不同浓度维生素C 对小鼠肝氧化损伤的修复效果

贾曰旺，曹安，肖燕，吴颜，姚海龙，李禹韬

（川北医学院 四川 南充 637000）

0 引言

维生素C 是水溶性维生素，最初最要用于治疗和预防坏血病，随着现代科学的不断发展，研究表明维生素C 具有其它方面重要的功能。维生素C 可调节体内胆固醇代谢，可通过抑制胆固醇的合成减少机体内胆固醇的含量，故其在抗动脉粥样硬化过程中发挥着重要作用；维生素C 在胶原蛋白合成过程起促进胶原脯氨酸合成的作用，有利于结缔组织的形成，伤口的愈合；维生素C 能在诱导性多功能干细胞的产生过程中发挥着一定的作用；维生素C 对过氧化物诱发的抑制缺口衔接点细胞间交流来防止细胞的癌变 ；维生素C 可以阻断亚硝酸盐形成亚硝酸胺而抑制癌症；维生素C 具有抗氧化作用，通过还原作用清除有害氧自由基的毒性，自由基是机体反应产生的有害物质，具有很强的氧化性，可损害机体的组织和细胞，从而造成一系列的慢性疾病，如·OH、R·和O2-[1]。肝脏具有很强的新陈代谢能力，并能产生大量的自由基，是研究活性氧致衰老的理想材料[2]。超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-px）是机体主要的抗氧化酶，起清除有害氧自由基的作用，其含量可以大致反映机体氧化损害程度。维生素 C 有很强的体外清除活性氧自由基的作用，可应用于抗氧化保健食品中，通过此次研究，探究市场上销售维生素C 对D-半乳糖诱导小鼠肝氧化损伤的修复效果。

1 资料与方法

1.1 一般资料。动物 SPF 级昆明种小鼠（普通小鼠）35 只，体重（25±2）g，雌雄各半，由南充市川北医学院实验动物中心提供。维生素C（天津市恒兴化学试剂制造有限公司）；D-半乳糖（合肥博美生物科技有限责任公司）；总超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒、丙二醛（MDA）测定试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH）测定试剂盒、总蛋白（TP）测定试剂盒，由南京建成生物工程研究所提供；酶标仪，移液枪，721 型分光光度计，电子天平，低速离心机，匀浆机。

1.2 氧化损伤模型制备。将35 只小鼠适应性喂养一周后采用随机数字表法随机分为12 组：空白组、模型组、实验第1、2、3、4、5 组每组5 只。除空白组外，其它组每日腹腔注射D-半乳糖100 mg/kg，空白组注射等剂量生理盐水，腹腔注射前均需酒精消毒；半小时后，实验第1、2、3、4、5 分别使用25 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg、500 mg/kg 维生素C 灌胃进行实验干预，空白对照组和D-半乳糖模型组灌胃20 mL/Kg（NaCl 溶液（0.9%））的生理盐水，持续28 d 后处死小鼠，测定各项生化指标。

1.3 生化指标测定。解剖小鼠，迅速取出肝脏，生理盐水冲洗后用滤纸吸去水分，取 1.5 g 肝组织，剪碎后置于玻璃匀浆器中，加 9 倍体积预冷生理盐水，制成 10% （W/V）的肝组织匀浆，3 000 r/min 离心 10 min，取上清液测定肝脏SOD、GSH-Px 活性及 MDA 含量。血清和肝脏中 SOD、GSH-Px 活性及 MDA 含量均按试剂盒说明书及其公式测定。

MDA 含量（nmol/mgprot）=（测定OD 值-对照OD值）÷（标准OD 值-空白OD 值）×标准品浓度÷待测样本蛋白浓度

SOD 活力（U/mgprot）=SOD 抑制率÷50%×（反应体系/稀释倍数） ÷待测样本蛋白浓度

GSH-px 酶活力（活力单位）=（非酶管OD 值-酶管OD 值）÷（标准管OD 值-空白管OD 值）×标准管浓度×稀释倍数÷反应时间÷（取样量×样本蛋白含量）

2 结果

测得小鼠肝脏组织MDA、SOD、GSH-px 的含量结果见表1。

表1 肝组织中不同组别MDA、SOD、GSH 活性检测结果

从表1 中可以看出，模型组中小鼠肝组织MDA 较空白对照组增加，而SOD 较空白对照组减少，说明造模成功。实验组中随着维C 浓度的升高，MDA 含量较模型组逐渐降低，但当维C 达到一定的浓度后，其值反而上升；SOD 含量较模型组组件升高，但当维C 达到一定的浓度后，其值反而下降；GSH 变化不太明显。MDA、SOD 的变化表明维C 对D-半乳糖诱导小鼠肝氧化损伤有修复效果，且与浓度相关。

3 讨论

在一定时间内通过腹腔连续注射D-半乳糖，使机体细胞内半乳糖浓度增高，在醛糖还原酶催化下，还原成半乳糖醇，该物质不能在细胞内进一步代谢而堆积，影响细胞正常渗透压，导致细胞代谢紊乱，自由基堆积，造成细胞损伤；糖代谢的紊乱进而影响到蛋白质、脂质的代谢，也影响到细胞内抗氧化酶的合成，从而使细胞清除自由基的能力下降[3]。维生素C 具有抗氧化作用，但当其过量，可表现为促氧化作用，Guidarelli 等将 U937 细胞暴露于脱氢抗坏血酸中，能增强过氧化亚硝酸盐诱导的 DNA 损伤，进一步证明了细胞内维VC 能够增强DNA 的单链损伤，而这主要是通过 VC 的促氧化作用引起的，对其机理的解释有较多说法[4]。在临床上，过高的维生素C 剂量会产生毒副作用，对机体DNA 造成损伤，从而诱发癌变。故维生素C 的抗氧化、抗癌等机制还需进一步研究，用于保健食品中，剂量的多少应严格把控，使其安全的用于生活中。