急性荨麻疹患者食物组过敏原特异性IgE定量检测分析

张凤杰 范梦娇 刘文博 孙艳茹 王振华

1潍坊医学院临床学院，山东潍坊，261053；2潍坊市人民医院皮肤科，山东潍坊，261041

荨麻疹是一种过敏性皮肤病，有15%～25%的人在其一生中可发作1次或1次以上[1]，荨麻疹的病因复杂，因此尽早明确过敏原是临床大夫和病人的共同期望，但是过敏原检测结果的准确性不高是经常遇到的问题。研究采用sIgE定量检测和OFC联合分析，以期判断sIgE定量检测的准确性，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料 416例均为2018 年6月至2019年10月期间于潍坊市人民医院就诊的急性荨麻疹(acute urticaria, AU)患者，其中男186例，女230例；年龄1岁～81 岁，平均年龄为(27.0±21.5)岁，中位数为24(6，46)岁。所有患者均诊断明确，病程少于6周，且排除压力、寒冷、日光等物理因素和感染、药物因素引起的荨麻疹；排除有其他全身性系统性疾病(如甲状腺疾病、系统性红斑狼疮及恶性肿瘤等)者；排除妊娠及哺乳期妇女；所有患者在测试前2周内未使用抗组胺药、糖皮质激素或免疫抑制剂。行OFC的排除标准：①患者1年内发生过严重过敏反应；②伴有病情不稳定哮喘；③曾有过敏性休克。所有受试者均获得知情同意。

1.2 检测试剂 采用江苏浩欧博(HOB)公司过敏原sIgE 抗体检测试剂盒(ELISA酶联免疫捕获法)定量检测sIgE，包括10项过敏原：花生、牛奶、鸡蛋、鳕鱼、大豆、小麦面粉、虾、螃蟹、牛肉、羊肉。

1.3 检测方法

1.3.1 血清sIgE抗体检测 以分离胶促凝管采取患者外周血 5 mL，3 000 r/min离心15 min后留取上层血清备用。实验步骤: 吸取50 μL血清标本、标准品及质控置于相应微孔中，室温孵育60 min(25℃)，用洗板机清洗3次，每次300 μL清洗液。在患者血清样本及质控中加入100 μL相应过敏原-生物素，在标准品中加入100 μL抗IgE抗体-生物素。封板，室温孵育30 min，用洗板机清洗3次，每次300 μL清洗液。每孔加入100 μL辣根过氧化物酶-链霉亲和素结合液，封板、室温孵育30 min，用洗板机清洗3次后，每孔加入100 μL TMB底物液，封板、避光、室温孵育30 min后加入100 μL终止液，5 min后用酶标仪在450 nm波长处读数。

1.3.2 食物经口负荷实验[2]在部分sIgE检测阳性且知情同意的患者中进行，患者病情处于稳定状态，即停药2周，治疗期间避免食用鸡蛋、牛奶。要求受试者均为空腹状态，由医生为受试者统一提供水煮鸡蛋和纯牛奶，摄入剂量见表1。每次摄入时间不超过5 min，每次摄入完成后观察30 min[3]。出现临床症状或最后一次摄入完成后，观察3 h，以明确实验成败。研究表明，sIgE阳性阈值在食物种类、患者年龄等因素下发生改变，具体参考数值见表2[4]。为避免发生严重过敏，我们仅对sIgE浓度为0.35～2.0 IU/mL的患者行OFC[5]，且所有受试者均在医院由专业医生指导进行实验，实验室备急救药物及设施(肾上腺素、沙丁胺醇、抗组胺药、吸氧设备等)。

表1 OFC鸡蛋及牛奶摄入剂量

表2 sIgE阳性阈值在不同食物种类及不同年龄的参考数值

1.4 结果判读 通过专用过敏原扫描分析软件(HOB提供)进行分析，sIgE浓度判定依据REAST分级：0级，检测不到(<0.35 IU/mL)；1级，低(0.35≤读数<0.70 IU/mL)；2级，中(0.70≤读数<3.50 IU/mL)；3级，高(3.50≤读数<17.50 IU/mL)；4级，非常高(17.50≤读数<50 IU/mL)；5级，很高(50≤读数<100 IU/mL)，6级，极高(≥100 IU/mL)。其中大于1级包括1级为阳性。OFC结果：服用后引起风团的为阳性，无反应的为阴性。

1.5 统计学方法 数据分析采用Excel及IBM SPSS Statistics 24.0进行统计分析，数据采用频数/百分比进行统计描述，组间比较采用Pearson卡方检验，理论频数小于1(或超过20%的格子理论频数小于5)组间比较采用Fisher确切概率法，检验水准α=0.05。P<0.05为存在统计学差异。

