测过程来看，RBPT 检测法检测效率较高，SAT 检测精度更加准确，故而RBPT 法可作为实验室检查初筛试验。

5 结语

综上所述，在布鲁氏菌病实验室检测中，RBPT法具有检测成本低、操作简单的特点，同时其反应时间较短，4 min 内即可对检测结果做出迅速判断，但其检测精度尚有待提升，故可作为实验室检查初筛试验，不能作为确证试验。SAT 法检测过程及耗时较长，但准确效率高，可作为确证试验，用于布鲁氏菌病的深入分析。临床中需结合布病发病规模及缓急程度选择合适的检测方法。