两种结核菌培养基培养抗酸杆菌评价研究

李昌锦，杨 洁*

（联勤保障部队第900医院梅峰院区检验科，福建 福州 350001）

结核病一种传染病，尽管病情进展较慢，但是实际上依然是严重威胁着患者的健康。现阶段，在对结核病诊断过程中，主要是采用分离培养抗酸杆菌的方式，不仅仅是为了早期发现，也是为了促进治疗。在选择合适的结核菌培养基进行培养时，如何选择阳性率高且污染率低的培养基，近些年来始终是结核病诊断的重点[1]。那么，我院通过对两种结核菌培养基培养抗酸杆菌评价，在探究中大有收获。现在把我院对两种结核菌培养基培养抗酸杆菌的评价情况报告如下：

1 资料和方法

1.1 一般资料

以我院收治疑似肺结核患者的50份痰标本作为研究对象，同时选择20份H37Rv标准菌株。实验中自制的罗氏培养基的主要成分有新鲜鸡卵液、6%孔雀绿、甘油、磷酸二氢钾、枸橼酸镁、蒸馏水等，参照《临床技术操作规范结核病分册》进行配制。

1.2 方法

首先，液化痰标本，视标本性状，加入1-2倍体积的消化液（N-乙酰-L-半胱氨酸-4%氢氧化钠）在涡旋振荡器上振荡1分钟，使痰标本充分匀化，室温静置15分钟后分别于实验室自制的罗氏培养基与贝索罗氏培养基中进行接种，接种量为0.1ml，接种后来回晃动，使标本均匀铺于斜面上，每份标本接种两支培养基。其次，H37Rv标准菌株用生理盐水在磨菌管中制备1麦氏浊度，按上述方法接种培养基。接种后斜面向上于37℃孵育箱中平放24小时后，检查培养基污染情况，拧紧瓶盖，将培养基竖直放置，37℃继续培养。接种后第三天、第七天各观察一次，此后每周观察一次，如有菌落生长，则进行抗酸染色涂片镜检以鉴别污染或分枝杆菌生长。最后，当确定为抗酸杆菌时，就以培养为阳性作为判断。当连续五十六天无菌落生长，就以阴性进行统计。

1.3 观察指标

观察两种培养基上抗酸杆菌的阳性率、污染率及生长时间，同时也观察两种培养基上标准菌株的生长时间。

1.4 统计学方法

使用统计学软件SPSS 22.0，计量资料主要是用t来检验，计数资料主要是用x2来检验，P＜0.05差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两种结核菌培养基的阳性率与污染率比较

贝索罗氏培养基的阳性率为16%，实验室自制的罗氏培养基阳性率为16%，两组培养基的阳性率进行比较，P＞0.05，无统计学意义；实验室自制的罗氏培养基的污染率（12%）高于贝索罗氏培养基的污染率（2%），P＜0.05，差异有统计学意义。见表1。

表1 两种结核菌培养基的阳性率与污染率

2.2 两种结核菌培养基的生长时间比较

贝索罗氏培养基和实验室自制的罗氏培养基的痰标本培养时间比较，P＞0.05，无统计学意义；两种培养基比较，贝索罗氏培养基中标准菌株的生长时间较短，P＜0.05，差异有统计学意义。见表2。

表2 两种结核菌培养基的生长时间比较

3 讨 论

分枝杆菌培养并进行菌种鉴定是结核病病原学诊断的金标准，是确定结核病诊断和化疗方案的重要依据。由于抗酸杆菌在分离培养过程中，常常会受到诸多因素的影响，导致污染率大幅度增高，痰标本前处理液沉渣是培养污染率高的主要原因之一[2]，这时候就要为抗酸杆菌的培养选择最适合的培养基与采用正确的操作技术[3]。张皎月[4]在研究中表明，结核病具有传染性，该疾病的早期发现意义重大。在对结核病中痰标本中抗酸杆菌分离培养时，贝索罗氏培养基的污染率相对较好，这主要是：一、贝索罗氏培养基添加成分更多，二、可能是由于自制的罗氏培养基灭菌效果不佳。痰标本前处理是影响阳性率与污染率的重要因素，痰液成分复杂，含有的菌量大且广，前处理可杀灭杂菌控制污染率，同时为了尽可能保存分枝杆菌的活力，前处理过程应不超过20分钟。张永强[5]等在研究中强调，在抗酸杆菌的培养过程中，采用贝索罗氏培养基去培养标准菌株的时候，标准菌株的生长时间就会大大缩短，至少，生长时间会大大小于自制的罗氏培养基。

对此，我院通过对抗酸杆菌进行贝索罗氏培养基和实验室自制的罗氏培养基进行分离和培养，研究结果表明，贝索罗氏培养基和实验室自制的罗氏培养基的阳性率比较，P＞0.05，无统计学意义。同时，实验室自制的罗氏培养基的污染率是12%，高于贝索罗氏培养基的污染率（2%），P＜0.05，差异有统计学意义。贝索罗氏培养基和实验室自制的罗氏培养基的痰标本培养时间比较，P＞0.05，无统计学意义；两组培养基中，贝索罗氏培养基中标准菌株的生长时间较短，P＜0.05，差异有统计学意义。说明，贝索罗氏培养基应用过程中抗污染能力更强，更加适合日益复杂的临床标本，也更适用于标准菌株的传代培养。

综上所述，贝索罗氏培养基在培养抗酸杆菌上体现了较好的效果，且污染率低，值得在临床上推广应用。