2 结果

2.1 食入性过敏原总体检测结果 在416例AU患者中，食物性过敏原中阳性检出率最高为鸡蛋56例(13.5%)，其中牛肉、羊肉和鳕鱼均未检测出有过敏者。其中对1种过敏原呈阳性反应者39例(9.3%)，同时对2种及以上过敏原呈阳性反应者76例(18.3%)。见表3。

表3 416例患者食入性sIgE检测结果 n(%)

2.2 食入性过敏原的性别分布 在416例患者中，男性患者186例，sIgE阳性者79例(19.0%)，女性230例，阳性者83例(20.0%)，男女间各食入性过敏原分布差异无统计学意义。见表4。

表4 416例患者食入性sIgE检测性别比较分析 n(%)

注：*Pearson卡方检验

2.3 食入性过敏原的年龄分布 将416例急性荨麻疹患者按照年龄分组进行统计分析，1～6岁人群sIgE阳性的检出率最高26.4%(110/416)；鸡蛋和牛奶在不同年龄段人群的阳性检出率存在统计学差异(P<0.05)。见表5。

表5 416例患者食入性sIgE检测各年龄组比较分析 n(%)

注：*Pearson卡方检验，* *Fisher确切概率法

2.4 OFC实验结果 鸡蛋sIgE阳性患者56例，浓度在0.35～0.70 IU/mL之间且同意行OFC的共36例，仅1例出现风团；浓度在0.70～2.0 IU/mL之间且同意行OFC的共11例，6例出现风团。牛奶sIgE阳性患者29例，浓度在0.35～0.70 IU/mL之间且同意行OFC的共16例，无人出现风团；浓度在0.70～2.0 IU/mL之间且同意行OFC的共8例，3例出现风团。

3 讨论

AU的发病机制包括IgE介导的和非IgE介导的机制，主要是IgE介导的肥大细胞活化和嗜碱粒细胞的激活[6]。有研究基于未成年AU人群得出，AU最常见的病因是感染(48.4%)，其次是食物(23.5%)，特发性病因(13.2%)，药物(11.5%)，吸入剂(1.7%)，蚊虫叮咬(1.5%)和接触材料(0.2%)[7]。与本试验结果27.6%食物过敏原阳性基本一致。详细的病史询问和体格检查有时难以确定其病因，此时过敏原检测就显得尤为重要。

血清sIgE检测是国内外公认的过敏原检测手段之一[8]，我们采用的是新一代全定量检测试剂，采用酶联免疫捕获法对样本进行全自动分析，此法可去除IgE抗体干扰并完全捕获血清中的sIgE，灵敏度达到0.008 IU/mL,并且试剂盒与其他免疫球蛋白的交叉反应率均小于0.04%,准确性好、精密度高。开放式OFC是由试验者提供天然食品，食品不进行遮蔽，也不会提供安慰剂的一种食物激发试验[9]，适用于临床工作，被认为是在已经确定需要OFC的情况下，评估食物过敏的首选方法。

目前国内尚无基于AU患者此类研究数据，本研究结果显示，共71例患者同意行OFC，10例(14.1%)为阳性，故85.9%的sIgE检测阳性患者无需行OFC。Fleischer等[10]对食物过敏的儿童人群(并非全是AU)进行OFC验证得出11%结果为阳性，即89%的sIgE检测阳性患者行OFC结果为阴性。本研究结果与此结果基本一致。分析sIgE检测结果与临床症状不符可能与sIgE检测存在假阳性有关，其原因主要有四个方面：(1)食物过敏原蛋白组分的复杂性，一种食物往往含有多种可易导致过敏的蛋白质[11]，而目前国内还没有将食物蛋白组分过敏原检测应用于临床，有可能导致IgE检测阳性的蛋白组分在食物的加工烹调过程中失去了它的抗原性，或者检测到的不是引起过敏反应的主要抗原[12]；(2)IgE抗体耗竭，本来血清中IgE抗体浓度就很低，而急性发作后短期中和了大量抗原导致血清中抗体含量微乎其微[13]，不足以激发变态反应；(3)存在交叉反应性糖类抗原决定簇，其仅能产生与过敏原结构类似的sIgE抗体，不能使肥大细胞活化，故仅能测出sIgE阳性而无临床症状[11]；(4)AU发病机制的复杂性，虽然检测到了特异性IgE抗体，只能表示机体处于一种敏感状态，不一定发病，或者是非免疫机制的发病[10]。

本研究有一些局限性。首先，并不是对所有可疑食物行OFC验证。其次，本研究采用开放式OFC，而不是诊断食物过敏“金标准”的双盲安慰剂食物激发试验。目前国内单一过敏原检测手段并不完美，之前研究发现，皮肤点刺试验检测食物过敏的敏感性高，特异性低，而sIgE敏感性低，特异性高[14]，今后可开展二者联合诊断AU患者食物过敏的研究。且今后的研究重点在行大样本量临床实验以期得出适合我国人群的食物sIgE阳性预测值上。