新生血管性青光眼患者血清及房水中Klotho和Endothelin-1的表达及意义

谭蔚 张朝军 陈伯凡 胡杰

新生血管性青光眼(nonvascular glaucoma，NVG)是一种临床上较为常见的继发性青光眼疾病，该病可以随着视网膜静脉阻塞、视网膜缺血综合征及糖尿病性视网膜病变等缺血性疾病的发病率逐年上升，而导致新生血管性青光眼的发病率也逐渐上升[1,2]。KLotho是一种新发现的蛋白质，推测其在衰老过程中具有重要作用；而血浆内皮素-1(Endothelin-1，ET-1)是一种作用于抑制血管内皮细胞生长的特殊因子[3,4]。根据上述观点，本研究以重庆普瑞眼科医院和重庆市江津区中心医院经临床诊断收治的92例新生血管性青光眼患者、81例原发性青光眼患者以及73白内障患者为研究对象，探讨新生血管性青光眼患者血清及房水中Klotho和ET-1的表达及临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 将重庆普瑞眼科医院和重庆市江津区中心医院2015年3月至2018年11月经临床诊断并收治的92例新生血管性青光眼患者纳入新生血管性青光眼组，另选取同一时间就诊的81例原发性青光眼患者和73例白内障患者分别纳入原发性青光眼组和白内障组。3组之间性别比、年龄、体重指标、病史情况等一般资料差异无统计学意义(P>0.05)。研究对象均知情同意并签署自愿参与本次研究相关文件。本研究经过医院伦理委员会审批。见表1。

表1 3组一般资料比较

1.2 纳入与排除标准

1.2.1 纳入标准：①符合新生血管性青光眼诊断标准[5]的患者；②无精神疾病史、意识清晰且能够良好沟通的患者。

1.2.2 排除标准：①长期服用或者使用糖皮质激素的患者；②有严重肝、肾功能不全或其他严重器质性疾病的患者；③存在免疫系统疾病或者内分泌系统疾病的患者。

1.3 指标测定方法[6，7]所有受试者保证清晨空腹，次日早晨约8∶00时抽取静息状态下肘静脉3 ml血液，置于离心机中，4℃下2 000 r/min离心10 min(离心半径为5.4 cm)，取上清液0.3～0.4 ml至无菌管内。所有受试者平躺于手术台上，完成相应消毒、冲洗以及麻醉后，使用眼睑撑开器撑开眼睑的同时使用注射器从角膜缘进入前房，抽取0.15～0.20 ml房水后立即置入无菌管内。采用酶联免疫吸附试验对所有标本进行血清以及房水中的血浆ET-1和Klotho蛋白水平的检测。

2 结果

2.1 3组患者血清及房水中Klotho和ET-1水平比较 新生血管性青光眼组患者血清及房水中Klotho水平明显低于原发性青光眼组和白内障组，且原发性青光眼组明显低于白内障组(P<0.05)；新生血管性青光眼组患者血清及房水中Endothelin-1水平明显高于原发性青光眼组和白内障组，且原发性青光眼组明显高于白内障组(P<0.05)。见表2。

组别Klotho(ng/ml)血清房水ET-1(pg/ml)血清房水新生血管性青光眼组(n=92)35.52±4.8950.48±2.641.45±0.071.58±0.08原发性青光眼组(n=81)49.03±10.96*56.37±10.22*1.17±0.09*1.16±0.34*白内障组(n=73)56.32±7.67*#65.07±12.33*#1.02±0.06*#0.98±0.06*# F值6.65310.25722.1234.101 P值0.0020.001<0.0010.043

注：与新生血管性青光眼组比较，*P<0.05；与原发性青光眼组比较，#P<0.05

2.2 3组患者血清及房水中其他临床指标水平比较 新生血管性青光眼组患者血清及房水中VEGF、IL-6以及PEDF水平明显高于原发性青光眼组和白内障组(P<0.05)，且原发性青光眼组明显高于白内障组(P<0.05)。见表3。

