基于国标血常规参考区间的验证分析

杜桂艳，唐生尧，皮丰华，熊建，徐瑶

（1 恩施市妇幼保健院检验科，湖北 恩施；2 湖北民族大学附属民大医院检验科，湖北 恩施）

0 引言

参考区间，俗称参考范围，是两参考限之间包括两参考限的区间，通常是参考分布中间95%区间。临床医生根据参考区间对病人进行检验报告的解释。不适宜的参考区间给医生的诊疗工作带来不便，甚至导致不合理的医学干预。血细胞分析参考区间行业标准指出，实验室应首选通用参考区间[1]。目前实验室在用的参考区间来源于教科书或厂家说明书，国标WS/T405 建议进行一定标本数的适用性验证分析。恩施地区具有独特的地域环境和多少数民族，通过对引用的WS/T405 血细胞分析参考区间进行验证，为本科室选择符合所服务人群的参考区间提供依据。

1 参考个体的选择与实验方法

1.1 参考个体的选择

从本地免费婚检和免费孕前优生健康检查人群中募集，按照WS/T405-2012 筛选标准，筛选出符合下列条件的人群：（1）自觉健康，无血液系统疾病（贫血、白血病、血小板疾病）和急慢性感染；（2）目前无就医治疗情况；（3）近期未服用过任何药物；（4）近期未曾献血或输血；（5）无完全素食或节食等特殊饮食；（6）无高血压、高血脂；（7）近期未做剧烈运动；（8）未长期饮酒或1 周内大量饮酒；（9）无吸烟量＞20 支/d；（10）女性未处于特殊时期如月经期或妊娠期。最终确定了男女健康参考个体。

1.2 仪器与试剂

仪器为日本sysmex XN-2800 全自动五分类血细胞分析仪；试剂为日本sysmex XN-2800 原装配套试剂和质控品。

1.3 实验方法

1.3.1 检测系统

按照仪器标准操作规程对仪器进行日常操作和维护保养，每日用中值浓度水平的质控品进行室内质控，质控结果在控，变异系数CV 也在允许范围内，确保了仪器的精密度。本年度参加湖北省临床检验中心的三次室间质量评价成绩均为100 分。

1.3.2 样本的采集与检测

按照样本采集手册，进行参考个体血液样本的采集。（1）参考个体准备：采血者未突然改变正常生活饮食习惯，3d 内未做剧烈运动和重体力劳动，采血当天至少空腹8h 以上。（2）采血：参考个体采取坐位，真空静脉采血，抽取肘静脉血2ml 于紫色抗凝管内，颠倒混匀。（3）上机检测：按照仪器和项目标准操作程序进行样本检测，对白细胞（white blood cell ，WBC）计数、红细胞（red blood cell ，RBC）计数、血红蛋白（hemoglobin，Hb）、红细胞比积（hematocrit，Hct）和血小板（platelet ，PLT）计数这5 个项目的检测结果进行记录。

1.3.3 剔除离群值

离群值检验采用 Dixon 方法。首先分别将5 个项目的检测结果按照大小排序并计算极差 R，然后分别计算最大值和最小值与其相邻数值之差 D(Dmax 和Dmin)，若 D/R ≥1/3则将最大值或最小值视为离群值予以剔除。将余下数据重复前述步骤进行离群值检验，直至剔除所有离群值。剔除离群值后则另选参考个体直到补足20 个数据。最终保留了每个项目各20 个合格实验数据。

1.3.4 参考区间的验证

根据WS/T405 的验证要求，将参考个体检测值与引用的参考区间比较，计算比率R ，比率（R）= 检测值在引用区间的参考个体数/总的参考个体数。若R ≥ 90%，验证结果可以接受，说明可以引用该参考区间；若R ＜ 90%，则分析查找原因后重新进行参考区间的验证 ，即另选至少20 名合格参考个体,重新按照上述判断标准进行验证。

2 结果

2.1 离群值检验

采用 Dixon 方法，WBC、RBC、Hb、PLT 和Hct 这5 个项目的所有检测结果的D/R ＜1/3，说明所收集的检测数据为合格的实验数据，见表1。

表1 离群值检验

表2 参考区间验证结果

2.2 所得检测结果与参考区间比较

落在参考区间的数据大于90%，表示验证通过，可直接使用参考区间，见表2。

3 讨论

参考区间是解释检验结果、分析检验信息的基本尺标，是临床判断受试者健康与否的依据，实验室必须保证给临床提供的参考区间正确实用，否则会导致漏诊、误诊。本科室服务的主要人群集中在18-59 岁，因此本次实验选取的参考个体年龄设置在18-59 岁，未纳入儿童参考个体。儿童因其生长发育的生理性原因，其全血细胞计数参考区间与成人存在较大差别，成人的参考区间并不适用于儿童[2]。在男、女之间RBC、Hb、Hct 三项的参考区间由于性别差异，参考区间具有统计学差异[3]，所以在验证过程中RBC、Hb、Hct 三项需要分别收集至少20 名参考个体验证男、女的参考区间。在RBC、Hb、Hct 三项结果有性别差异，主要原因是男性睾酮水平表达高于女性，而睾酮会促进促红细胞生成素的分泌，使RBC、Hb、Hct 相应增高，故男性RBC 相关参数高于女性[4]。WBC 在男、女性别间差异无统计学意义[5]。

本次试验是在仪器性能可靠，室内质控在控，室间质量评价成绩100 分的前提下进行的，选择了本地区健康参考个体男女至少20 名进行的参考区间验证。在WBC、RBC、Hb、、Hct、PLT 这五项结果均落在WS/T405 血细胞分析参考区间范围内，表示验证通过，与同类报道相似[6]。由于医学教材血常规参考区间与卫生部WS/T405 血细胞分析参考区间范围不一致，在临床应用中是否需要修改统一，仍需进行临床科室的验证和探讨[7]。在日常工作中，我们不仅要为临床发出及时可靠的检测报告，还应提供合理的参考区间，为临床医生判断病情和给予治疗提供诊断依据[8]。