2010-2019年海南省梅毒血清学试验室间质量评价结果分析

张丽芬 钟 娜 陈 琴 乔 凤

海南省皮肤病医院，海口，570206

梅毒是一种常见的性传播疾病，梅毒的临床表现复杂，病例的筛查、诊断、治疗效果判定等依赖于血清学试验结果，因此梅毒实验室诊断的正确性显得尤为重要[1]。2010年海南省性病中心实验室通过海南省卫生和健康委员会及国家专家组考核验收，负责全省医疗机构性病实验室规范化建设及治疗管理，根据《海南省性病实验室等级评定》的工作要求，对全省二级及以上的医疗机构开展梅毒血清学试验室间质量评价活动，现将2010-2019年10年间全省梅毒室间质量评价结果整理分析，报道如下。

1 材料与方法

1.1 质评对象 全省二级及以上的医疗机构包括各市县皮防所、疾控中心和开展性病诊疗业务的医疗卫生机构。

1.2 质控品 2010-2014年考核品由海南省性病中心实验室制备，血浆来源于血液中心,分别经过乙型肝炎病毒抗体、丙型肝炎病毒抗体和HIV抗体检测均为阴性,进行非梅毒螺旋体抗原及梅毒螺旋体抗原血清学试验,选择非梅毒螺旋体抗原及梅毒螺旋体抗原血清学试验均为阳性且滴度不同的血浆3份，阴性血浆2份，经 56℃ 30 min灭活、离心、用0.2 μm细菌滤器抽滤除菌后，用冷冻管分装编号并置于-70℃冰箱备用，每份质控品随机抽取10支进行均匀性试验和稳定性试验，其中梅毒螺旋体抗原血清学试验的均匀性和稳定性试验分别采用梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)、酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)和免疫层析快速检测(TP-RT)，非梅毒螺旋体抗原试验采用甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)，上述试验结果均由两位经过培训实验人员分别判读，试验合格后质控品在冷藏运输条件下分发至全省各参评医疗机构；2015-2019年考核品购自北京康彻思坦生物技术有限公司，同上也进行了均匀性和稳定性试验，试验合格后质控品在冷藏运输条件下分发至全省各参评医疗机构。每家单位质控标本5份，每份500 μL。随质控品发放的还有本次活动的通知及结果回报表。

1.3 质评方法 各参评单位领取质控品后，在规定检测期内分别按照日常使用的非梅毒螺旋体抗原血清学试验和梅毒螺旋体抗原血清学试验检测试剂进行检测，其中非梅毒螺旋体抗原血清学试验需做定性和定量检测，梅毒螺旋体抗原血清学试验只需做定性检测。检测完成后，按要求将检测方法、试剂、结果等信息填写到结果回报表中，上报至海南省性病中心实验室汇总分析，并将结果反馈至各参评单位，并给成绩合格单位(非梅毒螺旋体抗原血清学试验和梅毒螺旋体抗原血清学试验成绩均≥80分)分发合格证书。

1.4 预期值确定 按照国家标准“临床试验室室间质量评价要求”，质控样品预期结果根据所有能参加能力验证的实验室检测结果确定。预期值根据全省80%以上参评单位的结果计算得出。

1.5 评分标准 梅毒螺旋体抗原血清学试验每份样本与预期结果一致得20分，否则得0分，共100 分；非梅毒螺旋体抗原血清学试验每份样本定性和定量结果与预期结果一致各得10分，否则得0 分，共100 分；分别以特异性与非特异性试验得分的50%计入总评成绩，90～100分为优秀，80～89分为合格，<80分为不合格。

1.6 统计学方法 应用Excel和R统计软件进行数据汇总与统计分析。P<0.05为有显著性差异。

2 结果

2.1 梅毒实验室室间质评结果总体情况 见表1。2010-2019年全省参评医疗单位的合格率和时间进行轶相关统计分析，轶相关系数为0.964，P<0.001，合格率随时间增长呈升高趋势。

2.2 不同类别机构成绩合格率 见表2。各机构合格率均随时间呈增长趋势,不同机构合格率之间做两两比对，妇幼机构与中医院、性病防治机构与综合医院之间无统计学差异(χ2=0.6192,P>0.05；χ2=2.0783,P>0.05),妇幼机构与性病防治机构、综合医院比较均有显著性差异(χ2=30.776,P<0.001；χ2=19.563,P<0.001)；中医院与性病防治机构、综合医院比较均有显著性差异(χ2=30.776,P<0.001；χ2=19.563,P<0.001)。

2.3 梅毒血清学试验结果符合率 见表3。2010-2019年梅毒血清学室间质评结果总符合率随时间呈递增趋势(轶相关系数为0.66，P<0.05)，非梅毒螺旋体抗原血清学定性、定量试验和梅毒螺旋体抗原血清学试验之间进行两两比对，差异具有统计学意义(χ2=80.876,P<0.05；χ2=7.8538,P<0.05；χ2=134.48,P<0.05)。