2.3 血清及房水中Klotho和Endothelin-1水平与各项生化指标的相关性分析 在新生血管性青光眼组中，Klotho水平与年龄无相关性(P>0.05)，与VEGF、IL-6以及PEDF水平呈负相关(P<0.05)；Endothelin-1水平与年龄相关性无统计学意义(P>0.05)，与VEGF、IL-6以及PEDF水平呈正相关(P<0.05)。见表4。

3 讨论

新生血管性青光眼疾病的病因以及发病机制等各方面都十分的复杂，且治疗难度大，该病患者若无法得到及时有效的治疗则会严重影响甚至损伤患者的视力功能[8]。该病是因为虹膜表面或者前房角生成新生血管，导致小梁网以及周边的虹膜组织发生粘连，从而引起患者的眼球内部眼压升高的疾病[9,10]。其主要的病因是纤维血管膜收缩牵拉，使房角关闭，引起眼压升高和剧烈疼痛[11]。鉴于这种青光眼的起因是新生血管而不是眼内出血，Weiss等于1963年提出了新生血管性青光眼的名称，该病严重影响了患者及其家属的生活质量，给很多家庭带来了各种各样的问题，因此如何有效的治疗和诊断新生血管性青光眼是临床上需要迫切解决的问题之一[12,13]。

组别VEGF(μg/L)血清房水IL-6(ng/ml)血清房水PEDF(pg/ml)血清房水新生血管性青光眼组(n=92)504.3±41.21118.4±159.7292.4±22.7691.2±50.198.63±6.72302.62±53.34原发性青光眼组(n=81)341.6±21.6*359.1±21.1*103.5±13.2*167.3±2.0*74.93±5.36*257.11±46.19*白内障组(n=73)174.2±16.3*#184.8±17.2*#86.1±12.7*#92.2±9.6*#69.57±4.96*#228.64±42.17*# F值3.1713.38023.91237.1036.65352.180 P值0.0450.037<0.001<0.0010.002<0.001

注：与新生血管性青光眼组比较，*P<0.05；与原发性青光眼组比较，#P<0.05

表4 血清及房水中Klotho和Endothelin-1与生化指标相关性分析

本次试验采用酶联免疫吸附试验对所有标本进行血清以及房水中的ET-1和Klotho蛋白水平的检测。采用单因素方差分析比较，多重比较采用SNK-q检验。结果显示新生血管性青光眼组患者血清及房水中Klotho水平明显低于原发性青光眼组和白内障组，且原发性青光眼组明显低于白内障组(P<0.05)；新生血管性青光眼组患者血清及房水中ET-1水平明显高于原发性青光眼组和白内障组，且原发性青光眼组明显高于白内障组(P<0.05)。其原因可能是因为结缔组织的收缩是造成粘连性房角关闭的原因，而血浆ET-1可以特异性的直接作用于血管内皮细胞，显著的抑制其的增殖和迁移[14,15]。

本次实验结果显示新生血管性青光眼组患者血清及房水中VEGF、IL-6以及PEDF水平明显高于原发性青光眼组和白内障组(P<0.05)，且原发性青光眼组明显高于白内障组(P<0.05)。有许多的研究发现Klotho因子的表达可以收到许多的因素所调节，同时其还参与了炎性反应、氧化应激反应甚至是病理性尿毒素的调控[16,17]。本次实验采用相关性分析方法探讨血清及房水中Klotho和血浆ET-1水平与各项生化指标的相关性。结果显示在新生血管性青光眼组中，Klotho水平与年龄无相关性(P>0.05)，与VEGF、IL-6以及PEDF水平呈负相关(P<0.05)；Endothelin-1水平与年龄相关性无统计学意义(P>0.05)，与VEGF、IL-6以及PEDF水平呈正相关(P<0.05)。Klotho基因经研究发现其分布于神经以及心血管系统中，与内皮细胞、舒张血管细胞以及平滑肌细胞等细胞组合的生长密切关联[18，19]。同时，Klotho因子的下调对氧化反应起着一定的作用，其可以导致过氧化氢浓度的降低，减少过氧化氢所诱导的细胞凋亡[20]。

综上所述，新生血管性青光眼患者血清及房水中Klotho和ET-1均存在异常表达，且与VEGF、IL-6以及PEDF水平具有相关性，可以作为一种参考新生血管性青光眼疾病发生或者发展的生物指标。