顶空气相色谱法测定舒尼铂中5 种有机溶剂残留量

2020-04-26杨晓燕沈红娅高安丽王京昆徐红贵

贵金属 2020年4期

杨晓燕，沈红娅，姜倩，高安丽，杨志，王京昆，徐红贵

(1.云南省药物研究所云南省中药和民族药新药创制企业重点实验室，昆明 650111；2.昆明贵金属研究所，昆明 650106)

恶性肿瘤(癌症)是严重威胁人类健康和生命安全的重大疾病，是继心血管疾病后的全球第二大死亡原因，每年导致的死亡人数超过800 万人。恶性肿瘤特点之一是肿瘤细胞不受控制的快速增殖，增殖需要DNA 的复制和转录，因此，DNA 是抗肿瘤药物的重要靶点。铂类药物就是一类以DNA 为作用靶点的无机抗癌配合物[1]，它们可破坏癌细胞DNA 结构和功能，造成癌细胞的凋亡，从而达到治疗的目的[2]。

含铂类药物的联合化疗一直是治疗胃癌的首选方案，但铂类抗癌药普遍存在肝肾毒性高，骨髓抑制毒性大，很多老年患者不能耐受，以及交叉耐用性等问题。因此，研制毒性小、对胃癌有较高疗效的新型铂类抗癌药物仍具有重要社会意义和经济价值。舒尼铂(如图1 所示)作为治疗胃癌药物舒泊的衍生物，具有我国自主知识产权[3-6]，它的研发正是以改善铂类抗癌药的肝肾毒性和骨髓抑制毒性为目的，从而达到提高患者的生活质量，延长生存期的最终目标。

图1 舒尼铂的化学结构式Fig.1 Chemical formula of Suniplatin

药品中的残留溶剂是指在原料药或辅料的生产中以及在制剂制备过程中使用、在工艺过程中未能完全去除的有机试剂[7]。人用药物注册技术要求国际协调会(ICH)将残留溶剂分为3 个类别，并明确规定了限度[8]。因此，为保障用药安全，控制残留溶剂十分重要。溶剂残留检测报道的文献[9-11]较多，但试剂种类不同。本文对舒尼铂原料药在合成工艺中使用的乙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、环己烷及1,4-二氧六环5 种有机溶剂建立分析方法，并进行方法学验证。

1 实验

1.1 仪器与试剂

Agilent GC 7890B GC System，配置有FID 检测器以及OpenLab CMS 工作站。Agilent 7694E 顶空单元。XP205 电子天平(Mettler Toledo)。

标准物质：乙醇(色谱纯，MERCK)；四氢呋喃(色谱纯，MERCK)；乙酸乙酯(分析纯，利安隆博华科技有限公司)；环己烷(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；1,4-二氧六环(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)。试剂：N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(色谱纯，MERCK)。

供试品：舒尼铂原料药，由云南省药物研究所提供。

1.2 试液配制

1) 对照品溶液。准确称取(精确至0.1 mg) 500 mg 乙醇、500 mg 乙酸乙酯、72 mg 四氢呋喃、388 mg 环己烷、38 mg 1,4-二氧六环，用总量为40 mL的DMF 溶解转移至100 mL 容量瓶中，用DMF 稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备溶液。取10.00 mL储备溶液至100 mL 量瓶中，用DMF 稀释至刻度，摇匀，得到的溶液中5 种有机物的浓度分别为500、500、72、388 和38 µg/mL 的溶液。分取2.00 mL置于20 mL 顶空进样瓶中，适当密封顶空进样瓶，作为色谱分析用对照品工作溶液。

2) 供试品溶液。称取舒尼铂原料药200 mg (精确至0.1 mg)，加2 mL DMF 溶解在20 mL 顶空进样瓶中，适当密封顶空进样瓶，作为色谱分析用供试品溶液。

1.3 色谱工作条件

色谱条件：DB-624 毛细管色谱柱(0.53 mm×30 mm；0.25 µm)，起始温度40℃，保持5 min，以5 ℃/min速率升温至80℃，再以20 ℃/min速率升温至200℃，保持3 min。检测器为氢火焰离子化检测器(FID)。检测器温度为250℃；进样口温度220℃。载气为氮气，流速为4 mL/min，分流比为10:1，氢气流量为40 mL/min，空气流量为400 mL/min，进样体积1mL。

顶空条件：平衡温度140℃，定量环温度150℃，传输管线温度160℃，样品平衡时间25 min。

2 结果与讨论

2.1 系统适用性

对照品溶液重复进样6 次，计算5 种溶剂的保留时间及峰面积的相对标准偏差(RSD)。结果显示5种溶剂保留时间及峰面积的RSD均小于5.0%，理论板数均不低于20000，分离度均大于2.0，符合定量测定要求。

2.2 专属性

以对照品溶液和空白溶液作为测试溶液进行色谱分析测定，所得色谱图如图2 所示。图2 中15 min后为空白溶剂(DMF)峰，不干扰检测。乙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、环己烷和1,4-二氧六环等5 种有机溶剂及DMF 间最小分离度为2.31，专属性良好。

2.3 线性范围

分取对照品储备溶液，分别加入不同体积的DMF 稀释，配制成不同浓度的系列对照品标准溶液，按浓度由低到高依次进行色谱测定，以峰面积(A)为纵坐标，浓度(C)为横坐标进行线性拟合。所得结果如表1 所列。根据表1 结果，线性拟合的相关系数(r)均在0.9991 以上，表明各组分溶剂在浓度范围内线性关系良好。

图2 5 种溶剂对照混合溶液气相色谱图Fig.2 Gas chromatograms of the five acontrol mixture solvents

表1 5 种有机溶剂的线性关系考察结(n=9)Tab.1 Results of investigation on linear relationship of 5 organic solvents (n=9)

2.4 检测限与定量限

逐级稀释各组分溶液，按1.3 进行测定，乙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、环己烷、1,4-二氧六环最低检出限(S/N≥3)及定量限(S/N≥10)如表2 所列。

表2 5 种有机溶剂的检测限(LOD)与定量限(LOQ)Tab.2 Limits of detection and quantification for 5 organic solvents

2.5 回收率

准确称取12 份舒尼铂原料药样品，分别加入高、中、低不同浓度(相当于对照样品工作溶液中5种有机溶剂浓度的120%、100%、80%)的混标溶液，平行制备3 份，其中3 份为空白样品溶液。计算平均回收率及RSD，结果列于表3。乙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、环己烷及1,4-二氧六环5 种有机溶剂平均回收率为98.68%～101.05%，RSD(n=9)为1.28%～2.07%。3 个浓度水平的平均回收率在在100%±10%范围内，RSD均不超过5.0%，符合定量要求。

表3 5 种有机溶剂回收率结果(n=9)Tab.3 Recovery results for 5 organic solvents (n=9) %

2.6 耐用性试验

以对照品溶液和供试品溶液作为测试溶液。通过改变载气流速、起始柱温和炉温评价方法耐用性，结果显示，在载气流速(4.0±0.5 mL/min)、起始柱温(40±5 ℃)、炉温(140±5 ℃)发生微小改变时，供试品溶液溶剂残留量无明显差异，对照品溶液各组分分离度良好，各参数无显著变化，此方法耐用性良好。