一例鸡马立克氏病的病原学诊断

尹德晶， 陈 静， 杨 鹏， 谢晓东， 李乔斌， 王开功，2*， 程振涛，2， 岳 筠

(1. 贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025； 2. 贵州省动物疫病研究室，贵州 贵阳 550025； 3. 贵州省动物疫病预防控制中心，贵州 贵阳 550008)

2019年11月，福泉市某鸡场出现发病死亡病例，发病率17%，病死率6%。病鸡初期临床症状主要表现为精神沉郁，食欲减退，羽毛粗乱，随后部分病鸡出现共济失调，腿或翅膀单侧或双侧半瘫或全瘫，呈典型的“劈叉”姿势，排黄绿色稀粪，采食困难，脱水消瘦，突然死亡。剖检可见单侧坐骨神经肿大。根据临床症状尤其是神经症状和病理变化，初步诊断为神经型鸡马立克氏病。为了确诊感染病原，特进行实验室病原学诊断，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料无菌采集病鸡的脑、心脏、肝脏、脾脏、肾脏、关节囊积液作为检测病料。

1.1.2 主要试剂禽流感病毒通用型荧光定量RT-PCR试剂盒、新城疫病毒荧光定量RT-PCR试剂盒，均购自北京世纪元亨生物科技有限公司；马立克氏病病毒荧光定量PCR试剂盒，购自深圳真瑞生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 相关病毒核酸检测提取病鸡的肺脏、肝脏、脾脏、脑组织样品核酸，分别应用相应试剂盒进行禽流感病毒、新城疫病毒、马立克氏病病毒核酸检测。

1.2.2 鸡滑液囊支原体检测提取病鸡关节囊积液样品核酸，采用鸡滑液囊支原体特异性引物(上游引物MS1：5’-GCCATTGCTCCTGCTGTTATA-3’；下游引物 MS2：5’-GGGTAGTCCACTCGCATT-3’)进行滑液囊支原体PCR核酸检测。

1.2.3 细菌分离培养无菌操作取病鸡肝脏、肾脏、心脏、脾脏组织，接种于血琼脂培养基，37 ℃培养16 h观察结果。

2 结果

2.1 病毒核酸检测结果

2.1.1 新城疫病毒核酸检测由图1可见：阳性对照Cq值为22，检测样品无特定扩增曲线且Cq值为0，提示组织样品中不存在新城疫病毒。

2.1.2 禽流感病毒核酸检测由图2可见：阳性对照Cq值为24，检测样品无特定扩增曲线且Cq值为0，提示组织样品中不存在禽流感病毒。

2.1.3 马立克氏病病毒核酸检测由图3可见：阳性对照Cq值为22，检测样品Cq值为26且有特定扩增曲线，提示样品中存在马立克氏病病毒。

2.1.4 鸡滑液囊支原体核酸检测由图4可见：检测样品未扩增出773 bp大小的目的条带，鸡滑液囊支原体核酸检测结果为阴性，提示检测样品中不存在鸡滑液囊支原体。

2.2 细菌分离培养结果由图5可见：血琼脂培养基上无典型菌落生长，提示样品无细菌感染。

3 结论

经实验室病原学检测，确诊本病例为马立克氏病病毒感染。

4 讨论

4.1鸡马立克氏病是由疱疹病毒科的马立克氏病病毒引起的1种高度接触传染性、淋巴组织增生性肿瘤疾病，临床上以运动障碍、一腿或双腿麻痹、下痢等为特征，不同品种、日龄的鸡均可发病，以50～70日龄多见，各季节均可发生。本病表现型为4种类型：神经型、内脏型、眼型和皮肤型，内脏型和神经型多见[1]。马立克氏病是危害家禽养殖业的三大主要疫病之一，可感染鸡、火鸡、鹌鹑等，其中鸡最易感，哺乳动物不感染，临床上常和其他疫病发生混合感染[2～5]。马立克氏病病毒可通过呼吸道和消化道直接或间接传播，病鸡脱落的角化毛囊、毛屑及分泌物、排泄物等均是重要传染源[6]。神经型主要侵害外周神经， 以坐骨神经多见，病鸡表现为难以站立，呈一腿向前、一腿向后的“劈叉”姿势[7]。目前规范使用疫苗仍是防控马立克氏病的主要措施，由于具有高度接触传染性，减小鸡群的饲养密度和保持鸡舍良好的环境卫生对于减少该病的发生也具有重要作用。

4.2对于该病的防制，建议养殖场规范使用疫苗进行免疫，在雏鸡出生24 h内进行鸡马立克氏病疫苗皮下接种；发现病鸡立即扑杀，并对尸体进行无害化处理，鸡舍严格消毒，同群鸡进行隔离；进行种鸡净化和引种检测；加强饲养管理，注意微量元素和维生素的补充以提高鸡群免疫力；定期清洗和消毒鸡舍，合理安排鸡群饲养密度；注意避免人员活动带来的污染，外来人员进出要有消毒措施。