高效液相色谱法检测辣条中喹诺酮类药物的方法

2020-05-06唐黎琼马媛媛彭英赵波邱会东

食品工业 2020年4期

唐黎琼，马媛媛，彭英，赵波，邱会东*

1. 通标标准技术服务（上海）有限公司（上海 200233）；

2. 重庆科技学院化学化工学院（重庆 401331）；3. 上海进出口检验检疫局（上海 200135）

辣条作为国内许多青少年、儿童喜欢的零食之一，大多数辣条等麻辣类食品[1-5]因生产环境不卫生，可能会导致拉肚子等肠胃现象，而不法商家为防止此类现象出现，非法向辣条等麻辣食品中添加具有抗菌普广、副作用小、价格便宜等优点的喹诺酮类抗生素，这类药物不仅会残留在食品里，逐渐增加细菌的耐药性，还会通过食物进入人体，危害人体健康，损害消化系统、神经系统、免疫系统等。然而，休闲食品辣条中喹诺酮类药物的分析研究在国内还未见相关报道，试验选取常见的氧氟沙星、诺氟沙星和环丙沙星3种喹诺酮类药物作为分析对象，建立一种液相色谱法检测辣条中喹诺酮类药物的分析方法，为国家相关职能监督管理部门更有效开展该类食品安全监控，并对国家监管部门制定相应检验方法标准提供一定参考。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

高效液相色谱仪（LC-20AD，日本岛津公司）；高速离心机（湖南湘仪离心机仪器有限公司）；旋涡混合器（美国Henry Troemner公司）；超声波提取仪（上海宁商超声仪器有限公司）；氮吹仪（上海安谱实验科技有限公司）。

甲醇、乙腈、乙酸和三乙胺（均为色谱纯试剂）；EDTA、柠檬酸、磷酸氢二钠、氨水、正己烷、乙酸乙酯（均为分析纯试剂）；氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星（均为标准品，源叶生物科技有限公司）。

辣条（重庆市售“长寿面”“面筋”“叫花鸡”“羊肉串”等4个不同辣条产品）。

1.2 试验方法

准确称取2 g辣条试样于15 mL离心管中，用移液管准确移取10 mL含1%乙酸的乙腈溶液于离心管中，涡旋振荡1 min，充分混合均匀后，放入超声提取仪中超声15 min，高速离心5 min，过滤上层清液。向残渣中加入5 mL含1%乙酸的乙腈溶液，重复操作，将2次上层清液用0.22 μm尼龙滤膜过滤至刻度试管中，放于40℃氮吹仪中吹至近干，加入2滴甲酸后，用甲醇定容到2 mL，滤液进行高效液相色谱检测，辣条类食品前处理及分析过程示意图如图1所示。

图1 辣条食品前处理及分析过程示意图

1.3 仪器测试条件

LC-20A高效液相色谱的色谱条件：岛津C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相A为0.1%磷酸水溶液（用三乙胺调pH至2.8），流动相B为甲醇；流速1 mL/min；柱温为室温；激发波长351 nm，发射波长465 nm；进样量10 μL；二元梯度洗脱。

2 结果与讨论

2.1 喹诺酮类药物荧光光谱

利用50 μg/mL喹诺酮类药物混合标准溶液在波长320～580 nm范围内进行最大发射波长（EM）的扫描，在波长252～445 nm范围内进行最大激发波长（EX）的扫描，3种喹诺酮类药物混合标准溶液的最大激发波长为351 nm，最大发射波长为465 nm，结果如图2所示。

图2 喹诺酮类混合标准溶液的激发和发射荧光光谱图

2.2 液相色谱流动相梯度洗脱条件的优化

根据喹诺酮类药物性质及相关文献[6-8]，选取C18色谱柱作为3种喹诺酮类药物的分离柱，以0.1%磷酸的水溶液（三乙胺调pH 2.8）-甲醇作为流动相进行梯度洗脱，每次进样量10 μL，流速1 mL/min，通过对比0.1%磷酸水溶液和甲醇不同配比构成的流动相，结合实际样品中杂质出峰时间在3～8 min，保证3种喹诺酮类药物出峰的保留时间在10～15 min，以及色谱峰分离度大于1.5，流动相梯度洗脱条件如表1所示，色谱流出曲线如图3所示。

表1 高效液相色谱流动相梯度洗脱条件

图3 梯度淋洗喹诺酮类药物色谱图

2.3 提取液种类的选择

辣条主要成分为小麦粉、辣椒、香辛料及防腐剂等，由于其基质及食品添加剂复杂，因此在样品前处理过程中，提取液的选择极为重要。根据待测组分的性质及相关文献[9-12]，准确称取2 g加标辣条置于15 mL离心管中，按照试验方法分别加入10 mL含1%乙酸的乙腈溶液、含10%高氯酸的乙腈溶液、乙酸乙酯和EDTA-Mcllaine缓存溶液4种提取液提取辣条中喹诺酮类药物并进行优化，通过试验发现乙酸乙酯会提取出较多的油脂，多次脱脂会导致待测组分的损失；含10%高氯酸的乙腈作提取液时，由于高氯酸沸点高，在氮吹仪中无法挥发浓缩，且高氯酸酸性太强，不宜进入色谱柱；1%乙酸的乙腈溶液提取效率明显高于EDTA-Mcllaine缓存溶液，1%乙酸的乙腈溶液提取液对喹诺酮类药物提取效率在80%～98%之间，因此选取1%乙酸的乙腈溶液作为试验提取液。