肤阴净洗剂挥发油提取工艺的研究

蓝晓步，许崇遥，董思喆，周 刚，梁颖娥，黄兴振

（1.南宁市第一人民医院药学部，南宁，530022；2.广西医科大学药学院，南宁，530022）

肤阴净洗剂是南宁市第一人民医院根据妇科阴部炎症的病因和治疗原则制定的一种中草药制剂，主要含有苦参、小叶桉、黄柏、蛇床子、白鲜皮、苍术、薄荷脑、艾叶等，洗剂工艺为先提取挥发油，再水提醇沉最后而得到。临床证实肤阴净洗剂具有清热解毒，杀虫止痒，祛风除湿等功效，被广泛应用于阴道炎、外阴瘙痒、湿疹、体股癣、痱子等。为进一步实现肤阴净阴净洗剂的产业化，在不对原生产工艺进行质的改变的前提下，逐步完善细化工艺参数。而提取挥发油作为肤阴净洗剂制备工艺的关键，其中含挥发油成分的药材小叶桉、苍术、蛇床子及艾叶，为了后续产业化关键技术开展研究，本实验进行了肤阴净洗剂挥发油最佳提取工艺条件的优选。

1 相关材料

1.1 药材及相关材料

苍术、蛇床子、艾叶（南宁生源中药饮片有限责任公司），执行标准：《中国药典》2015年版一部。从吴圩采摘的小叶桉经过广西医科大学中药学教研室老师鉴别确定为小叶桉。对照品：桉油精（成都德思特生物技术有限公司）。色谱纯乙腈（成都市科隆化学品有限公司）

1.2 实验条件

色谱条件：色谱柱：Dikma Kromasil C18（250 mm×4.5 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（64:36）；流速：1.0 ml/min；检测波长：203 nm；柱温：30 ℃；进样量：1 μL。

1.3 相关溶液

①实验溶液：精密称取L9（34）正交表所得挥发油50 mg作为供试品，置于10 mL棕色容量瓶中，加入色谱乙腈稀释至刻度，摇匀，即得。②对照品溶液：称取桉油精对照品适量，精密称定，置于10 mL容量瓶中，加色谱乙腈至刻度，摇匀，成浓度为3.018 mg/mL的溶液。

2 挥发油提取工艺

2.1 高效液相线性关系考察

取配置好的桉油精对照品溶液（3.018 mg/ml）按照“1.5”项下色谱条件进样，进样体积分别为4 μl，5 μl，6 μl，7 μl，8 μl，9 μl，10 μl，记录挥发油中桉油精的峰面积。以桉油精峰面积Y对进样浓度进行线性回归，得到回归方程为：Y=83764X+15.798，r=0.9999。

2.2 精密度试验

取配好的桉油精对照品溶液（2.113mg/ml），高效液相连续进样6次，数据显示6次测定出提取挥发油中桉油精峰面积的RSD为0.84%。

2.3 重复性试验

取同批供试品，按照“1.6”项下制备6份供试品溶液，分别进样分析，记录峰面积，结果RSD值为0.67%，表明提取重复性好。

2.4 稳定性试验

取配好的挥发油供试品溶液，制备后0、4、6、8小时进样测定提取挥发油中桉油精的峰面积，结果0到8小时的桉油精锋面积的RSD值为1.8%，说明供试品溶液在8小时内稳定。

2.5 挥发油提取时间的选择

小叶桉、苍术、蛇床子、艾叶的主要有效成分为挥发油，本发明采用原工艺水蒸气蒸馏法提取挥发油，并以正交试验法L9（34）进行试验研究，筛选挥发油最佳提取工艺。

按照肤阴净洗剂处方量的3/10称取小叶桉150份，苍术30份，以及艾叶和蛇床子各22.5份，加入12倍水，浸泡时间为1小时，进行水蒸气蒸馏，记录4到8小时不同提取时间的挥发油量，并计算提取率，研究对挥发油提取率变化的影响。结果见表1：

表1 不同提取时间挥发油的提取率

结果表明，挥发油的提取率首先随着时间增加逐渐变大，6小时提取的挥发油的提取率最高为1.023%，4小时是0.976%，然后随着提取时间变长挥发油的提取率相应减少，产出的挥发油的颜色由开始的淡黄色加深为金黄色，并且提取时间超过6小时后容易焦锅，影响产品质量，为了保证收油率和产品质量，提取时间选定的上限为4小时，下限为6小时。

2.6 挥发油提取的正交试验

2.6.1 按照处方肤阴净洗剂中含挥发油的4位药材处方量的3/10称取，即小叶桉150份，苍术30份，艾叶和蛇床子各22.5份，然后加水浸泡1小时后开始进行水蒸气蒸馏，提取4位药材所含总的挥发油，量取挥发油体积，计算挥发油提取率，同时按照“1.6”项测定挥发油中桉油精的含量，并计算各试验号中挥发油中桉油精的总量。按L9（34）正交设计表进行以下试验（见表2），考察以下三个因素A（加水倍数）、B（浸泡时间）、C（提取时间）对提取的影响，以挥发油提取率和桉油精量为评价指标，筛选出挥发油提取最佳工艺条件。

2.6.2 正交试验结果 本实验以挥发油提取率和桉油精量为评价指标，讲两者的权重系数定为50%和50%，结果见表3。方差分析的结果见表4，影响提取效果的主次因素顺序为：A＞C＞B。结合正交分析结果和生产实际，最优方案为加14倍水，浸1 h，提取时间6 h，即A3B2C3。

表2 挥发油提取工艺的因素和水平表

表3 挥发油提取工艺正交试验结果

表4 挥发油提取工艺正交实验方差分析表

2.6.3 验证试验 为了验证工艺的稳定性，按筛选的最佳提取工艺提取3次，结果见表5.验证结果表明，所筛选的提取工艺条件稳定可行。

表5 验证试验结果

3 讨 论

水蒸气蒸馏法是目前实验室最常见的挥发油提取方法[1]，具有设备简单，容易操作，成本便宜等优点。在肤阴净洗剂工艺提取挥发油步骤过程中药材要注意控制干燥程度，尤其小叶桉药材的干燥程度尽量保持水分含量在5 %左右提取挥发油的量才能保持一定的稳定并且要时刻注意提取温度，不要过高，玻璃仪器要洗净，否则提取出的挥发油会变少颜色变金黄色，严重影响挥发油质量。

本研究发现加水倍数对于挥发油提取的量提高有显著意义，但是因素B、因素C对挥发油提取的量提高没有显著意义。在桉油精含量实验结果中表明在一定程度和结果上上，选择A1、B1、C1三个条件能使提取的挥发油中桉油精的含量提高。

肤阴净洗剂制备工艺中挥发油提取的最佳工艺条件为A3B2C3，即加水倍数为14 倍水，浸泡时间为1 小时，提取时间为6 小时，最后的挥发油量以及所含的桉油精的量相比较最好。