表1 梅毒实验室室间质评结果总体情况

表2 2010-2019年不同类别机构梅毒实验室室间质评结果合格率 %

表3 2010-2019年梅毒血清学室间质评的符合率 %

表4 各机构实验室开展梅毒血清学试验情况 %

表5 梅毒螺旋体抗原血清学试验方法使用情况 %

2.4 各机构实验室开展梅毒血清学试验情况 见表4。开展两类梅毒血清学试验的医疗机构比例随时间呈递增趋势(轶相关系数为0.833，P<0.05)，仅开展一类梅毒血清学试验医疗机构比例随时间呈递减趋势。

2.5 质量考核试剂使用情况 参评单位非梅毒螺旋体抗原血清学试验检测试剂均为上海荣盛公司生产的TRUST试剂，而梅毒螺旋体抗原血清学试验检测方法分别有TPPA、梅毒螺旋体血球凝聚试验(TPHA)、 TP-ELISA、化学发光法(TP-CLIA)、TP-RT等，各方法使用情况见表5。

3 讨论

性病实验室质量控制对确保临床正确诊断和治疗非常重要，实验室室间质量评价作为一种质量控制工具，可以帮助分析实验室中存在的问题，使各级实验室检测能力逐步提高，并保持在较高水平[2-4]。海南省从开展梅毒血清学试验室间质量评价活动以来，参评单位数逐年增加，从2010年的46家到2019年的80家，这与室间评价越来越受到临床实验室重视、性病防控部门定期培训、督导工作密不可分，提示海南省梅毒实验室网络建设和质量控制工作得到了进一步加强。

从10年室间质量评价活动结果可看出，梅毒血清学检测总体水平有了显著提高，除2010年外，总体得分均大于85分，特别近两年，总体得分大于95分，合格率从2010年45.65%上升到2019年92.50%，并呈逐年递增趋势，说明海南省自2010年海南省性病中心实验室成立后，在全省医疗机构进行性病实验室规范化建设取得了一定成绩。其中不同机构类别中合格率也是逐年提高，但妇幼机构、中医院符合率比综合医疗机构和性病防治机构低，提示海南省妇幼机构、中医院实验室梅毒检测能力仍有不足，加强妇幼机构、中医院实验室能力建设十分必要。

从结果可看出，非梅毒螺旋体抗原血清学定性、定量试验和梅毒螺旋体抗原血清学定性试验三项试验平均符合率为95.04%、89.20%、97.38%，均略高于2015年全国平均水平(94.7%、88.8%、96.5%)，特异性试验的符合率明显高于非特异性试验，非特异性试验中定量检测符合率最低，这一结果与国内其他报道一致[5，6]，主要原因是非梅毒螺旋体血清学试验影响因素较多，如试验环境温度、光线、加样移液器的准确度、反应时间、凝集反应判断的主观差异性等因素都会影响到试验结果的准确性。此外未使用正确的设

备水平旋转仪进行检测也是结果不准确的原因之一，在2019年室间质量评价结果回报调查中发现将近有20%未使用合格的水平旋转仪。非梅毒螺旋体抗原血清学定量试验应作为今后梅毒血清学检测技术培训的重点，并在技术指导中，加强对设备维护校准和实验人员岗前培训的重视。

梅毒血清学检测用于临床诊疗服务、血液筛查、流行病学监测、高危人群筛查和干预等目的时都需要结合非梅毒螺旋体抗原血清学试验和梅毒螺旋体抗原血清学试验的结果综合判断[7]。但通过质评活动的调查发现，2010年梅毒螺旋体抗原血清学试验和非梅毒螺旋体抗原血清学试验的两项都开展医疗卫生机构仅为65.22%。其中有32.60%单位未开展梅毒螺旋体抗原血清学实验，集中在综合医院和妇幼保健院，无梅毒特异性抗原血清学试验的实验室不能及时为临床医生提供梅毒确诊检测，影响了诊断的及时性，经过10年的全省性病实验室督导、培训工作，2019年仅有1家妇幼保健院未开展非梅毒螺旋体抗原血清学试验。

实验室检测方法是反映实验室检测能力和检测质量的重要指标[8]。本文的调查结果显示，梅毒螺旋体抗原血清学试验检测方法梅毒螺旋体血清试验试剂10 年来的使用率最高为TPPA，这可能与海南省性病中心实验室一直积极推广TPPA方法有关。其中将近50%妇幼机构中使用快速检测方法，虽然快速检测法具有快速简便等优点，但Mishra等[9]报道梅毒快速诊断试验诊断梅毒的敏感性及特异性分别为70.8%和 97.8%，该方法对活动性梅毒诊断的敏感性并不高，从而出现假阴性结果，建议有条件的实验室应选择参加国家性病中心参比实验室组织的梅毒血清学诊断试剂临床应用评估且质量好的试剂，保证检测结果的可靠性和稳定性。

总之,经过海南省10年的质控结果显示，室间质量评价对于促进梅毒实验室检测质量水平的提高起到了积极的作用。